『壹』 不屬於NK細胞檢測方法的是
正確答案:E
解析：一般用K562細胞株作為靶細胞測定人NK細胞活性，用YAC細胞株測小鼠NK細胞活性，檢測方法有形態法、酶釋放法、熒光法、核素法和化學發光法
。
『貳』 用流式方法檢測哪些nk細胞上的標志物
用流式方法檢測哪些nk細胞上的標志物
胞內流式分析法是用抗細胞因子抗體與細胞表面或胞內特定亞群標志組合,即可檢測不同細胞亞群細胞因子的分泌,同時採用特殊的化學與抗體選擇,確保靜止與無細胞因子分泌細胞的最小熒光背景.具有其它方法難以比擬的優點：快速：流式定量檢測細胞內細胞因子可在一天內完成,實驗流程需6-8小時,實際操作時間為1-2小時,快速簡便; 簡便：無需組織培養,可以全血分析,無需分離PBMCs; 靈敏度高：高度靈敏的熒游標記與檢測系統; 高效：可以在同一個細胞內同時檢測兩種或更多種細胞因子,也可根據細胞免疫表型區分分泌細胞因子的細胞的亞型,進行多參數相關分析; 安全：減少樣本處理與生物源性污染 接近生物體的分析條件：全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反映了體內狀況.生物幫上面有這方面的詳細內容,
『叄』 NK細胞和T細胞的檢測方法是什麼哈
NK細胞和T細胞的檢測方法是什麼哈
就是說明你很健康,
最起碼你的淋巴細胞的值正常啦,
『肆』 NK細胞和T細胞的檢測方法是什麼哈正常值是多少
採用流式細胞術檢測54例局部進展期乳腺癌患者新輔助化療前後的靜做免疫功能（NK細胞、後T淋巴細胞亞群及NK細胞免疫功能的變化，T細胞亞群）檢測要多少探討局部進展期乳腺癌患者新輔助化療前。方法
『伍』 NK細胞和T細胞的檢測方法是什麼哈正常值是多少呢
NK細胞和T細胞是通過流式細胞儀檢測的，主要是根據NK細胞表面特異性表達CD3-CD16+CD56+，而T細胞表面特異性表達CD3+，這樣添加相應抗體標記後再通過流式細胞儀就能檢測出來絕對數量和比例大小
這兩個細胞比例的正常值根據不同地區，不同醫院參考值不一樣的。
『陸』 NK細胞毒性檢驗的方法
方法首先將外周血單個核細胞（PBMCs）與K562細胞以3：1比例混合，2h後加入莫能菌素，1．5h後加入CD107a和CD56標記抗體，流式細胞儀分析CD107a陽性細胞的頻率。其次觀察CD107a抗體孵育時間、不同效靶比例對CD107a陽性細胞檢測的影響。最後觀察該方法與傳統LDH釋放法檢測NK細胞毒活性的一致性。結果NK細胞活化後可在其表面檢測到高水平表達的CD107a分子，效靶細胞孵育結束後加入CD107a抗體可降低檢測背景，低效靶比例同樣具有檢測敏感性。該方法與LDH釋放法的檢測結果一致。結論利用CD107a抗體標記檢測NK細胞毒活性的方法具有快速、敏感、所需效應細胞少的優點。
『柒』 測細胞因子含量常用的 elisa 方法為
有一個朋友來找我咨詢用流式檢測細胞因子的問題，他之前用ELISA 檢測細胞因子的話，發現樣本量需求很多，然而有些樣本量又比較少怎麼辦呢，那麼接下來我來對比幾種檢測細胞因子的優缺點，供各位大大們閱讀參考啦~
細胞因子（cytokine，CK）：是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成（一般是免疫細胞）、分泌的一類生物活性物質分泌的蛋白質，在體內廣泛參與免疫調節及炎症反應、組織修復、刺激造血系統、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動，在抵抗外來病原及維持機體內環境平衡中均起重要作用。
細胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、內分泌作用。
細胞因子的作用特點：多效性、重疊性、協同性、拮抗性和雙重性。
根據產生細胞因子的細胞種類不同分類：白細胞介素（interleukin, IL)、干擾素（interferon, IFN)、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF)、轉化生長因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趨化因子（chemokinefamily)、生長因子（growth factor,GF）等。
細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學（重點介紹）
1、生物學測定法 其原理是根據細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應或對病毒的抑製作用進行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。
2、分子生物學測定法 目前採用的技術有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。
3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用於細胞因子的檢測。
細胞因子的檢測方法對比
1、酶聯免疫吸附實驗（ELISA）
原理：使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由於酶的催化頻率很高，故可放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
優點：避免特異性抗體直接標記，便宜。
缺點：所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯反應所致的人工假象
2、流式細胞儀（CBA）
原理：利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，並利用流式細胞儀檢測類似「三明治」的顆粒——待測物復合體所散發的熒光，從而測定待測物的數量。
優點：所需樣本量少、快速（實驗6-8h可以完成）操作簡便、靈敏度高、重復性好、高效（同一個樣品可以同時檢測多個因子）、安全、接近生物體的分析條件（全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反應了體內狀況）。
『捌』 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法
細胞免疫（CMⅠ）是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原，24～48小後，測量紅腫硬結的大小，硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由於細胞免疫功能缺損，或由於細胞免疫功能缺損，或由於嚴重感染（麻疹、慢性播散性結核）造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7～10天再激發刺激，則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能，最易採集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時，由於紅細胞（1.092）、多形核白細胞（1.090）、淋巴細胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞佔80%，單核細胞佔20%，淋巴細胞中T細胞佔80%，B細胞佔4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數
（1）E花環法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構，將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經37℃培養5～10分鍾放4℃過夜，取細胞懸計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數。
（2）用單克隆抗體計數T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%～80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲（fromazan）產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行，並能反應試驗中的活細胞數。
3．細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合，於37℃培養1小時左右，51Cr即可進入靶細胞，與胞漿蛋白結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全，及經IgG介導的ADCC效應，或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4．混合淋巴細胞的反應（MIR） 是體外研究T細胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4～5天，在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合（靶細胞來自與刺激細胞相同的個體）如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞，可殺死活的細胞，根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子）和LIF（白細胞移動抑制因子）來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術，操作簡單，並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時，然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高，表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術，即從組織中或細胞中提取RNA，與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。
『玖』 檢測T,B,NK和吞噬細胞免疫功能的方法分別有哪些
免疫細胞功能試驗包括體內和體外試驗。免疫細胞功能體外試驗主要根據免疫細胞的增殖活性、分泌活殺傷活性等特性而進行實驗設計。具體免疫細胞功能檢測內容包括：①淋巴細胞功能檢測，包括T細胞增殖試驗、T細胞分泌功能測定、T細胞介導的細胞毒試驗以及體內試驗；B細胞增殖試驗、溶血空斑試驗、酶聯免疫斑點法以及體內試驗；NK細胞活性檢測方法：酶釋放法、放射性核素釋放法、化學發光法、流式細胞術法等。②吞噬細胞功能檢測，方法有趨化功能檢測、吞噬和殺菌功能測定等。
『拾』 簡述T細胞功能測定的常用方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。1．體液免疫測定主要利用抗原與相應抗體在體外發生特異性結合，並在一些輔助因子參與下出現反應，從而用已知抗原或抗體來測知未知抗體或抗原。此外，尚包括檢測體液中的各種可溶性免疫分子，如補體、免疫球蛋白、循環復合物、溶菌酶等。2．細胞免疫測定法是根據各種免疫細胞（T細胞、B細胞、K細胞、NK細胞及巨噬細胞等）表面所具有的獨特標志和產生的細胞因子等，測定各種免疫細胞及其亞群的數量和功能，以幫助了解機體的細胞免疫水平。體液免疫檢測法1.凝集反應。顆粒性抗原（細菌或紅細胞等）與相應抗體特異性結合，在電解質參與下形成肉眼可見的凝集物，稱之為凝集反應。1）直接凝集反應。顆粒性抗原與相應抗體直接結合所產生的凝集現象，前者多為細胞表面的結構成分，如細菌或紅細胞的表面結構抗原。⑴玻片法：多用於抗原的定性檢測。⑵試管法：多用於抗體的定量檢測。2）間接凝集反應。將可溶性抗原吸附於載體顆粒（如乳膠顆粒、紅細胞等）的表面，稱之為致敏顆粒。當致敏顆粒與相應抗體結合，即可出現凝集現象。這個反應常用於測定細菌性抗體、病毒性抗體、鉤端螺旋體和梅毒螺旋體抗體及某些自身抗體（如抗核抗體、抗腎抗體、抗甲狀腺抗體等）。根據凝集反應的原理，還有間接凝集抑制試驗、反向間接凝集試驗、協同凝集試驗等。2．沉澱反應。可溶性抗原（外毒素、血清、細菌培養的濾液、組織浸出液等）與相應抗體特異性結合，在電解質參與下，形成沉澱物，稱為沉澱反應。沉澱反應的抗原多為多糖、類脂、蛋白質等。1）單向擴散試驗。這是一種抗原定量試驗，是可溶性抗原在含抗體的瓊脂介質中擴散的沉澱反應。此法常用於檢測血清免疫球蛋白和補體各成分的含量。2）雙向擴散試驗。這是可溶性抗原與抗體在瓊脂介質中相互擴散的沉澱反應。本法常用於定性試驗，如檢測血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。單克隆抗體技術3）對流免疫電泳。對流電泳是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴散。此法常用於檢測血清中的乙型肝炎表面抗原與甲胎蛋白等。3．中和試驗。特異性抗體可抑制相應抗原物質的活性，抗體使相應抗原的毒性或傳染性消失的反應為中和試驗。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗體可使病毒失去感染性等。診斷風濕熱的抗鏈球菌溶血毒素「O」試驗也為一種中和試驗。乙型溶血性鏈球菌能產生一種溶解人、兔紅細胞的溶血毒素「O」，該毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素「O」抗體所中和而不出現溶血。試驗時將病人血清與溶血毒素「O」混合，作用一段時間後加入人紅細胞，紅細胞不被溶解為陽性反應，表示病人血清中存在抗溶血毒素「O」抗體。血清抗體效價達400單位以上時提示患者曾感染乙型溶血性鏈球菌，有助於風濕熱的診斷。4.免疫熒光法（熒光抗體法）。是應用熒光素染料（如異硫氰酸熒光黃等）來標記抗體，但不影響其活性，此種抗體稱熒光抗體。用已知種類的熒光抗體浸染待檢的含有抗原的細胞或組織切片，如有相應抗原存在，則抗原即與此種抗體發生特異性結合，形成復合物而粘著在細胞上，不易洗脫，在熒光顯微鏡下成為發出熒光的可見物，可達到診斷或定位的目的。包括直接法和間接法。5．酶聯免疫吸附試驗。本法的原理是利用酶（常用辣根過氧化物酶）標記的抗原或抗體，以測定被檢標本中有無相應的抗原或抗體。有間接法、雙抗體法、競爭法三種。6．溶血空斑試驗。7．免疫印跡技術。免疫印跡或免疫轉印技術(immunoblotting或Westernblot）是在Southern(1975)抗體抗原反應創建的DNA印跡術(Southernblotting）基礎上發展起來的新型免疫生化技術。細胞免疫檢測法近代免疫學廣泛採用了細胞生物學、免疫血清學、免疫標記、免疫組化等多方面技術，不斷發展和完善了一系列細胞免疫檢測技術，用於檢測各類免疫細胞的表面標志（包括抗原及受體）、細胞的活化、增殖、吞噬、殺傷功能、各種細胞因子的活性或含量等方面。這些技術為深入研究和認識機體免疫系統的生理、病理改變，闡明某些疾病的發病機制和臨床診治提供了有用的手段。隨著細胞免疫學的迅猛發展，時有新的細胞免疫檢測技術出現。二十一世紀初期，新發展的項目集中在對有關細胞因子以及細胞受體方面的檢測。1．淋巴細胞轉化試驗。人類淋巴細胞在體外與特異性抗原（如結核菌素）或非特異性有絲分裂原（如植物血凝素，PHA）等一起孵育，T細胞即被激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最後導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴母細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀來確定摻入量以確定淋巴細胞轉化率。2000年開始出現一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法。MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色成分。該產物的多少與活細胞數成正比，結果可用酶標儀(595nm）測量光密度，作為MTT法的指標。2．E-花環法。人類T細胞表面有羊細胞受體(CD2）能與羊紅細胞結合形成玫瑰花樣結構。即將分離液分離出的外周的單個核細胞懸液與羊紅細胞在體外混合，經37℃培養5～10分鍾後放4℃過夜，取細胞懸液計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞，此法可用來分離T細胞。3．T細胞亞群檢測。4．細胞毒試驗。Tc細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞等對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。抗體制備常用的檢測方法是51Cr（鉻）釋放法，將51Cr-Na2CrO4鹽水溶液與靶細胞（不同的細胞需不同的靶細胞，如NK細胞的靶細胞為K562），於37℃培養1小時左右，51Cr即進入靶細胞，與胞漿結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待測細胞毒的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50:1或100:1），靶細胞殺傷越多，釋放到上清液中的游離51Cr就越多，且不能再被其他細胞吸收，用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，可計算出待檢細胞殺傷活性高低。細胞毒的檢測對腫瘤免疫有較大價值。5．巨噬細胞吞噬功能的測定。將中葯(10%斑蝥）乙醇浸出液浸漬的濾紙（1cm2大小）置於受試者前臂屈側皮膚上，4～5小時後取下濾紙。48小時內皮膚局部可水泡，內含巨噬細胞。取水泡液0.5ml加雞紅細胞懸液0.01ml，37℃經30分鍾後作塗片、染色與鏡檢，計算吞噬百分率及每個巨噬細胞吞噬雞紅細胞的平均數。本試驗有助於腫瘤病情及療效的觀察。6．移動抑制試驗。致敏淋巴細胞與其特異性抗原再次接觸時，可以產生移動抑制因子(MIF）。這種因子可以抑制巨噬細胞和中性粒細胞的移動，使之定位於局部而增強其免疫作用。本試驗用來觀察受檢者淋巴細胞在體外受特異性抗原刺激後，有無MIF產生，以測定機體對某種抗原的特異性細胞免疫反應的功能。7．時間分辨熒光測量技術。時間分辨熒光測量技術(time-resolvedfluorometry,TrF）是一項新型的超微量非放射性分析技術。該技術的敏感性和特異性與放射性核素測量技術相仿，但無放射測量的弊端，故問世雖短，進展卻極為迅速，有取代放射測量之勢。8．細胞因子檢測技術。細胞因子的檢測，2005年起在中醫臨床及實驗室中已廣泛應用。9．細胞受體的檢測。受體是細胞表面標志之一，通過對受體的檢測，可以了解細胞的功能，並為某些疾病的發病機制提供一定的理論依據。