⑴ 離子交換純化多糖使用什麼方法檢測收集
離子交換純化多糖使用什麼方法檢測收集
鑒定多糖（參考資料）：
1.苯酚-硫酸法 需要多糖的純品和特定的酶
2.蒽酮-硫酸法 多糖在濃硫酸水合產生的高溫下迅速水解，產生單糖，單糖在強酸條件下與苯酚反應生成橙色衍生物。在波長490nm左右處和一定濃度范圍內，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關系，從而可用比色法測定其含量，所用的單糖對照品盡量採用與其多糖組成一致或為含量較高的單糖，這樣測得的值較准確。
3.3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS法） 在鹼性條件下顯色，較准確測定還原糖與總糖的含量從而求出多糖的含量，可消除還原性雜質的干擾。
多糖的分離純化
在多糖提取物中，常會有無機鹽、蛋白質、色素及小分子物質等雜質，必須分別除去．一般是先脫除非多糖組分，再對多糖組分進行分級．
2．1 除蛋白：除蛋白質時一般選擇能使蛋白質沉澱而不使多糖沉澱的試劑來處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短，溫度低，避免多糖降解。Sevage法（氯仿：戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有較好效果但要達到除盡游離蛋白質的目的仍需反復處理。如能加入蛋白質水解酶，使蛋白質大分子進行一定程度的降解，再用Sevage法處理，一般效果更好。
為了避免使用有機溶劑也可採用反復凍融的方法除蛋白，將多糖液濃縮後，一20℃室溫反復凍融7～8次，離心除去蛋白質。另外，蛋白質在等電點時溶解度最小，用氫氧化鈣飽和液調pH10～pH11可除去偏鹼性的蛋白質，然後再用硫酸調pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白質。凍融和等電點沉澱除蛋白質操作簡單，但多糖液里往往有低濃度的蛋白質殘留，應與其它方法結合使用。
2．2 脫色：植物多糖提取物中含有酚類化合物而使其顏色較深，可用吸附劑(纖維素、硅藻土、活性炭等)、離子交換柱(DEAE一纖維素)、氧化劑(H2O2)等脫除。活性炭比表面積大，吸附能力強，在進行當歸多糖的提取時只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸後濾過即完成了脫色操作。此法成本低廉，適合工業化生產。
2．3 除小分子雜質
小分子雜質如低聚寡糖的殘留往往影響多糖的生物活性，需要進一步脫除，提高純度。傳統的方法是透析法，該法操作簡單、技術成熟，但周期長，往往需要2一3天，常溫下操作有可能造成多糖的霉變，必要時需加入少量防腐劑或需在低溫條件下進行。隨著膜分離技術的發展，纖維濾器透析法已經發展起來了，它利用不同孔徑的膜使大小不同的分子分級，這種方式可縮短生產周期，而且條件溫和，無疑是多糖脫除雜質的一條新途徑。
2．4 多糖的分級純化
採用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分級的方法可達到純化的目的．可按溶解性不同進行分級、按分子大小和形狀分級(如分級沉澱、超濾、分子篩、層析等)，也可按分子所帶基團的性質分級．
2．4．1按溶解性不同分離
2.4.1.1分步沉澱法
分步沉澱法是根據不同多糖在不同濃度低級醇、酮中具有不同溶解度的性質，從小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮進行分步沉澱．
2.4.1.2 鹽析法
鹽析法是根據不同多糖在不同鹽濃度中溶解度不同而將其分離的一種方法。常用的鹽析劑有氯化鈉、氯化鉀、硫酸銨等，其中以硫酸銨最佳。
2.4.2 按電離性質不同分離
2.4.2.1季胺鹽沉澱法
季胺氫氧化物是一類乳化劑，能與酸性多糖形成不溶性化合物季銨絡合物，此絡合物在低離子強度的水溶液中不溶解而產生沉澱。若提高多糖液pH值或加入硼砂緩沖液，也可使中性多糖沉澱分離。常用季銨鹽有十六烷基三甲基季銨鹽的溴化物及其氫氧化物和十六烷基吡啶。
2．4．3 柱層析法
2.4.3.1凝膠柱層析法
凝膠柱層析法常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose)，以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑，從而使不同大小的多糖分子得到分離純化，但不適宜粘多糖的分離。
2.4.3.2纖維素陰離子交換劑柱層析法
纖維素陰離子交換劑柱層析法常用的交換劑為DEAE一纖維素和ECTEOLA一纖維素，分類硼砂型和鹼型兩種，洗脫劑可用不同濃度鹼溶液、硼砂溶液、鹽溶液，其優點可吸附雜質、純化多糖，並適用於分離各種酸性、中性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙參多糖、太子參多糖等。
2.4.3.3 活性炭柱層析法
活性炭吸附量大、效率高，是分離水溶性物質的常用吸附劑。柱層析時活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀釋劑，以增加溶液的流速。糖溶液上柱後先用水洗脫無機鹽、單糖等再依次增加乙醇濃度進行洗脫。
2.4.3.4 離子交換柱層析和普通凝膠柱層析聯用法
有些植物的多糖成分復雜， 除中性多糖外，還含有糖醛酸等，因此往往兩種不同性質的色譜柱聯用才能得到單一多糖組分。
2.4.3.5 三種層析柱聯用
採用離子交換葡聚糖凝膠柱、丙烯葡聚糖凝膠柱和葡聚糖凝膠柱三者聯用，即先進行DEAE—SephadexA柱層析，用蒸餾水洗脫。水洗組分進一步用SephacrylS柱層析，得到主要組分再用SephadexG一100柱層析，有時會有較高的得率。
三、多糖的純度鑒定
經過分級純化的多糖在測定結構前須進行純度鑒定．而且多糖的純度不能用通常化合物的純度標准來衡量，因為即便是多糖純品，其微觀也並不均一，僅代表相似鏈長的多糖分子的平均分布，通常所謂的多糖純品也只是一定相對分子質量范圍的多糖的均一組分．目前常用於多糖純度的鑒定方法有：高效液相、 凝膠層析法、電泳法、色譜法、旋光度法等．
多糖的單糖組分的鑒定稱取多糖粗品8 mg，用2 mL濃度為1 mol／L硫酸100*C水解6 h。飽和Ba(OH)2中和至中性，抽濾，取濾液，濃縮，毛細管點樣，薄層層析法分析。採用硅膠G板105"(2活化2 h後使用。標准糖分別為D一半乳糖，D一葡萄糖，D一甘露糖，L一山梨糖、L一阿拉伯糖。展開劑為正丁醇一冰醋酸一水(4：1：5)(體積比)。用AgNO3一NaOH 溶液顯色。
⑵ 果膠酶的檢測方法
果膠酶活性的檢測
[目的]
本檢測方法是用來果膠酶的催化活性。本方法適用於各種固體和液體果膠酶制劑。
[說明]
本方法適合於果膠酶的質量分析和質量控制領域。但不是本公司產品及其它公司產品的絕對活力的預測，而各種酶制劑的最終的酶活力在良好的實驗操作下仍可發揮出更好的催化活力。
[原理]
果膠物質主要存在於植物初生壁和細胞中間，果膠物質是細胞壁的基質多糖。果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進行半乳醛酸的定量,從而測定果膠酶活力。
[果膠酶活力單位定義]
1g(或1ml液體酶)酶粉,於50.0℃、pH3.5條件下,每分鍾催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個活力單位。
1. 試劑和儀器
*本標准所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純
1.1 醋酸
1.2 碘
1.3 碘花鉀
1.4 濃硫酸
1.5 果膠（sigma公司）
1.6 硫代硫酸鈉
1.7 碳酸鈉
1.8 可溶性澱粉
1.9 水浴鍋
1.10 碘量瓶
2. 試劑的制備
2.1 pH3.5的酸水
用醋酸將蒸餾水調至3.5
2.2 1%果膠溶液：
准確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻後過濾，定至100ml。
2.2 0.1N碘液：
准確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解後，加入2.54g碘，溶解後定容至100ml。
2.3 0.025mol/L硫代硫酸鈉：
准確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水後定容至1L
2.4 0.5%可溶性澱粉指示劑：
准確稱取可溶性澱粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1M碳酸鈉溶液：
准確稱取10.6g碳酸鈉，定容於100ml的水中
2.6 2N硫酸：
吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中
2.7 酶樣的制備
准確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，於50℃水浴浸取1小時，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經稀釋100倍。
3. 程序
3.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（PH3.5），在50℃水浴中保溫反應1小時。
3.2 取出後加熱煮沸2~3min，冷卻後，補水至20ml。
3.3 取5ml反應液於100ml碘量瓶中，加1M碳酸鈉溶液1ml，0.1N碘液5ml，搖勻，具塞，於室溫暗處下放置20min。
3.4 取出後加2N硫酸2ml，立即用0.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性澱粉溶液，繼續滴定至藍色消失為止。
3.5 空白試驗以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進行滴定。
3.6 每個酶樣最少做兩個平行樣。
4. 計算
4.1 將測得的各平行樣求OD值的均值。
4.2 計算酶的活性單位依據以下公式
酶的活力= [(B-A)*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ]
單位： U/g(ml)
式中： A：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數。
B：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數。
N：硫代硫酸鈉摩爾濃度。
0.5：1當量硫代硫酸鈉相當於0.5當量半乳糖醛酸。
20：反應液總體積
51：酶液體積以1ml計
52：吸取反應液
n：稀釋倍數
W：酶粉重量g或酶液體積ml
⑶ 殼寡糖對酸性體有什麼作用
體內的免疫細胞在體液PH值7.4左右時，活性最強。它能分辨出正常細胞和異常細胞，並選擇性地去識別絞殺異常細胞，殼寡糖是自然界唯一帶正電荷的鹼性糖，進入人體可改善酸性環境，能有效調節PH值，保持體內酸鹼平衡，給機體創造一個不易生病的環境，進而增強人體抵禦疾病的能力。
⑷ 果膠提取有幾種方法。
一下的方法應該夠你用的了:::
果膠提取加工技術及其制備方法
1、一種果膠寡聚糖、其制備工藝及防治植物病害的應用
2、含有起抑制雄性生殖毒性作用的果膠的葯物組合物
3、利用廢渣和廢水固態發酵生產果膠酶
4、具有果膠乙醯酯酶活性的多肽和編碼該多肽的核酸
5、利用銀杏外種皮為原料提取的銀杏型果膠和提取方法
6、豆腐柴葉制備果膠工藝
7、草酸青黴固態發酵生產果膠酶
8、果膠膜組合物
9、向日葵低酯果膠的分離純化方法
10、胡蘿卜素、果膠、食用纖維連續提取方法
11、作為具有泡沫頭飲料的泡沫穩定劑的果膠
12、口服可溶性經調節柑桔果膠抑制癌症轉移的方法
13、從向日葵盤和桿中提取食用低酯果膠的方法
14、從柑桔果皮中提制果膠同時聯產酒、油、醬、色素和柑桔皮甙的方法
15、果膠酶制劑
16、豆腐柴提取果膠的方法
17、一種生產果膠的方法
18、用草酸提取-鐵鹽沉澱工藝提取向日葵低酯食用果膠的方法
19、分子篩法制備果膠
20、改性甜菜果膠的生產方法
21、從番木瓜中提取食用果膠
22、果膠代血漿及制備方法
23、用蘋果廢料製取果膠凍工藝
24、甜菜渣製取果膠的方法
25、由甜菜粕制備果膠新方法
26、從大量廢棄芭蕉茹及凍壞生蕉果中提煉果膠三法
27、一種金屬鹽法提制果膠的方法
28、從橙皮等柑桔類果皮中提制高質量果膠的方法
29、山楂果膠和果汁的分離、提純、濃縮方法
30、一種向日葵盤提取低酯果膠的生產方法
31、從馬鈴薯粉渣中提取低酯果膠的方法
32、保健果膠、果汁及其制備方法
33、從柑桔皮中同時提取天然黃色素、桔油和果膠的方法
34、用蠶沙殘渣提取果膠的方法
35、向日葵低酯果膠的提取方法
36、保健果膠及果汁
37、膠態果膠鉍葯物
38、使用果膠酶處理製取山楂汁的方法及產品
39、應用高分子量脫乙醯基甲殼素脫除果膠和澄清果(蔬)汁的方法
40、柑桔廢棄物提取低酯果膠的方法
41、果汁-果膠-食用纖維連續提取方法
42、顆粒狀果膠酶制劑及其製造方法
43、預酸解、高酸度連續提取生產果膠的方法及設備
44、檸檬皮果膠的提取方法
45、一種利用柑桔類果皮中果膠酯酶的脫酯方法及其應用
46、果膠組合物及其制備方法
47、果膠組合物及其制備方法
48、枯草芽孢桿菌及固體鹼性果膠酶生產工藝
49、假酸漿果膠粉及其生產方法
50、向日葵低酯果膠的純化方法
51、半導體激光輻照選育果膠酶高產菌株
52、從胡麻籽中提取高果膠含量的胡麻膠的方法
53、用高酯果膠在酸性環境中穩定蛋白質的方法
54、改性的果膠材料
55、活性人參果膠囊(片)及其制備方法
56、含有果膠酯酶的洗滌劑組合物
57、含有鹼性果膠降解酶的洗滌劑組合物
58、含果膠裂解酶的洗滌劑組合物
59、超果膠酶及其生產工藝
60、具有果膠酯酶活性的酶
61、薴麻優質果膠的制備方法
62、包含果膠甲酯酶和兩種底物的組合物
63、獲得精選果膠級分的方法、這樣的級分及其用途
64、固態發酵果渣、菜渣制備果膠酶
65、炭黑麴黴突變株K58固體發酵生產果膠酶
66、含有解果膠酶的洗滌劑組合物
67、長壽果膠囊及其制備方法
68、地衣芽孢桿菌果膠降解醇
69、新的果膠酸裂解酶
70、果膠及其生產方法，含果膠的酸性蛋白食品及其生產方法
71、用於糊狀物質中的果膠、其制備方法、包含該果膠的糊狀物質及其應用
72、果膠的生產方法
73、酶促修飾果膠的方法
74、分級分離的果膠產品的製造方法
75、包含抗壞血酸和果膠的組合物
76、含有果膠酸鹽裂解酶和漂白體系的洗滌劑組合物
77、用於穩定蛋白質的果膠
78、果膠酶制劑的生產方法
79、含有果膠酸裂解酶和特定表面活性劑體系的洗滌劑組合物
80、大毛霉液態發酵含果膠的廢渣制備果膠酶
81、可降低鈣離子靈敏度的果膠
82、用於多肽的表達和分泌的果膠酸裂解酶融合體
83、薴麻脫膠果膠酶的生產及其在薴麻脫膠工藝中的應用
84、防治植物病害的鹼性果膠解聚酶制劑及其使用方法
85、一種香蕉皮中果膠的提取方法
86、含有甜菜果膠的麵包組合物
87、一種果膠酸性寡糖及用途
88、利用果膠酶製取柑橘皮低甲氧基果膠的方法
89、一種果膠酸性寡糖的制備方法
90、提高蛋白酶和果膠酶活力的麥芽制備方法
91、一株產鹼性果膠酶工程菌及其構建和用該菌生產鹼性果膠酶的方法
92、獲得果膠的方法
93、薴麻中果膠含量的測定方法
94、來源於西印度櫻桃果實的果膠和其應用
95、果膠的製造法及使用果膠的凝膠劑及凝膠狀食品
96、一種用溫度策略促進重組畢赤酵母高產鹼性果膠酶的方法
97、一種從柚子皮中提取柚皮甙和果膠的方法
98、蘆薈蘋果膠凍及其製作方法
99、打瓜的綜合利用及從打瓜中提取果膠的方法
100、果膠的改性方法及其應用
101、一種不飽和果膠低聚糖及復合生物防腐劑
102、一株吉氏芽孢桿菌突變株及其發酵生產鹼性果膠酶
103、一種從薜荔花被中提取低酯果膠的方法
104、採用水萃取法從薜荔籽中提取優質低酯果膠的方法
105、一株嗜鹼細菌及其固態發酵生產鹼性果膠酶
106、包含果膠的基質形成組合物
107、一種高活力果膠復合酶制備方法
108、膠體果膠鉍分散片
109、鹽析法提取豆腐柴葉中果膠
110、癩葡萄果膠制備工藝
111、發酵法制備鹼性果膠酶過程中提高鹼性果膠酶酶活的方法
112、果膠酸裂解酶變體
113、一種黑麴黴菌株及其在果膠酶固態發酵生產中的應用
114、果膠薄膜
115、一種果膠酶親和吸附劑的制備方法
116、一種鹼性果膠酶制劑的復配和應用方法
117、一種鹼性果膠酶高產菌及其篩選方法和用該菌株發酵法生產鹼性果膠酶
118、生物化學法製取果膠
119、可高產果膠酶的塔賓麴黴及在固態發酵生產中的應用
120、果膠及其生產方法，含果膠的酸性蛋白食品及其生產方法
121、柑桔皮製備果膠的方法
122、全棉機織物澱粉酶、果膠酶、蛋白酶連續浸軋－汽蒸法前處理工藝
123、從柚子中同時提取果膠、柚皮甙等八種產物的方法
124、包含枯草桿菌果膠酸裂解酶的洗滌劑組合物
125、果膠凝膠的就地形成
126、含糖用甜菜果膠和類胡蘿卜素的組合物
127、含有果膠和抗壞血酸的組合物
128、黃姜中提取果膠的方法
129、制備含纖維果膠的方法及其產品和應用
130、含有與聚果膠酸酯和EDTA螯合的銀的抗菌溶液
131、一種口服復方膠體果膠鉍制劑及制備方法
132、一種提高鹼性果膠酶在棉紡織精練工藝中穩定性的方法
133、含有果膠的植物材料的改進處理方法
134、高活性液體食品級果膠酶的製造方法
135、從柑桔類果皮中提取桔子油和果膠的方法
136、抗菌性果膠纖維素
137、蘋果果膠的脫色及生產白色細粉的蘋果果膠的工藝
138、一種醯胺化果膠的生產工藝
139、大豆種皮製備果膠新方法
140、一種利用蘋果渣製取高純度果膠的方法
141、含高重量份鈣鹽的在體交聯果膠骨架給葯系統
142、大豆種皮聯產制備果膠和重金屬離子吸附劑的方法
143、用解聚果膠作為穩定劑制備食品的方法
144、利用劍麻麻渣制備葉綠素銅鈉及果膠的方法
145、低分子柑桔果膠用於增強免疫功能的應用
146、低分子柑桔果膠用於調節血糖血脂和改善脂肪肝中的應用
147、膠體果膠鉍干混懸劑及其制備方法
148、柑橘類果皮中果膠的提取與制備工藝
149、一種從白構皮製漿蒸煮廢液中提取果膠的方法
150、利用生物提取與膜分離技術生產果膠的方法
151、基於果膠的冷膠凝糕點糖衣
152、一種低溫果膠酶菌株、低溫果膠酶及其生產方法
153、一種以果膠為基質的脂肪替代品的生產方法
154、一種利用果皮生產果膠的方法
155、納米膠體果膠鉍及其顆粒劑葯物
156、利用膜技術從向日葵盤中分離低酯果膠的方法
157、果膠提取方法
158、甘薯果膠及其生產技術
159、一種雙水相萃取體系分離純化果膠酶的方法
160、一種含果膠顆粒的含乳飲料及其生產方法
161、低甲氧基蘋果果膠的生產工藝
162、高分子蘋果果膠的生產工藝
163、一株克勞氏芽孢桿菌突變株及其發酵生產鹼性果膠酶
164、一種果膠/聚乙烯醇水凝膠材料及其制備方法
165、用於低卡路里凝膠的含果膠組合物的膠凝劑
166、果膠-5-氟尿嘧啶結腸癌雙靶向前體葯物及制備方法
167、果膠酶在抑制藻華中的應用及方法
168、含有果膠烯化氧衍生物的組合物
169、含有果膠的酸化乳製品
170、一種果膠快速分級方法
171、一種蘋果果膠的生產方法
172、柿皮中果膠、單寧及色素的連續提取方法
173、一種產果膠酶的工程菌株
174、里氏木霉液體發酵生產纖維素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和果膠酶的方法
175、解澱粉類芽孢桿菌P17菌株，由其所得的低溫果膠酶及其分離純化方法
176、以蘋果果膠為主要組分的潤腸排毒的功能食品及其制備方法
177、以蘋果果膠為主要組分的調節血脂降膽固醇的功能食品及其制備方法
178、以蘋果果膠為主要組分的調節血糖的功能食品及其制備方法
179、色果膠囊及其生產方法
180、黑麴黴液態發酵果膠酶及其對白水和紙漿中膠體物質控制
181、一種果膠中殘留的有機溶劑的測定方法
182、經果膠改性的抗性澱粉、含其的組合物和制備抗性澱粉的方法
183、一種從柑桔皮中提取液體果膠方法
184、由秋葵果實莢分離的果膠多糖
185、果膠的制備方法和用所述果膠的膠凝劑和凝膠狀食物
186、純棉機織物果膠酶、雙氧水溫堆前處理工藝
187、可食性食品果膠保鮮膜及其制備方法和應用。
⑸ 糖鏈分析有哪些常規方法和步驟
蛋白質糖基化是人體中最重要的一種蛋白質翻譯後修飾方式,人體中超過50%的蛋白質是糖基化的。研究發現,寡糖在蛋白質結構構造、生物活性中起著至關重要的作用,人類許多疾病的發生和發展都與蛋白上N-糖鏈的結構和表達量的改變有關。因此,發展和建立分析N-糖鏈的方法,對生物和病理學研究具有積極現實意義。目前的研究方法主要是化學衍生法,其缺點是需要引入額外的化學試劑、操作步驟繁瑣以及有副反應發生。化學酶標記法由於沒有化學衍生法的特點,為研究糖蛋白中的N-糖鏈,提供了新的思路。首先,在本實驗室前人工作的基礎上,以Boc-Asn-GlcNAc為基礎結構單元物質合成了同位素標記糖基受體d0/d8-PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc,優化了受體合成方法：以DMT-MM作為反應縮合劑,探索溫度、時間、反應物比例對受體產率的影響,合成受體反應產率達到95-98%。隨後,我們以標准糖肽SGP為反應底物,對比Endo-M酶、(?)Endo-M-N175Q酶的轉糖基活性和水解活性,結果表明Endo-M-N175Q酶的轉糖基活性幾乎是Endo-M酶的2倍,且Endo-M-N175Q酶幾乎喪失對轉糖基產物的水解能力。緊接著我們以標准糖蛋白牛胰核糖核酸酶B為研究對象,對比丙酮富集N-糖鏈和N-糖苷酶F釋放N-糖鏈兩種方法檢測糖鏈的效率,結果表明N-糖苷酶F釋放N-糖鏈簡便、高效。為了檢驗該方法的實用性,我們以卵清蛋白為實際樣品,成功、高效地檢測出一系列N-糖鏈(M5N2、M6N2、M7N2、M4N3、M5N3、M3N4、 M3N5、M4N4、M3N6),和文獻己報到的寡糖數量一致,正離子模式下這些寡糖都是以二價或三價的形式出現。相比於傳統的化學衍生化法,Endo-M-N175Q酶可以一步完成酶解和轉移兩個過程,避免了繁瑣的步驟以及副反應的發生。因此,我們提出的以含有Boc-Asn-G1cNAc結構單元的化學物質作為糖基受體、結合Endo-M-N-175Q酶的特性、以HPLC/ESI-MS為檢測手段,這一全新的分析方法,對分析糖蛋白中的N-糖鏈切實高效可行。…
⑹ HPLC 測寡糖的體系及注意事項
目前常見分析寡糖的色譜柱主要有強極性的C18柱、NH2柱和專門糖柱三種方式。
而常見的檢測器有示差、蒸發光散射和電化學檢測器三種。
給你一個較簡單的體系參數，
色譜柱：CAPCELL PAK NH2 UG80 2.0*250mm
檢測器：RI
流動相：85%CH3CN
流速：0.2mL/min
溫度：40℃
進樣量：根據你的樣品濃度而定（參考值670微克/mL，5微升）
樣品：fructose，galactose，glucose，sucrose，maltose，isomaltose
⑺ 求甘露寡糖檢測方法
根據β-葡聚糖和甘露寡糖在流動相和液相色譜柱的固定相之間具有不同的分配系數，將樣品注入液相色譜柱，用H2O做流動相，糖類分子流出後，經示差檢測器檢測，用外標法定量。
除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑；蒸餾水或去離子水或符合GB/T6682中規定的一級水或相當純度的水。試驗中所用製品按GB/T 603的規定製備。
鹽酸：37%。
乙腈：色譜純
氫氧化鈉：40%。
葡萄糖和甘露糖混合標液（1000mg/L）：分別稱取葡萄糖和甘露糖各0.100g，用純水定容100mL後用0.45μm微孔濾膜過濾，備用。
儀器：水浴鍋、漩渦混合器、電爐、手提式壓力蒸汽滅菌鍋、高壓液相色譜儀、帶示差檢測
器。
樣品處理
精確稱取1.000g（准確至0.0002g）樣品放入一個20mL的耐熱玻璃制的帶螺帽的小試管中，加入7.5mL鹽酸（37%），小心的將小瓶蓋近後用漩渦混合器混合，得到均一的懸浮液。將小瓶放入30℃水浴中處理45min，每15min用漩渦混合器震盪混合一次。然後將懸浮物定量的轉移到200mL杜氏瓶中（同時用約70-80mL的水洗滌後倒入瓶中），將瓶子放入高壓滅菌鍋121℃處理60min。完成後馬上冷卻，將溶液調pH到6-7，然後定容至200mL。使用0.45微米孔徑的醋酸纖維素膜過濾備用。
液相色譜參考條件 ：
1、色譜柱：Hyper REZ XP Carbohydrate Ca++，長300mm，內徑7.7mm，粒徑8μm；
2、柱溫：70℃；
3、流動相：H2O，用前過0.22μm濾膜；
4、流速：0.6 ml/min；
5、進樣體積:40μl；
標准曲線的繪制：
分別吸取甘露糖/葡萄糖標液12.5、25.0、37.5mL到50mL容量瓶中，用高純水定容到刻度，得到甘露糖、葡萄糖各為250、500、750、1000mg/L的混合標樣。在上述色譜條件下准確進樣40μl，得到色譜峰面積和標准物質量濃度之間的回歸方程，繪制標准曲線。
在同樣的色譜條件下，將處理好的樣品注入色譜儀中，記錄各色譜峰的保留時間和鋒面積。用糖標樣色譜峰的峰面積來定量，計算出樣品中葡萄糖、甘露糖的含量。
結果計算
試樣中β-葡聚糖或甘露寡糖含量X以質量分數（%）表示，按式（A.1）計算： file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image002.gif file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image004.gif……………………………………（A.1）式中：
A——根據樣品溶液的峰面積，在標准曲線上查得的樣品溶液的葡萄糖或甘露糖的含量，單
位為毫克每升(mg/L)；
m——樣品質量，單位為克（g）；
0.2——樣品處理定容的體積，單位為升（L）；
0.9——將葡萄糖或甘露糖換算成β-葡聚糖或甘露寡糖的系數。
每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果，結果保留到小數點後一位。
在重復條件下或得的兩次獨立測試結果的絕對差值不大於這兩個測定值的算術平均值的10%
⑻ 怎樣檢測物質含有酸性
溶解於水 檢測氫離子 再用用石蕊,甲基橙等PH指示劑來檢測.
物質的酸性是由其水溶液中的氫離子量來衡量的.其檢測方法很多.目前比較准確的方法是用已知濃度的強鹼性溶液來滴定.這個方法准確,但是操作煩瑣,需要的有相關的玻璃儀器.還有就是用一個pH計,目前市面上有很多種,台式的或者筆式的均可.優點是方便快捷,但是如果是要求精度很高就難以滿足.還有一種是最簡單快捷的,就是到試劑商店,買一盒pH試紙,用試紙比色法就可以檢測酸性.精度差一些,但是如果要求不高,只是大致了解,該方法就非常實用.還有就是用一些試劑來檢測,比如說石蕊、酚酞之類的見酸變色的試劑,根據顏色變化即可判斷酸鹼.這種方法的基本上沒有太多精度可言,主要只是用於了解是酸性還是鹼性.
各種檢測方法因地制宜,按照需要來選擇.
個人認為以上方法都不太行
例如氨基酸,叫酸肯定是帶酸性的,可是氨基是鹼性的.如果一個氨基酸里的氨基足夠多,可以使氨基酸的水溶液呈鹼性,但它仍符合「含有酸性」這個條件
我認為的方法是：用鹼性的染色劑處理染色後用顯微鏡觀察,這個是最保險的
⑼ 如何讓分離單糖和多糖
1．多糖的分離
1．1分級沉澱法
糖類多數可溶於水，三糖以下尚可溶於乙醇。隨著聚合度的增大，在乙醇中的溶解度逐步降低。根據這一性質，在糖的濃水溶液中，分次加入乙醇，使酵的濃度漸增，5％。10％，15％，20％…90％，分取各次析出的沉澱，在產量和醇濃度之間畫出曲線，以此可以粗略地觀察出糖的組分。若遇糖的衍生物，如甲醚、乙酸醑，其極性低於糖，可在有機溶劑中進行分級沉澱嘲1。多糖的分子量范圍廣，且有共沉澱現象。此法只能作粗略的分離用，需反復進行及綜合使用別的方法才能達到糖的組分均一，物理常數恆定。
1.2凝膠層析法
凝膠層析法(凝膠過濾法或分子篩層析法)主要利用具有三維網狀結構的多孔性凝膠，其孔徑大小決定於合成凝膠時所加交聯劑的程度。當含有混合溶質的溶液流經適當的凝膠柱時，小分子易擴散入孔中，而大的則不易擴散，各溶質洗脫順序隨分子量由大及小，漸次流出。此法對於不同聚合度的糖類分離特別有效。方法快速、簡單，條件溫和。常用的有葡聚糖凝膠(sephadex G)、瓊脂糖凝膠(SepharoseBio—gel A)、聚丙烯醯胺凝膠(Bio—gel P)等，常用的洗脫劑是各種濃度的鹽溶液及緩沖液，但它們的離子強度最好不低於0．020。
1．3纖維素柱層析
纖維素對多糖的分離，是利用混合糖的溶液，流經預先以另一種溶劑(如乙醇)混懸的纖維素柱，多糖在此多孔支持介質上析出沉澱，再以遞減醇濃度的稀醇逐步洗脫，溶出各種多糖。流出柱的先後順序通常是水溶性大的先出柱，水溶性差的最後出柱，與分級沉澱法正好相反。此法較分級沉澱法為優，因為其接觸面大。纖維素柱層析還可用丙酮、水飽和丁醇、異丙醇、水飽和甲乙酮等，或用丁醇：乙酸：水(9：2：1)、乙酸乙酯：乙酸：水(7：2：2)等系統。混合溶液可調節其組成比例。酸性多糖層析時，可利用其和季銨鹽絡合沉澱的反應，在洗脫液中加少量十六烷基吡啶氯化物，可使分離軟骨硫酸鹽等多糖獲得好效果。
1．4離子交換纖維素層析
常用的陽離子交換纖維素有CM-cellulose、P—celhlose、SE—cellulose、SM-cellulose；陰離子交換纖維素有DEAE-cellulose、ECTE—cellulose、PAB-cellulose、TEAE-cellulose等。其中陽離子交換纖維素特別適用於分離酸性、中性多糖和粘多糖。交換劑對多糖的吸附力與多糖的結構有關，通常多糖分子中酸性基團增加則吸附力隨之增加：對於線狀分子，分子量大的較分子量小的易吸附；直鏈的較分枝的易吸附。在pH 6時酸性多糖可吸附於交換劑上，中性多糖則不能被吸附。當用硼砂將交換荊預處理後，則中性多糖也可以被吸附。分離酸性多糖所用的洗脫劑通常是pH相同離子強度不同的緩沖液，分離中性多糖的洗脫劑則是不同
濃度的硼砂溶液。
1.5季銨鹽沉澱法
陽離子型清潔劑如十六烷基三甲銨鹽(CTA鹽)和十六烷基吡啶鹽(CP鹽)等和酸性多糖陰離子可以形成不溶於水的沉澱，使酸性多糖自水溶液中沉澱出來，中性多糖留存在母液中而分離。若再利用硼酸絡合物。中性多糖亦可沉澱，或在高pH的條件下，增加中性醇羥基的解離度而使之沉澱。
1．6制各性區域電泳
分子大小、形狀及所負電荷不同的多糖其在電場的作用下遷移速率是不同的，故可用電泳的方法將不同的多糖分開，電泳常用的載體是玻璃粉。具體的操作是用水將玻璃粉拌成膠狀、裝柱，用電泳緩沖液(如0．05mol／L硼砂水溶液，pH9．3)平衡3天，將多糖加於柱上端，接通電源，上端為正極(多糖的電泳方向是向負極的)，下端為負極，其單位厘米的電壓為1．2-2V，電流30—35mA，電泳的時間為5 －12小時。電泳完畢後將玻璃粉載體推出柱外，分割後分別洗脫、檢測。該方法分離效果較好，但只適合於實驗室小規模使用，且電泳柱中必須有冷卻夾層。
1．7金屬離子沉澱法
銅鹽沉澱多糖，可用CuCl2，CuSO4，Cu(OAc)：的溶液或是Fehling試劑、乙二胺銅試劑。通常需加過量的試劑用於沉澱，但Fehling試劑不可太多過量，因其有使多糖銅復合物沉澱重新溶解的危險。沉澱分解恢復可用酸的醇溶液或用螯合試劑。常用的銅鹽分級沉澱法是Fehling試劑法和醋酸銅乙醇法。飽和Ba(OH)：溶液可使樹膠類多糖沉澱，特別容易使B(1，4)一D一甘露聚糖沉澱而和木聚糖分離。另據報道，國外多採用LKB柱色譜，用比旋光度、示差折射及紫外檢測多糖，各組分的峰位自動記錄，分離效果高且方便。
⑽ 測定糖的含量的方法有哪些
糖的測定方法
一般有四種方法：
1、 直接滴定法。
原理為 糖還原天藍色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響。
2、 高錳酸鉀滴定法。
所用原理同直接滴定法。缺點：水樣中的還原性物質能對糖的測定造成影響，過程較為復雜，誤差大。
3、硫酸苯酚法。
糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。
缺點：如果水樣呈橙紅色（大部分水樣為黃色），會對比色法造成較大的干擾。
4、蒽酮法
糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。
缺點：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。
綜合比較；採用蒽酮法能將最為准確地測定尾水中糖的含量。
（一） 直接滴定法
Ⅰ、原理
v 一定量的鹼性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍色的氫氧化銅沉澱，這種沉澱很快與酒石酸鈉反應，生成深藍色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡合物。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用標液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉澱，待二價銅全部被還原後，稍過量的還原糖把次甲基藍還原，溶液由藍色變為無色，即為滴定終點。根據樣液消耗量可計算出還原糖含量。
樣品經除去蛋白質後，在加熱條件下，以次甲基藍做指示劑，滴定標定過的鹼性酒石酸銅溶液（用還原糖標准溶液標定鹼性酒石酸銅溶液），根據樣品溶液消耗體積計算還原糖量。
Ⅱ、儀器和試劑
1．儀器
酸式滴定管，可調電爐（帶石棉板），250ml容量瓶。
2．試劑
1. 鹽酸。
2. 鹼性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基藍，溶於水中並稀釋至1000mL。
3. 鹼性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉，溶於水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解後，用水稀釋至1000 ml，貯存於橡膠塞玻璃瓶內。
4. 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3ml冰乙酸，加水溶解並稀釋至100ml。
5. 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解並稀釋至100ml。
6. 葡萄糖標准溶液：准確稱取1.0000g經過96℃±2℃乾燥2h的純葡萄糖，加水溶解後加入5ml鹽酸，並以水稀釋至1000L。此溶液相當於1mg/ml葡萄糖（註：加鹽酸的目的是防腐，標准溶液也可用飽和苯甲酸溶液配製）。
7. 果糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的果糖。
8. 乳糖標准溶液：按⑹操作，配製每毫升標准溶液相當於1mg的乳糖。
9. 轉化糖標准溶液：准確稱取1.0526g純蔗糖，用100ml水溶解，置於具塞三角瓶中加5ml鹽酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加熱15min，放置至室溫定容至1000ml，每ml標准溶液相當於1.0mg轉化糖。
Ⅲ、實驗步驟
1．樣品處理
⑴ 乳類、乳製品及含蛋白質的食品：稱取約2.50～5.00g固體樣品（吸取25～50ml液體樣品），置於250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質、鞣質、樹脂等，使它們形成沉澱，經過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結合，形成沉澱並過濾。）
⑵ 酒精性飲料：吸取100ml樣品，置於蒸發皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積1/4後，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。
⑶ 含多量澱粉的食品：稱取10.00～20.00g樣品，置於250ml容量瓶中，加200ml水，在45℃水浴中加熱1h，並時時振搖（注意：此步驟是使還原糖溶於水中，切忌溫度過高，因為澱粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結果。）。冷後加水至刻度，混勻，靜置，沉澱。吸取200ml上清液於另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉澱，靜置30 min，用乾燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。
⑷ 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100ml樣品置於蒸發皿中，在水浴上除去二氧化碳後，移入250ml容量瓶中，並用水洗滌蒸發皿，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻後備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應接近於葡萄糖標准液的濃度。）
2. 標定鹼性酒石酸銅溶液：吸取5.0ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0ml乙液，置於150ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉澱，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉澱重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9 ml葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液，直至溶液蘭色剛好褪去為終點，記錄消耗的葡萄糖標准溶液或其他還原糖標准溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計算每10 ml（甲、乙液各5 ml）鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量或其他還原糖的質量（mg）。（注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態，並且避免滴定時間過長。）
3. 樣品溶液預測：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色褪去，出現亮黃色為終點。如果樣品液顏色較深，滴定終點則為蘭色褪去出現明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺後復又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 當試樣溶液中還原糖濃度過高時應適當稀釋，再進行正式測定，使每次滴定消耗試樣溶液的體積控制在與標定鹼性酒石酸酮溶液時所消耗的還原糖標准溶液的體積相近，約在10ml左右。當濃度過低時則採取直接加入10ml樣品溶液，免去加水10ml，再用還原糖標准溶液滴定至終點，記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖標准溶液體積之差相當於10ml試樣溶液中所含還原糖的量。
4. 樣品溶液測定：吸取5.0 ml鹼性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置於150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min內加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預測體積少1 ml的樣品溶液，然後趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定直至終點。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。
5. 計算
樣品中還原糖的含量（以某種還原糖計）按下式計算。
X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100
式中：X--樣品中還原糖的含量(以某種還原糖計)，單位 g/100g；
A—鹼性酒石酸銅溶液（甲、乙液各半）相當於某種還原糖的質量，單位 mg；
m--樣品質量，單位 g；
V--測定時平均消耗樣品溶液的體積，單位 ml；
計算結果保留小數點後一位。
注意：
滴定結束，錐形瓶離開熱源後，由於空氣中氧的氧化，使溶液又重新變藍，此時不應再滴定。
（二）高錳酸鉀滴定法
v 原理 將樣液與一定量過量的鹼性酒石酸銅溶液反應，還原糖將二價銅還原為氧化亞銅，經過濾，得到氧化亞銅沉澱，加入過量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標准溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀溶液消耗量可計算出氧化亞銅的量，再從檢索表中查出氧化亞銅量相當的還原糖量，即可計算出樣品中還原糖含量。
（三）硫酸苯酚法
Ⅰ、原理
糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用於甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，並且產生的顏色穩定160min以上。
多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。
Ⅱ、試劑
1． 濃硫酸：分析純，95.5%
2． 80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。
3． 6%苯酚：臨用前以80%苯酚配製。（每次測定均需現配）
4． 標准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。
7． 6mol/L 氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶於500ml水。
8． 6mol/L 鹽酸
Ⅲ、操作。
1．製作標准曲線：准確稱取標准葡聚糖（或葡萄糖）20mg於500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數，縱坐標為光密度值，得標准曲線。
2．樣品含量測定：
①取樣品1克（濕樣）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液於10毫升離心管中，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液，重復3次。最後一次將殘渣一起到入離心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。
②離心，轉速3000轉/分鍾，共三次。第一次15分鍾，取上清液。後兩次各5分鍾取上清液到25毫升錐形比色管中。最後濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時，每次取上清液時應過濾。因為其脂肪含量大容易夾帶殘渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 鹽酸之後搖勻，在96℃水浴鍋中水浴2小時。
④定容取樣。水浴後，用流水冷卻後加入2毫升6mol/L 氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的樣品液，以蒸餾補至2.0ml，然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鍾以後於490nm測光密度。每次測定取雙樣對照。以標准曲線計算多糖含量。
Ⅳ、注意
（1）此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅製作一條標准曲線，顏色持久。
（2）製作標准線宜用相應的標准多糖，如用葡萄糖，應以校正系數0.9校正μg數。
（3）對雜多糖，分析結果可根據各單糖的組成比及主要組分單糖的標准曲線的校正系數加以校正計算。
（4）測定時根據光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小於0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大於0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。
（四）蒽酮法
Ⅰ、實驗原理
糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用於糖的測定。
該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖和己糖，而且可以測所有的寡糖類和多糖類，其中包括澱粉、纖維素等（因反應液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發生反應。所以，用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。
Ⅱ、試劑：
蒽酮試劑，0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%濃硫酸中，冰箱保存；
Ⅲ、方法：
樣品2.0 mL加5.0 mL蒽酮試劑，混勻，然後水浴煮沸10 min，取出冷卻至室溫，在620 nm處測定其吸光度，根據標准曲線計算水樣中糖的濃度。（標線以葡萄糖為標樣）