熒光偏振檢測方法有哪些

⑴ 熒光偏振技術原理

「原理 : 當熒光分子受平面偏振光激發時,如果分子在受激發時期(對於熒光素約持續 4納秒)保持靜止,發射光將位於同樣的偏振平面。如果在受激發時期,分子旋轉或翻轉偏離這一平面,發射光將位於與激發光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激發熒光素,可以在垂直的和水平的偏振平面檢測發射光光強...」

⑵ 分子互作檢測方法有哪些

生物分子的相互作用可通過多種檢測手段進行檢測，如熒光能量共振轉移（FRET），熒光偏振（FP），時間分辨熒光（TRF）均相時間分辨熒光（HTRF），Western-Blot等， 而這些檢測技術均可在酶標儀中實現。

⑶ 熒光偏振免疫分析法哪裡有詳細的介紹

熒光偏振免疫分析常用於測定半抗原的葯物濃度。反應系統內除待測葯物外，同時加入一定量用熒光素標記的相應葯物（小分子），使二者與有限量的特異性抗體（大分子）競爭結合。當待測葯物濃度高時，經過競爭反應，大部分抗體被其結合，而熒光素標記的葯物多呈游離的小分子狀態。由於其分子小，在液相中轉動速度較快，測量到的熒光偏振程度也較低。反之，如果葯物濃度低時，大部分熒光素標記葯物與抗體結合，形成大分子的抗原抗體復合物，此時檢測到的熒光偏振程度也較高。根據熒光偏振程度與葯物濃度呈反比關系，我們可以建立座標系。通過檢測反應系中偏振光的大小，從坐標曲線上就可以精確地得知樣品中待測葯物的相應含量。PVDF膜 http://www.bio1000.com/experiment/blotting/237885.html 生物幫有這方面的介紹。

⑷ 熒光偏振免疫分析的作用是什麼

熒光偏振免疫分析，是一種定量免疫分析技術，其基本原理是熒光物質經單一平面的藍偏振光(485nm)照射後，吸收光能躍入激發態，隨後回復至基態，並發出單一平面的偏振熒光(525nm)。適宜檢測小至中等分子物質，常用於葯物、激素的測定。熒光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay，FPIA)是一種定量免疫分析技術，其基本原理是熒光物質經單一平面的藍偏振光(485nm)照射後，吸收光能躍入激發態，隨後回復至基態，並發出單一平面的偏振熒光(525nm)。偏振熒光的強弱程度與熒光分子的大小呈正相關，與其受激發時轉動的速度呈反相關。FPIA最適宜檢測小至中等分子物質，常用於葯物、激素的測定。熒光偏振免疫分析常用於測定半抗原的葯物濃度。反應系統內除待測抗原外，同時加入一定量用熒光素標記的小分子抗原，使二者與有限量的特異性大分子抗體競爭結合。當待測抗原濃度高時，經過競爭反應，大部分抗體被其結合，而熒光素標記的抗原多呈游離的小分子狀態。由於其分子小，在液相中轉動速度較快，測量到的熒光偏振程度也較低。反之，如果待測抗原濃度低時，大部分熒光素標記抗原與抗體結合，形成大分子的抗原抗體復合物，此時檢測到的熒光偏振程度也較高。熒光偏振程度與待測抗原濃度呈反比關系。我們測定待測抗原標准品後制標准曲線。通過檢測反應系中偏振光的大小，從標准曲線上可以精確地得知樣品中待測抗原的相應含量。

⑸ 熒光偏振的用途

熒光偏振免疫分析常用於測定半抗原的葯物濃度。反應系統內除待測抗原外，同時加入一定量用熒光素標記的小分子抗原，使二者與有限量的特異性大分子抗體競爭結合。當待測抗原濃度高時，經過競爭反應，大部分抗體被其結合，而熒光素標記的抗原多呈游離的小分子狀態。由於其分子小，在液相中轉動速度較快，測量到的熒光偏振程度也較低。反之，如果待測抗原濃度低時，大部分熒光素標記抗原與抗體結合，形成大分子的抗原抗體復合物，此時檢測到的熒光偏振程度也較高。熒光偏振程度與待測抗原濃度呈反比關系。我們測定待測抗原標准品後制標准曲線。通過檢測反應系中偏振光的大小，從標准曲線上就可以精確地得知樣品中待測抗原的相應含量。

⑹ 熒光技術的應用

熒光技術在生物化學及分子生物學研究中應用主要包括以下幾個方面：
1、物質的定性：不同的熒光物質有不同的激發光譜和發射光譜，因此可用熒光進行物質的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更高的選擇性。
2、定量測定：利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這一關系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用於測定氨基酸、蛋白質、核酸的含量。熒光定量測定的一個優點是靈敏度高，例如維生素B2的測定限量可達1毫微克/毫升，這一優點使測定時所需要樣品量大大減少。
這種定量測定方法還可應用於酶催化的反應，只要反應前後有熒光強度的變化，就可用來測定酶的含量及酶反應的速率等。
3、研究生物大分子的物理化學特性及其分子的結構和構象：熒光的激發光譜、發射光譜、量子產率和熒光壽命等參數不僅和分子內熒光發色基團的本身結構有關，而且還強烈地依賴於發色團周圍的環境，即對周圍環境十分敏感。利用此特點可通過測定上述有關熒光參數的變化來研究熒光發色團所在部位的微環境的特徵及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發色團（如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內源熒光）以外，可將一些特殊的熒光染料分子共價地結合或吸附在生物大分子的某一部位，通過測定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子，這種染料分子被稱為「熒光探針」，它們發出的熒光一般稱為外源熒光。熒光探針的應用，大大地開拓了熒光技術在分子生物學中的應用范圍。
4、利用熒光壽命、量子產率等參數可以研究生物大分子中的能量轉移現象：通過該現象的研究，可以獲得生物大分子內部的許多信息，如分子內兩熒光基團D, A之間的臨界距離可根據弗爾斯特公式來測定，弗爾斯特(Förster)公式如（6）式所示：
即是兩熒光發色團之間的能量傳遞的速率KDA和它們之間的臨界距離Ro的六次方成反比。式中的KDA、K、J等均可由熒光壽命、量子產率及熒光強度的測定來推算，從而可以得知兩基團之間的距離。
以往人們常用熒光偏振做指標來研究生物大分子動力學。近年來人們趨於用熒光偏振隨時間的衰減來研究這些問題。在這種方法中，激發光不是一連續的面偏振光，而是一偏振的光脈沖，因此測得的F∥和F是在兩個不同方向上偏振的熒光隨時間的衰減，它既和熒光壽命τ有關，又與分子在溶液中的運動有關，因此常表示為F∥（t）和 F⊥（t）。由它們可得一相當重要的物理量——各向異性參數A（t）。
由A（t）可推測生物大分子的形狀、分子轉動弛豫時間（即從一個定向的狀態到一個無定向狀態所要的時間），進而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的轉動角度和時間之間的函數關系。由這些結果可以研究分子之間的相互作用、分子間結合的緊密程度、蛋白質、核酸分子的解聚程度等等。
另外，熒光技術在免疫學中亦有廣泛的應用。最重要的就是熒光抗體法。將某些熒光染料與血清抗體相結合，這種標記的抗體仍可專一地與相應抗原發生結合，形成的復合體具有熒光特性，從而可以確定抗原或抗體的存在及其含量。
5、在醫療診斷中的應用之DNA測序熒光染料： DNA序列的破譯是新世紀基因工程研究的重要前提。近年來，DNA測序的新技術、新方法不斷涌現，熒光染料標記DNA的基因晶元技術使其中最引人注目的。在熒光染料標記DNA測序技術中所用的熒光染料要求是：吸收光譜應在可見光區發射，光譜盡量靠近紅光區，以避免DNA自身的藍色熒光干擾；能發射足夠強度的熒光；不影響DNA片段在電場中的泳動；染料本身無毒害。
目前用於DNA序列的熒光染料主要是咕噸類化合物、菁類化合物、1,8-萘醯亞胺類染料以及二吡咯烷硼二氟類染料，熒光多為黃、綠、紅色，熒光量子產率較高。
6、熒光技術在醫療診斷中的應用之光動力治療用色素： 將特定的光敏感材料注入體內，它富集在腫瘤組織內，在正常細胞組織被代謝排除體外。用適當的光激發，可以檢測出癌症病處，再用特定波長的激光激發，產生能破壞腫瘤組織的自由基物質或引發氧分子轉變為能殺滅癌細胞的單線態氧，達到治療的目的。
光動力療法是除手術、化療和放射療法之外的第四種治療腫瘤的方法。它副作用小，不會引起外貌損傷。由於光動力療法具有高度的選擇性，破壞腫瘤組織目前臨床使用的光敏化材料多為卟啉類化合物。由於光動力療法的優異性能，目前已成為世界各國的研究熱點。

⑺ 熒光偏振的應用有哪些

這是一項相對較為成熟的技術。它利用熒光偏振原理，採用競爭結合法機制，常用來監測小分子物質如葯物、激素在樣本中的含量。以葯物檢測為例，以熒光素標記的葯物和含待測葯物的樣本為抗原，與一定量的抗體進行競爭性結合。熒游標記的葯物在環境中旋轉時，偏振熒光的強度與其受激發時分子轉動的速度成反比。大分子物質旋轉慢，發出的偏振熒光強；小分子物質旋轉快，其偏振熒光弱（去偏振現象）。因此，在競爭性結合過程中，樣本中待測葯物越多，與抗體結合的標志抗原就越少，抗原抗體復合物體積越大，旋轉速率越慢，從而激發的熒光偏振光度也就越少。當我們知道了已知濃度的標記抗原與熒光偏振光性的關系後就可以測量未知濃度的物質。因此，這項技術可用來檢測環境或食品樣品中有毒物質如農葯的殘留量。

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詳細資料請參考：on
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⑻ 熒光偏振的簡介

偏振熒光的強弱程度與熒光分子的大小呈正相關，與其受激發時轉動的速度呈反相關。FPIA最適宜檢測小至中等分子物質，常用於葯物、激素的測定。

⑼ 測量光的波長的方法

對於光的測量可以用到很多測量工具，比如：光元器件分析儀、偏振分析儀、偏振控制器、大功率光衰減器、光譜分析儀、數字通信分析儀、脈沖碼型發生器、並行比特誤碼率測試儀、光接收機強化測試器。

精密測量光波長目前主要是通過高解析度的干涉儀與已定的波長標准相比對來實現的，常用的干涉儀有麥克爾遜（Michelson）干涉儀和法布里一珀羅（Fab­ry-Perot）干涉儀等。

用干涉儀測量波長時，在同一光程差下，激光波長與其干涉級次變化速率（如麥克爾遜干涉儀）或干涉級次（如法布里一珀羅干涉儀）成反比，因此可以通過確定干涉級次或干涉級次變化量求出波長比。

(9)熒光偏振檢測方法有哪些擴展閱讀

偏振儀，可用於熒光強度，時間分辨熒光，熒光偏振，吸收光和化學發光的檢測。

光學中，法布里－珀羅干涉儀（英文：Fabry–Pérot interferometer），一種由兩塊平行的玻璃板組成的多光束干涉儀，其中兩塊玻璃板相對的內表面都具有高反射率。

法布里－珀羅干涉儀也經常稱作法布里－珀羅諧振腔，並且當兩塊玻璃板間用固定長度的空心間隔物來間隔固定時，它也被稱作法布里－珀羅標准具或直接簡稱為標准具（來自法語étalon，意為「測量規范」或「標准」），但這些術語在使用時並不嚴格區分。

⑽ 測量波長的方法及原理

大學物理實驗經常用：分光計測量法；牛頓環測量法；光柵測量法
其它方法：
法布里-珀羅干涉儀密集光波分復用系統的波長測量激光功率計(指針式)光功率表菲涅耳雙棱鏡雙縫

對於光的測量可以用到很多測量工具，比如：光元器件分析儀、偏振分析儀、偏振控制器、大功率光衰減器、光譜分析儀、數字通信分析儀、脈沖碼型發生器、並行比特誤碼率測試儀、光接收機強化測試器。

精密測量光波長目前主要是通過高解析度的干涉儀與已定的波長標准相比對來實現的，常用的干涉儀有麥克爾遜（Michelson）干涉儀和法布里一珀羅（Fabry-Perot）干涉儀等。

用干涉儀測量波長時，在同一光程差下，激光波長與其干涉級次變化速率（如麥克爾遜干涉儀）或干涉級次（如法布里一珀羅干涉儀）成反比，因此可以通過確定干涉級次或干涉級次變化量求出波長比。

(10)熒光偏振檢測方法有哪些擴展閱讀

偏振儀，可用於熒光強度，時間分辨熒光，熒光偏振，吸收光和化學發光的檢測。

光學中，法布里－珀羅干涉儀（英文：Fabry–Pérot interferometer），一種由兩塊平行的玻璃板組成的多光束干涉儀，其中兩塊玻璃板相對的內表面都具有高反射率。

法布里－珀羅干涉儀也經常稱作法布里－珀羅諧振腔，並且當兩塊玻璃板間用固定長度的空心間隔物來間隔固定時，它也被稱作法布里－珀羅標准具或直接簡稱為標准具（來自法語étalon，意為「測量規范」或「標准」），但這些術語在使用時並不嚴格區分。