存活檢測方法

① 細胞活力測定常用的簡便方法

又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水，需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的准確性產生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。

② 精子成活率怎麼檢查

檢查精子存活率，一般建議你到正規醫院，這樣比較有保障。精子存活率是指一滴精液中活精子的比例。

一般來說，在進行精子存活率檢查之前，男性不能喝酒，不能吃辛辣刺激性食品，禁慾7天後就可以到醫院去檢查了。

一般會通過自慰取得精液後通過分析精液量、精子密度及其精液中精子的總數量、精子凝集、精子活力與活率、精子形態、精液液化等各方面的情況來確定精子的存活率是否正常。

正常情況下，精子的成活率應該是大於85%-90%的，能定向運動，爬高5厘米。

(2)存活檢測方法擴展閱讀：

注意事項

1、改變不好的生活習慣，戒掉煙酒。經常的吸煙對精子的質量會產生很大的影響，飲酒後男性70%的精子會出現異常，即使受孕也可能造成胎兒發育不良。

2、注意休息，不易過於勞累。男性工作壓力大，睡眠不足等也容易造成身體疲憊、易怒，內分泌失調，從而影響性功能及精子質量。

3、養成鍛煉身體的好習慣，男性免疫能力低，肥胖和虛弱的身體都會降低精子質量。如果能適當的運動，無形中也能增加精子的活躍程度。

4、注意飲食，多補充些營養。精子的生成需要多種維生素、蛋白質、鈣、鋅等營養素，飲食不合理會造成精子先天不足。因此，男性應該注重一下自身的營養是否跟得上。

5、干凈衛生的性生活，也有利於精子的質量。如果夫妻之間的性生活不注意衛生，可引進局部感染，或者一些常見的婦科疾病也可能通過共同生活傳染給自己的性伴侶。

因此，男性應該注重衛生的性生活，才會減少感染，提高精子質量。

參考資料：網路-精子成活率

③ 軟骨細胞成活率怎麼檢測

發明公開了一種軟骨組織細胞存活率檢測方法，包括：將軟骨組織剪切成小碎塊，用0.25％胰蛋白酶‑EDTA2Na水浴消化；離心後再用0.2％Ⅱ型膠原酶水浴繼續消化；待軟骨消化變為絮狀，加入DMEM培養液中止消化後200目篩網過濾，取濾液離心，棄上清液；向細胞懸液中加入FDA和EB，避光孵育；使用IPP圖像分析軟體對圖片中綠色和紅色細胞計數，根據公式計算軟骨組織細胞存活率。本發明利於充分消化分離軟骨細胞，減少了消化分離過程中對軟骨細胞造成的損傷，利於維持細胞活性，避免了雙熒光染劑激發波長不同所致的繁瑣，簡化了操作；用於關節軟骨損傷治療方案優劣的篩選以及組織庫軟骨保存效果的評價。

④ 精子成活率怎樣檢查

精子對於男性朋友來說是很重要的，因為精子的在形成新生命中是不可缺少的。所以在平常的時候，就要對它要有所的認識，但是因為精子的存活率又決定生育能力的強與弱，在出現不育的時候，就要對精子存活率進行檢查，從而確定是不是精子發生了異常。現在就來對此檢查進行了解下。

1、精液常規查：現在常規的精液分析主要是能了解到男性的精液量、精子密度還有其精液中精子的總數量、精子活力與活率、精子形態、精液液化等方面的信息。

2、宮頸粘液穿透試驗：一般，影響到精子穿透宮頸粘液的常見的原因是宮頸粘液的理化狀態、精漿酶的活性、精子的運動質量等。了解精子和宮頸粘液的相互作用，在臨床現在多數是採用性交後試驗的方法。

3、低滲腫脹試驗：在精子的各種功能中，精子膜的功能可以直接影響到男性精子的獲能、精子的頂體反應和精卵融合等，通過該試驗可預見精子細胞膜的完整性和順應性，因而也是較為常用的一種檢測方法。

⑤ 精子成活率怎麼檢測啊

檢測精子成活率，主要是靠精液檢查。首先通過手淫或通過跟性伴侶的性生活後，把精液取出，一般取3ml左右，然後在精液取之後，一定要在30分鍾之內要送到化驗室，否則超過時間，整個化驗的質量或數量就不準確，臨床中通常通過服用育希、生精膠囊等來提升精子成活率。

⑥ 細胞活力測定常用的簡便方法是

MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點：由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水，需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的准確性產生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示，活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法，最簡便常用的方法是台盼藍（trypanblue）染色法。台盼藍又稱錐藍，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色，但死亡細胞的細胞膜通透性增加，可使染料通過細胞膜進入細胞內，使死細胞著色呈藍色。

⑦ 檢測細胞存活率的方法

MTT或台酚藍染色，被染上的為活細胞，鏡下計數。

⑧ 某單位要求知道一種乾酵母粉中的活菌存活率,請設計1到2種的可行的檢測方法

用待測樣品與標准樣品進行對比發酵試驗。可以根據發酵成熟時間或者發酵產物的生成量，或者產物生成速度對比，來求得樣品中的活菌的成活率。

檢測方法有：

1、發酵成熟時檢測並計算活菌存活率。

2、比校發酵產物的生成量計算活菌存活率。

3、計算生成物的生成速度對比，計算活菌的成活率。

(8)存活檢測方法擴展閱讀：

培養將所試菌肉湯培養物劃線接種營養瓊脂,36 °C培養24~ 48h，自同一單個菌落取菌,分別接種單雙管法 O / F 試驗培養基,其中單管法用接種針穿刺接種至管底。同時設不加葡萄糖接種發酵型細菌和加有葡萄糖不種菌的空白對照。36°C培養24h，開始觀察結果,每24h記錄一次,共觀察4d。

⑨ 現在細胞存活率測試用什麼是主流

細胞計數和存活測試
1. 原理：
1.1. 計算細胞數目可用血球計數盤或是Coulter counter 粒子計數器自動計數。
1.2. 血球計數盤一般有二個chambers，每個chamber 中細刻9 個1 mm2 大正方形，其中4 個角落之正方形再細刻16 個小格，深度均為0.1 mm。當chamber 上方蓋上蓋玻片後，每個大正方形之體積為1 mm2 x 0.1 mm=1.0 x 10-4 ml。使用時，計數每個大正方形內之細胞數目，乘以稀釋倍數，再乘以104，即為每ml 中之細胞數目。
1.3. 存活測試之步驟為dye exclusion，利用染料會滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue 染料，如果細胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish。
2. 材料：
2.1. 0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061)
2.2. Erythosin bluish stain
取0.1 gram Erythrosin bluish (Sigma E-9259) 及0.05 gram preservative methyl
paraben (Sigma H-3647) 溶於100 ml Ca++/Mg++ free saline
2.3. 血球計數盤及蓋玻片(Hemocytometer and coverslip)
2.4. 計數器(counter)
2.5. 低倍倒立顯微鏡
2.6. 粒子計數器(Coulter counter, Coulter Electronics)
3. 步驟：
3.1. 取50ml 細胞懸浮液與50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等體積混合均勻於1.5ml 小離心管中。
3.2. 取少許混合液(約15ml) 自血球計數盤chamber 上方凹槽加入，蓋上蓋玻片，於100 倍倒立顯微鏡下觀察，活細胞不染色，死細胞則為藍色(或紅色- Erythrosin bluish)。
3.3. 計數四個大方格之細胞總數，再除4，乘以稀釋倍數(至少乘以2，因與trypan blue 等體積混合)，最後乘以104 ，即為每ml 中細胞懸浮液之細胞數。若細胞位於線上，只計上線與右線之細胞(或計下線與左線之細胞)。
4 大格*細胞總數x 2 x 104 / 4= 細胞數/ml
*每一大格的體積= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10-4 ml
3.4. 若不用血球計數盤，可用Coulter counter 作自動計數，惟無法辨別死細胞或活細胞。
3.5. 範例：
T75 monolayer culture 製成10ml 細胞懸浮液，取0.1 ml 溶液與0.1ml trypan blue 混合均勻於試管中，取少許混合液加入血球計數盤，計數四大方格內之細胞數目。
活細胞數/方格：55 ,62, 49, 59
死細胞數/方格：5, 3, 4, 6
細胞總數= 243
平均細胞數/方格= 60.75
稀釋倍數= 2
細胞數/ml：60.75 x 104 x 2 = 1.22 x 106
細胞數/flask： 1.22 x 106 x 10ml = 12.2 x 106
存活率：225/243﹦92.6 %

⑩ 怎樣檢測細胞的生長，存活及增殖

BrdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。