轉錄檢測方法

㈠ 如何檢驗目的基因是否轉錄

檢測目的基因是否轉錄通常採用分子雜交的方法。

• 基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以DNA（基因）為模板生成mRNA的過程，翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平：即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。

• 轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交，它是以DNA或RNA為探針，檢測RNA鏈。和Southern雜交相同，Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

• 也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄，然後再經PCR擴增。如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與Northern雜交的實驗結果結合

㈡ 設計一個檢測某一基因是否轉錄的檢測方法的實驗，簡述其過程與原理。

原理：轉錄是以一條DNA鏈為模板，合成出一條mRNA的過程。所以，檢測某一基因在特定條件下是否轉錄，可以提取樣品的mRNA，反轉錄成cDNA，然後用擴增該基因的PCR引物擴增，如果有條帶就是說明轉錄，沒有條帶就是不轉錄。
過程：
1.提取樣品mRNA；
2.反轉錄合成cDNA；
3.設計該基因特異的PCR引物；
4.進行PCR擴增，電泳，檢測結果。

㈢ 如何在轉錄水平 檢測某基因的表達

可以使用northern印記法。首先用放射性磷同位素制備與目標基因序列一直的RNA探針。然後將目標基因導入大腸桿菌培養一段時間。人為裂解大腸桿菌，用冷酸法提取RNA。將提取的RNA用選擇性內切酶處理後過電泳，使各段RNA分開。再將電泳圖譜固定於纖維膜，以制備好的放射性RNA探針與之雜交，隨後進行放射性自顯影。若有顯影印跡出現，則證明大腸桿菌中有與探針RNA序列互補的RNA被轉錄，進而證明了目標基因的被表達。

㈣ 檢測目的基因是否轉錄出mRNA的方法！！

檢測目的基因是否導入用的是DNA-DNA分子雜交，檢測是否轉錄用DNA-RNA分子雜交，檢測是否翻譯用抗原-抗體雜交。

㈤ 如何用實時定量檢測轉錄本的過表達

你所說的PCR應該就是最常規的PCR，以DNA為模板，通過上下游引物，實現DNA的擴增
RT-PCR一般情況下是指反轉錄PCR（reverse transcription），盡管有些資料上說實時熒光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也簡稱RT-PCR，但是我覺得這是不對的，不。基本操作過程是將所提取的RNA進行反轉錄，然後將所獲得的cDNA作為模板，設計引物進行擴增，是一種檢測基因表達的常用方法。
實時熒光定量PCR也就是Real-Time PCR，原理有點多，請自行網路，其最大的作用是檢測樣品中的初始DNA濃度。
至於三者的關系，RT-PCR和實時定量PCR應該都屬於PCR，在RNA實驗中，這二者都會應用到。例如你要比較2個組織中的某基因的表達差異，首先你要提取2個組織的總RNA，然後通過RT-PCR檢測該基因是否在2個組織中有表達，然後通過實時定量PCR測定該基因在2個組織中的表達量是否具有顯著性差異

㈥ 檢驗目的基因是否轉錄用什麼方法

應用分子雜交進行檢測。
分子雜交技術：不同的DNA
片段之間，DNA
片段與RNA
片段之間，如果彼此間的核苷酸排列順序互補也可以復性，形成新的雙螺旋結構。這種按照互補鹼基配對而使不完全互補的兩條多核苷酸相互結合的過程稱為分子雜交。檢測目的基因是否進行轉錄，即有無互補RNA產生，可以使用分子雜交技術。

㈦ 檢測基因表達的方法有哪些

基因工程第四步中包括導入檢測，轉錄檢測和翻譯檢測，方法分別是dna分子雜交技術、分子雜交技術、抗原-抗體雜交技術。有的還可在個體水平是進行檢測，如抗性檢測等

㈧ 分子雜交如何檢測轉錄

檢測目的基因是否導入用的是dna-dna分子雜交，檢測是否轉錄用dna-rna分子雜交，檢測是否翻譯用抗原-抗體雜交。
前兩者都是通過一條被標記的dna單鏈作為基因探針來實現的。這個探針具體的做法就是：用目的基因轉錄出的mrna為模板，以被放射性同位素標記的脫氧核苷酸為原料，用逆轉錄的方法合成一條被標記的dna，然後把模板的mrna給水解掉，這樣就得到一條被標記的dna單鏈，這就是探針。它的特點就是可以和目的基因轉錄的mrna互補配對（即能形成雜交帶），所以把探針放在受體細胞中如果發現有雜交帶產生，就說明目的基因轉錄了。
另外，這個探針也可以用來做dna-dna分子雜交，即檢測目的基因是否導入，方法：先取出受體細胞中dna然後高溫變性成單鏈，把探針放進去，然後降溫復性，如果形成雜交帶說明，這些dna中有能和探針互補的dna片段，即目的基因。因為這個探針本身就是由mrna逆轉錄來的，它的鹼基序列與目的基因的一條鏈完全相同，當然就可以和另外一條鏈剛好互補了。
這樣可以嗎？

㈨ 反轉錄成功怎樣檢測

1。如果是針對目的基因
反轉錄為cDNA
將cDNA加到T載體上 去測序。
查看測序結構撒

2。如果想知道你是否獲得了DNA，直接電泳，可以看到一條彌散的帶。

㈩ 檢測基因表達的方法

主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)

一、外源基因轉錄水平的鑒定

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以DNA（基因）為模板生成mRNA的過程，翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。

即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交，它是以DNA或RNA為探針，檢測RNA鏈。和Southern雜交相同，Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄，然後再經PCR擴增。

如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與Northern雜交的實驗結果結合。

二、外源基因表達蛋白的檢測

表達蛋白的檢測方法有三種：

1、生化反應檢測法：主要通過酶反應來檢測；

2、免疫學檢測法：通過目的蛋白（抗原）與其抗體的特異性結合進行檢測，具體方法有Western雜交、酶聯免疫吸附法（ELISA）及免疫沉澱法；

3、生物學活性的檢測。

Western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離抗原（Antigen）固定在固體支持物上（如硝酸纖維素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同，據此可確定特定的抗原存在與否以及相對豐度，或者蛋白質是否遭到降解等。

蛋白質電泳後轉到NC膜，放在蛋白質（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，溫育，以封閉非特異性位點，然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交，抗原-抗體結合，再通過放射性自顯影或顯色觀察。

(10)轉錄檢測方法擴展閱讀

外顯子與內含子表達過程中的相對性 從內含子與外顯子的定義來看，兩者是不能混淆的，但是真核生物的外顯子也並非都「顯」（編碼氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外顯子完全「不顯」之外，幾乎全部的結構基因的首尾兩外顯子都只有部分核苷酸順序編碼氨基酸，還有完全不編碼基酸的外顯子，如人類G6PD基因的第一外顯子核苷酸順序。

已發現一個基因的外顯子可以是另一基因的內含子，所這亦然。以小鼠的澱粉酶基因為例，來源於肝的與來源於唾液腺的是同一基因。澱粉酶基因包括4個外顯子，肝生成的澱粉酶不保留外顯子1，而唾液腺中的澱粉酶則保留了外顯子1的50bp順序，但把外顯子2與前後兩段內含子一起剪切掉，經過這樣剪接，外顯子2就變成唾液澱粉酶基因中的內含子。

同一基因在不同組織能生成不同的基因產物來源於不同組織的類似蛋白，可以由同一基因編碼產生，這種現象首先是由於基因中的增強子等有組織特異性，它能與不同組織中的組織特異因子結合，故在不同組織中同一基因會產生不同的轉錄物與轉錄後加工作用。

此外真核生物基因可有一個以一的poly(A)位點，因此能在不同的細胞中產生具有不同3』末端的前mRNA，從而會有不同的剪接方式。由於大多數真核生物基因的轉錄物是先加poly(A)尾巴，然後再行剪接，因此不同組織、細胞中會有不同的因子干預多聚腺苷酸化作用，最後影響剪接模式。