微生物學病毒的檢測方法

1. 致病菌感染的微生物學檢查基本程序是怎麼樣的

病原微生物種類繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗技術也在不斷發展前進著。目前，應用比較廣泛的病原微生物檢測方法主要有直接塗片鏡檢、分離培養、生化反應、血清學反應、核酸分子雜交、基因晶元、多聚酶鏈反應等，該文對這些檢測技術進展做一綜述。 對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體，有病毒、細菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過敏、腫瘤、痴獃等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來出現的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強，往往造成世界性大流行，因此對病原體的檢測必須做到快速、准確。常規病原學檢測方法操作繁瑣，檢測周期長，而且對操作人員技術水平要求比較高。隨著醫學微生物學研究技術的不斷發展，病原學診斷已不再局限於病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測手段不斷出現並被應用於臨床和實驗室 J。核酸分子雜交技術、PCR技術、基因晶元技術等檢測方法，自動化程度高，快速省時、無污染、結果精確，可以准確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統的病原微生物的檢測方法傳統的病原微生物學實驗室檢查以染色、培養、生化鑒定等為主，將標本直接塗片染色鏡檢和接種在培養基上進行分離培養是對細菌或真菌感染性疾病進行病原學診斷的常用方法。1．1 直接塗片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無色半透明狀，將其染色後可藉助顯微鏡觀察其大小、形態、排列等。直接塗片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形態的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接塗片鏡檢不需要特殊的儀器和設備，在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。1．2 分離培養與生化反應 分離培養主要用於臨床標本(如血液、痰、糞便等)或培養物中有多種細菌時對某一種細菌的分離。細菌的生長繁殖需要一定時間，檢測周期較長，不能同時處理批量樣本。為解決這一問題，各種自動化培養和鑒定系統不斷產生，傳統鑒定方法也在逐步改進，大大加快了檢驗速度。例如Microscan WalLCAway全自動微生物分析儀，可同時做細菌鑒定和葯敏試驗，檢驗500多個菌種。苛養菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養要求比較高，常規培養陽性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米澱粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養基中製成了新型淋病奈瑟菌培養基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養率。蘇盛通等在營養瓊脂中加人了中葯紅棗、赤小豆培養甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細菌，生長指數明顯高於血平板。1．3 組織細胞培養 活組織細胞培養適於專營活組織細胞內生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細胞是不一樣的，將活細胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進行原代培養或用病原體敏感細胞系進行傳代培養，再將病原體接種於相應的組織細胞中後，病原體可在其中繁殖增長，引起特異性的細胞病變效應。也可以將病原體直接接種於敏感動物體內，引起相應組織器官出現特異的病理學改變。往往可以根據這些特異的病變對病原體進行鑒定。2 血清學與免疫學檢測血清學檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進行快速鑒定的技術，簡化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術、協同凝集試驗、酶聯免疫測試技術等。酶聯免疫技術的應用大大提高了血清學檢測的敏感性和特異性，不僅可檢測樣本中病原體抗原，也可檢測機體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達50％ ～80％ ，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染，其結果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率極高，ELISA應用於乙型肝炎病人早期血清學診斷的效果最為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細菌中分離出目標菌是關鍵。免疫磁珠分離技術(IMBS)是近年來發展起來的在微生物檢測領域中一種新技術。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯到磁珠微球上，通過抗原抗體反應形成磁珠一目標病原體復合物或磁珠一一抗一目標病原體復合物，在外部磁場磁力的作用下，將目標病原體分離出來。目前已經開發出了針對各種病原體的免疫磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團菌等，廣泛應用到各級科研和實驗室 。經IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測，檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術聯合來檢測病原菌，免疫磁珠分離得到的目標菌可繼續用於分離培養使大腸埃希菌0157最低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結合聚合酶鏈反應(IMBS—PCR)可對培養條件比較特殊的細菌如苛養菌、厭氧菌進行快速檢測，肉類中的產毒素型產氣莢膜梭菌經IMBS．PC

2. 逆轉錄病毒微生物學檢查

臨**常用的實驗室檢測HIV感染指標，主要用於AIDS或HIV感染者的診斷並指導用葯，監測高危人群以便及時發現傳染源，控制其繼續傳播。
1.HIV-1抗體檢測包括篩查試驗（含初篩和復檢）和確證試驗。機體被HIV感染4～8周後，血清抗-HIV開始出現，6個月後均轉為陽性。目前HIV-1/2抗體篩查方法包括酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、化學發光或免疫熒光試驗、快速檢測（斑點ELISA和斑點免疫膠體金等。確證試驗常用的方法是免疫印跡法（WB）。如HIV-1抗體篩查兩次均為陽性，則需蛋白印跡試驗（Westernblot，WB）進行確證，方可報告HIV感染。
2.病毒載量測定病毒載量一般用血漿中每毫升HIVRNA的拷貝數（copies/ml）或每毫升國際單位（IU/ml）來表示。應用RT-PCR等方法檢測病毒核酸，是檢出早期HIV感染或無症狀攜帶者急性發作，以及預測疾病進展和治療效果的參考指標。
3.外周血CD4+T細胞數量測定應用流式細胞儀測定外周血中CD4+T細胞數量，用以判斷HIV復制狀態，了解機體的免狀態和病程進展，確定疾病分期和治療時機。
4.HIV基因型耐葯檢測耐葯測定方法有基因型和表型，目前國內外多用基因型。HIV基因型檢測出現HIV耐葯，表示該感染者體內病毒可能耐葯。HIV耐葯檢測結果可為艾滋病治療方案的制定和調整提供重要參考依據。

3. 簡述hiv的微生物學檢測方法有哪些

簡述hiv的微生物學檢測方法有哪些
梅毒是由蒼白螺旋體感染引起的一種性傳播性疾病 。梅毒螺旋體感染人體後出現兩種抗體：一種是特異性抗體(TPHA)，為lgM。當有補體存在和厭氧條件下，對活螺旋體的動力有抑製作用，並可將螺旋體殺死或溶解，對機體的再感染有保護作用。另一類是非特異性抗體（快速血漿反應素 RPR）。為lgA與lgM的混合物，可與正常生物組織中的類脂抗原發生非特異性結合，對人體無保護作用

4. 簡述病毒病的微生物學診斷程序

簡述病毒病的微生物學診斷程序
微生物學檢查
（1）病料採集：取病畜禽的組織，肝，肺，脾等體液、分泌物及局部病灶的滲出液。 （2）鏡檢：對原始病料塗片進行革蘭氏染色，鏡檢，應為革蘭氏陰性。用印度墨汁等染料染色，可見清晰的莢膜。 （3）培養：同時接種鮮血瓊脂和麥康凱瓊脂培養基，37℃培養24h，觀察細菌的生長情況，菌落特徵、溶血性，並染色鏡檢。 （4）生化試驗：多殺性巴氏桿菌在48h內可分解葡萄糖、果糖、單奶糖、蔗糖和甘露糖，產酸不產氣。一般不發酵乳糖、鼠李糖、菊糖、水楊苷和肌醇。可產生硫化氫，能形成靛基質，MR和V-P試驗均為陰性。接觸酶和氧化酶試驗均為陽性。溶血性巴氏桿菌不產生靛基質，能發酵乳糖產酸。能發酵葡萄糖、糖元、肌醇、麥芽糖、澱粉；不發酵側金盞花醇、菊糖和赤蘚醇。
動物試驗
常用的試驗動物有小鼠和家兔。實驗動物死亡後立即剖檢，並取心血和實質臟器分離和塗片染色鏡檢，見大量兩極濃染的細菌即可確診。
血清型或生物型鑒定
可用被動血凝試驗、凝集試驗鑒定多殺性巴氏桿菌莢膜血清群和血清型。用間接血凝試驗測溶血性巴氏桿菌的血清型，根據生化反應鑒定該菌的生物型。（以上內容是我查到的資料，希望對你有所幫助！）

5. HTLV病毒的微生物學檢查

病毒分離採用PHA處理的患者淋巴細胞，加入含IL-2的營養液培養3~6周，電鏡觀察病毒顆粒，並檢測上清液逆轉錄酶活性，最後用免疫血清或單克隆抗體鑒定。抗體檢測可用ELISA法、間接IFA和膠乳凝集法，也可用免疫印跡法和PCR法等檢測抗原或病原體。血液中HTLV-Ⅰ抗體的存在即可診斷為該病毒感染；而血液中異常淋巴細胞數量的大量增生，同時證實這些淋巴細胞中有HTLV-ⅠDNA，則可支持成人T淋巴細胞白血病的診斷。

6. 細菌的微生物學檢驗包括哪些程序

細菌的微生物學檢驗包括哪些程序：
微生物包括：細菌、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類等在內的一大類生物群體以及病毒，它個體微小、種類繁多、與人類關系密切。涵蓋了有益跟有害的眾多種類，廣泛涉及食品、醫葯、工農業、環保等諸多領域。微生物指標是衡量食品安全最常見、最重要的因素之一 。食品中如果含有超出一定數量的微生物，不僅會使食物變質、腐敗、失去營養價值，而且還會危害人類的健康和安全。
微生物菌種檢測
檢測產品：
大腸桿菌、大腸埃希氏菌、菌落總數、酵母和黴菌數量、綠膿桿菌、李斯特氏菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、阪崎腸桿菌、志賀氏菌、溶血性鏈球菌、商業無菌、金黃色葡萄球菌、產氣莢膜梭菌、無菌測試、微生物限量、腸道球菌數、下菌落總數等；
微生物菌種檢測
檢測項目：
【常規項目】
菌落總數、大腸菌群、大腸桿菌、黴菌、酵母菌等；
【致病菌】
沙門氏菌、單核增生李斯特氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、創傷弧菌、彎曲桿菌屬、阪崎腸桿菌、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌、肉毒梭菌、產氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸埃希氏O157：H7/NM、致瀉大腸埃希 氏菌、溶藻弧菌等；
微生物菌種檢測
【其他】
軍團菌、乳酸菌、罐頭食品的商業無菌、腸桿菌科、嗜滲酵母、糞鏈球菌、糞大腸菌群、腸桿菌屬、厭氧菌落總數、厭氧亞硫酸鹽還原菌、需氧嗜溫菌芽孢、厭氧嗜溫菌芽孢、嗜熱嗜酸菌、嗜熱菌落總數、白色念珠菌等；
【實時PCR快速檢測】
沙門氏菌、單核增生李斯特菌、大腸桿菌O157:H7/NM；
【抗菌性測試】
塑料製品，陶瓷，其他抗菌材質；
【葯典常規測試】
USP 62，Ch。
微生物菌種檢測
檢測標准：
食品微生物學檢驗菌落總數測定 GB 4789.2-2016.
食品微生物學檢驗大腸菌群計數 GB 4789.3-2016.
食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗 GB 4789.4-2016 (不測血清分型)
食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗 GB 4789.5-2012.
食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗 GB 4789.7-2013 (不測血清分型、神奈川試驗)
食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗 GB 4789.10-2016.
食品微生物學檢驗 β型溶血性鏈球菌檢驗 GB 4789.11-2014.
食品微生物學檢驗 蠟樣芽孢桿菌檢驗 GB 4789.14-2014.
食品微生物學檢驗 黴菌和酵母計數 GB 4789.15-2016.
食品衛生微生物學檢驗 調味品檢驗 GB/T 4789.22-2003.

7. 微生物學的檢查方法是有哪些

微生物學檢查法

標本

因鼠疫傳染性極強，採集標本時必須嚴格無菌操作。根據病型採取淋巴結穿刺液、腫脹部位組織液、膿汁，血液和痰等。人和動物屍體可取肝、脾、肺、病變淋巴結以及心血等。陳舊屍體取骨髓。將採集標本送至有嚴密防護措施的專門實驗室進行檢查，禁止在一般實驗室進行操作。

直接塗片鏡檢

除血液標本外，一般均需塗片或印片，乾燥後用甲醇固定，革蘭染色或呂氏美蘭染色，鏡檢。在不同材料中，菌體大小、形態有很大差異，除典型形態外，往往可見菌體呈多形態性，需加以注意。

分離培養與鑒定

血液標本需先置肉湯中進行增菌培養。分離培養一般選用血瓊脂平板，28攝氏度24小時後，可見較小的露滴狀菌落，繼續培養則菌落增大至1～2毫米，中央厚而緻密，周邊逐漸變薄。取可疑菌落進行塗片染色鏡檢，噬菌體裂解試驗，血清凝集試驗，特異熒光抗體染色等作出鑒訂。

血清學試驗

可用於檢查鼠疫耶爾森菌抗原或特異性抗體。敏感而特異的試驗方法有ELISA、固相放射免疫分析，SPA協同凝集試驗等。

檢測核酸

用DNA探針雜交方法或PCR技術檢測鼠疫耶爾森菌核酸，有助於鼠疫的診斷。PCR敏感性極高，蚤體內有10個鼠疫耶爾森菌感染即可用PCR技術檢出。

診斷檢查

診斷：取決於病人有接觸史及肺部受累表現，病因診斷取決於痰、血或淋巴結吸出物革蘭染色、培養，有條件的單位可作直接熒光素標記抗體染色，可提供快速的病因診斷。

8. 微生物學檢查主要包括哪三樣

微生物學檢查的方法

臨床微生物學實驗室接到標本後應立即進行微生物學檢驗。主要包括直接鏡檢、檢測特異性抗原或病原體成分、進行分離培養和鑒定、體外葯敏試驗等。

（一）直接鏡檢

標本經塗片染色或制備濕片鏡檢，有些標本如尿液、腦脊液等經過離心濃縮後鏡檢出其初步結果對有些病人標本有診斷參考價值。直接鏡檢對於確定進一步檢出步驟及鑒定方法也很有幫助。另外，直接鏡檢還可評價標本是否符合檢驗要求。

（二）快速診斷

快速檢測病原體成分主要是指特異性抗原和核酸檢測。特異性抗原檢測包括免疫熒光技術、膠乳凝集試驗、酶免疫技術、對流免疫電泳、化學發光免疫測定等。核酸檢測包括核酸探針雜交、PCR技術。其他快速檢測法還有氣-液相色譜法、化學發光、生物發光測定法和基因或蛋白微型陣列晶元技術等。

（三）直接葯敏試驗

直接葯敏試驗即在分離培養病原體的同時，直接將臨床標本接種於平板，用抗生素紙片作葯物敏感性試驗，在18～24h內可獲得結果。但因其在試驗時接種量難以標准化，且對混有雜菌和混合感染的標本不易明確其結果，故分離出純培養物後應再作體外葯物敏感試驗。

（四）常規檢驗

1.分離培養：通常由正常無菌部位採取的標本接種血平板，置於空氣或含5％～10％CO2的氣缸中培養，大部分細菌可於24～48h生長良好。若原始培養為陰性，但據鏡檢結果和臨床信息提示可能有病原菌存在，則應再採集大量標本，離心濃縮或溶解離心法處理，取沉澱接種營養豐富的需氧或厭氧培養基來培養。

對於存在正常菌群部位採集的標本，分離時應採用選擇培養基以利於病原菌生長，也可加某些抗生素抑制污染菌的生長。對於某些感染標本中發現的細菌，如尿路感染的尿液中檢出大腸埃希菌，可能是病原菌，也可能是污染菌或正常菌群，其臨床意義的確定有賴於定量培養法。即取一定量的標本如液體標本用液體培養基作一系列稀釋；組織標本稱量後製成懸液，並稀釋成l0-1，10-2，10-3等，分別取0.1ml塗布於血瓊脂平板或傾注培養，35℃24h後計算每克標本所含細菌數。

2.鑒定：分離出的細菌一般應經過細菌形態、菌落特點、生化反應、血清學試驗、動物接種等鑒定。目前尚有某些微量鑒定系統，其鑒定快速、簡便，值得推廣。如用於鑒定腸桿菌科的20E，鑒定非發酵菌的20NE及鑒定厭氧菌的20A等。

3.體外純菌葯物敏感性試驗：常用方法包括抑菌試驗、殺菌試驗、聯合葯敏試驗和檢測細菌產生的抗生素滅活酶等。

（五）報告

直接鏡檢要求2h報告，說明標本是否合格，發現微生物情況和特點；初步鑒定和直接葯敏結果於24h或次晨報告，報告可能的病原菌和直接葯敏結果；最後鑒定和細菌葯敏結果一般不超過3天，還規定除血培養外，所有送檢標本必須在24h內預報。

9. 如何利用微生物學相關知識來診斷細菌性病毒

1.形態學檢查：①細菌染色檢查法：革蘭染色法；抗酸染色法是鑒定結核和麻風等分枝桿菌屬細菌的重要方法；②暗視野檢查，易於觀察不染色活菌，故常用於檢查活菌、螺旋體及其動力。
2.病原菌的分離培養。
3.生化試驗用糖發酵試驗、吲哚試驗、硝酸鹽還原試驗等對細菌的酶系統和其代謝產物的檢查。
4.血清學鑒定。
5.動物實驗。
6.毒力檢測。
7.葯物敏感試驗半數致死量（LD50）或半數感染量（ID50）概念：即在一定時間內，通過一定的途徑，使一定體重的某種實驗動物半數死亡或感染的最小毒素量或最少細菌數。

10. 水痘-帶狀皰疹病毒的微生物學檢查法

臨床典型的水痘或帶狀皰疹，一般不需要實驗室診斷。但對無免疫應答和症狀不典型的患者，可應用皰疹液做電鏡快速檢查，或細胞培養來分離病毒；或應用免疫熒光試驗檢測皰疹底基部材料塗片和活檢組織切片的皰疹病毒抗原；或應用PCR擴增腦脊液的VZV DNA。這些方法都有助於明確診斷。