檢測抗體的方法

A. ELISA實驗檢測抗體的實驗步驟

操作步驟：
（1）將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。
（2）加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
（3）加酶標抗抗體,主要根據你的一抗來確定二抗用什麼。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合，從而間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。
（4）加底物顯色

間接法由於採用的酶標二抗是針對一類免疫球蛋白分子(如抗人IgG),因此該法只需要換固相抗原，即可用一種酶標二抗檢測各種與抗原相應的抗體，具有更廣泛的通用性。

本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。

如果有其他問題，可以聯系我，呵呵！

B. 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

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自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

C. HIV-抗體檢測方法的確認實驗

免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
HIV抗體確證試驗結果報告
HIV抗體確證試驗結果用附表3報告。
（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標准，報告「HIV-1抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。符合HIV-2抗體陽性判斷標准，報告「HIV-2抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。
（2）符合HIV抗體陰性判斷標准，報告「HIV抗體陰性（－）」。如疑似「窗口期」感染，建議進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。
（3）符合HIV抗體不確定判斷標准，報告「HIV抗體不確定（±）」，在備注中應註明等待「4周後復檢」。

D. 抗體效價的檢測方法

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
*對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1：128是沒有問題的，有些孕婦高達1：256以上，而且抗體效價最好1個月查上一次，有時候會有所變化。

E. 抗體滴度的檢測方法

檢測方法同前[11].A450處測定光吸收值.將抗體滴度定義為:實驗組和陰性對照組光吸收比值≥2.0時最大的血清稀釋倍數
源自: 佐劑DDA和MPL對提高結核桿菌組合D... 《生物化學與生物物理進展》 2005年 余大海,蔡宏,朱玉賢

F. 用什麼方法可以檢測抗體是否與蛋白質起作用，並設計實驗用該抗體純化該蛋白

檢測目的基因是否進入到受體細胞的方法，一般包括分子水平檢測和個體水平檢測。其中分子檢測有3個層次：1目的基因是否整合到受體細胞染色體dna上，2目的基因是否轉錄出mrna，3目的基因是否翻譯出蛋白質。1和2都可以用dna分子雜交技術檢測，3可以用抗體-抗原的方法檢測。個體水平的檢測包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性及抗性的程度；基因工程產品需要與天然產品的功能進行活性比較等。

G. 如何檢測體內是否存在抗體

用人們俗稱的「兩對半」檢查， HBsAg (表面抗原)，HBsAb （表面抗體），HBeAg （e抗原），HbeAb（e抗體） ，HbcAb （核心抗原）。這種檢查方法較准確，誤診的機率很小，要是沒記錯的話HBsAg ，HbcAb ，HbeAb這三種指標都為陽性就是「大三陽」了，有較強的傳染性，其他指標陽性有可能是「小三陽」或是有抗體，感染後又好了的標志。

H. 如何測定抗體親和力

在《抗體工程》上有親和力常數的測定方法，如平衡透析、競爭結合、熒光增強法、硫氰酸鹽洗脫法、ELISA和固相放射免疫測定法（SPRIA）等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的檢測方法。通常採用競爭結合以及Scatchard作圖法。如果有條件用SPR方法，這是目前國際上流行的方法，該方法靈敏，客觀。

另外測親和力之前最好先測定抗體的有效濃度，方法是夾心法，用標准免疫球蛋白做標准品。因為在作OD-抗體濃度曲線時如果抗體濃度不夠，做不出來好的S形曲線，達不到最高值。所以建議你先測定抗體的濃度。如果濃度較低的話，你可以濃縮一下，方法很多，如PEG法，真空冷凍乾燥，超速離心等等。

I. 可利用什麼方法可以檢測到人體是否有抗體

去醫院經過專業的醫生看看，檢測那一項對人體有抗體。

J. 如何檢測體內是否存在抗體拜託了各位 謝謝

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：採用ELISA 雙抗體夾心法。雙抗體夾心法用於檢測相對分子質量較大的蛋白質抗原。先將已知特異性抗體包被於固相載體上，加待測樣本，若 其中有相應的抗原，則抗原和抗體特異性結合洗板後加入酶標記特異性抗體，使在固相上形成包被抗原抗體復合物洗板:加酶底物及色原呈色。雙抗原夾心法則是利用包被抗原和標記抗原檢測樣本中的特異性抗體。抗原或抗 體水平與所測吸光度(A) 值呈正相關。 將純化的抗HBs包被固相載體，加入待測樣品，括其中含有HBsAg ，則與載體上的抗HBs 結合，再加入辣根過氧化物酶( HRP) 標記的抗HBs 抗體，加酶底物/色原顯色。顯色程度與 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗體） 原理：採用ELISA 雙抗原夾心法。反應板上包被純化HBsAg ，待測樣品中抗HBs與之反應，再加HRP-HBsAg 形成夾心，加酶底物/色原悔液顯色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：檢測HBeAg 和抗HBe 分別用ELISA 雙抗體夾心法和Elisa競爭法。 4.HbcAb 原理：Elisa競爭法。用於檢測待檢樣本中未知抗原或抗體。測抗原時用已知抗體包被固相載體，然後同步加入含有待測抗原的樣本和酶標記抗原，使待測抗原與酶標記抗原競爭結合在固相載體上的抗體；洗板加酶底物及色原!讓包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，則被結合的酶標記抗原量越少，呈色越淺。呈色深淺與待測抗原的量成反比。測未知抗體時用已知抗原包被固相載體，同步加入含有待測抗體的標本和酶標記特異抗體，二者競爭結合固相載體t 的抗原.待測抗體量越多，酶標記抗體與固相抗原結合的最就越少，呈色就越淺。待測抗體的水平與呈色程度成反比。