1. 檢測組織sod時，抑制率超過60怎麼選擇
SOD酶的活力的測定方法如下：
直接法 原理是根據O2 或產生O2 的物質本身的性質測定O2 的歧化量，從而確定SOD的活性。經典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由於所需的儀器設備價格昂貴，一般較少應用。
2.一般化學法 這些方法的共同特點是要有一個O2 的產生體系和一個被O2 還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 還原或氧化檢測體系的反應受到抑制。根據反應受抑製程度，測定SOD的活性。一般化學法有鄰苯三酚自氧化法、細胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和鹼性二甲亞碸法。
2. SOD的測定方法有哪些
1、測定方法很多，常見的有化學法、免疫法和等電點聚焦法。其中化學法應用最普遍，化學法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過程中會產生有色中間物和O2 -，利用SOD分解而間接推算酶活力。
2、在化學方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚法，化學發光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學擴增法，Cyte還原法等。
（1）改良的鄰苯三酚自氧化法簡單易行較為實用。
（2）化學發光法和光化學擴增法不適用於測定Mn-SOD，但對於Cu/Zn-SOD反應極靈敏。
（3）Cyte還原法用於Mn-SOD活力測定結果穩定，重復性好。但專一性和靈敏度不夠理想，而且需要特殊儀器，實際應用受到限制。
（4）亞硝酸鹽形成法與CN—抑制劑或SDS處理相結合，應用於Mn-SOD測定，靈敏度比Cyte還原法提高數倍，而且專一性強，重復性好，操作方便，不需要特殊儀器和設備，易於實際應用和推廣，是目前較好的測定方法之一。
超氧化物歧化酶(SOD) 超濾法生產新工藝
前 言
SOD的中文名稱是超氧化物歧化酶，其英文名為Superoxide dimutase，分子量(牛血紅細胞) 約 32000 是廣泛存在生物體內的金屬蛋白醇 ， 別名有 ： orgotein，ormetein，ontosein； Cu.Zn-SOD；Palosein等，SOD被科學家譽為21世紀最有發展前途的葯用酶。
一、本工藝是從紅細胞，肝和其它哺乳動物組織分離而得的金屬酶；含兩個亞基，每個亞基各含一個銅原子和一個鋅原子，SOD可催化O2，歧化為H2O和O2， 其性質不僅僅取決於酶蛋白，而且還取決於活性部位的金屬離子，按金屬離子類型不同， 可分為Cu.Zn--SOD和Fe--SOD，Mn--SOD三種.在一般條件下，SOD較穩定. 不同來源的 Cu.Zn--SOD，其紫外吸收光譜略有差異，如牛血SOD在258nm處顯示最大吸收，而豬血SOD的最大吸收峰為265nm，在特定條件下，酶的活性可下降，甚至完全喪失， 如氰化物可抑制SOD活性，雙氧水使SOD活性下降，氯化胍能明顯抑制SOD活性等。
二、SOD用途主要是基於SOD是超氧陰離子清除劑，超氧陰離子(O2~)是人體內有毒物質，它能引起多種疾病，故能清除炎症過程中伴同產生的超氧離子， 而顯示出強大的抗炎作用。
在醫葯工業：SOD可以治療由於超氧離子引起的各種疾病，如糖尿病，白內障， 風濕性關節炎等，也是消炎的有效葯物，而且還能抗衰老，抗腫瘤，抗輻射， 抗自身免疫疾病，現代研究表明：SOD還能治高血壓，冠心病，膽囊炎，肺氣腫等難治之症. 日用化學工業：由於SOD有防止細胞老化和解毒等功效， 因此在化妝品和護膚劑等工業產品中，添加SOD之後，具有防曬，祛斑，使皮膚柔嫩的作用.是目前化妝品行業中不可缺少的一種添加劑，國內及同行都已出現大量產品.食品工業：在食品添加劑加 SOD之後，增強營養，解除毒性，延長體內細胞壽命，國內已有SOD營養液產品， 並通過上海科研單位有關專家的鑒定。
三、SOD的開發前景：目前SOD在全國僅有少數科研單位及生化制葯廠研究和開發本產品，而使用SOD產品廠家卻日益增多，遠不能滿足市場需求 . 為鼓勵和大力開發SOD新產品，國家已將其列入重點科技開發項目，並投放大批經費，現已獲得成功， 開始向企業化生產轉移，市場前景十分廣闊。
四、注意事項：(1)我中心熱忱歡迎社會各界朋友現場學習，由生化工程師向您授課，通過現場操作，指導，培訓，使您盡快掌握該技術。(2)本工藝， 技術資料等不經我公司同意，不得擅自轉讓，翻印，銷售給任何單位和個人，違者法律追究。
新法提煉技術
一、主要設備：(1)工業用離心機一台；(2)恆溫水浴鍋(10L--50L)(可自製)1台；(3)冰櫃1台；(4)攪拌機1台；(5)玻璃器皿：1000ml，500ml燒杯各3隻，50ml燒杯 2 只，50ml，500ml量杯各1個；(6)塑料桶若干個。
二、主要試劑：(工業純度)檸檬酸鈉，檸檬酸，葡萄糖，乙醇90%，氯仿，丙酮，氯化鈉，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，去離子水或蒸餾水，葡萄糖凝酸膠SephadexG-- 100 和DEAE--纖維素.
三、試劑的配製：
1.抗凝劑配方：(1)檸檬酸鈉30g，檸檬酸10g葡萄糖 25g加水至1升，一般此種是每7ml血液，加1ml(抗凝劑).(2)40g/升檸檬酸鈉溶液：在1升水中加入0.9克的氯化鈉。
2.生理鹽水：(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化鈉。
3.磷酸鹽緩沖溶液的配製：PH7.6，0.2M磷酸鹽緩沖溶液，一般用Na2HPO4.H2O，35. 61 克 / 升和NaH2PO4.2H2O 31.21克/升，前者加87.0ml，後者加13.0ml混合後即為PH=7.6 緩沖溶液，如果用K2HPO4.3H2O為45.644g/升，NaH2PO4.2H2O為31.21克/升，仍是前者87.0ml，後者13.0ml混合後即得。
4.冷卻劑：在本工藝中有使用-15度低溫，一般用如下配方：用33克食鹽加入100克雪或碎冰，以此比例配成混合體可達-21.3度。
四、工藝流程
(一)除血紅蛋白
1.血液抗凝處理，在新鮮牛、馬、豬血中迅速加入ACD1號抗凝劑，並緩慢攪勻，每7毫升血液中加入抗凝劑1毫升或2號抗凝劑。
2.把抗凝處理的血液放入離心機，以3000r/min離心約15--20分鍾， 用吸管把上清液(黃色血清)小心吸去拋掉，下層的紅血球用2--3倍生理鹽水洗2--3次，在每一次洗滌中，用離心機以3000r/min離心，7--8分鍾，反復操作後，得到洗滌血紅細胞，洗滌後的血紅細胞在-15度下冷凍可保存半年並不影響產率和比活，在血液量大， 處理不完時必須這樣做。
3.在洗凈的紅血球中加入等體積去離子水，劇烈攪拌30分鍾，使紅血球細胞壁砍碎，以使其內的SOD浸出.最好在0--4度靜止過夜後，把溶血進行有機提取。
4.接著向溶血中緩緩加入0.2--0.25倍體積的預冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍預冷氯仿，攪拌10--15分鍾後，原溶血呈漿糊狀，靜止1--2小時，用濾布除去凝固的血紅蛋白，然後將濾液2500r/min離心約1--5分鍾留上清液拋去沉澱， 此時如果上清液略為微黃色時，可用快速過濾紙過濾，可得到微帶藍色的清澈透明的粗酶液。
(二)粗酶液的初步提純：
1.丙酮提醇：向酶液中加0.8倍量預冷(-15度 ) 丙酮 ， 生成大量白色沉澱 ， 以3000r/min離心2分鍾收集沉澱，上清液可不必吸取，直接傾倒。
2.熱變性：(除雜蛋白)准備好衡溫浴鍋，在本工藝中，提前30分鍾， 注滿水接通電源後，使之加熱到55--60度以省時間，將沉澱量約50倍量體積比加入0.2MPH=7.6磷酸鈉緩沖溶液，水浴加熱至60度，15分鍾後迅速冷卻到室溫.3000r/min離心2 分鍾得上清液，在上清液中，緩緩滴加0.6倍體積的預冷(-15度)丙酮，生成白色沉澱。
3.初純SOD：在上述沉澱中加去離子水，製成20--30%SOD溶液，分裝入樣品瓶中，放入冷凍乾燥機中，於開機後以0.2--0.1Torr真空度，約1.5--2小時， 得到化妝或食品用SOD，該產品比活大於3000u/mg，外觀呈微帶藍色的白色凍干品。
(三)SOD進一步提純：
SOD精品一般是把SOD產品經過柱層析，柱層析後的SOD沒有小分子等雜質， 層析後為高活性的SOD大分子.SOD精品價格更高，它主要作為生物化學試劑， 化驗室標准試劑試用.目前SOD柱層析有兩種，二者可單獨使用，也可結合使用，一般是DEAE-- 纖維素層析和SephadcxG--100葡聚糖凝膠層析，將(二)2，熱變性後SOD丙酮沉澱用PH7.6，0.2MNaH2PO4-NaHPO4緩沖溶液溶解，有不溶的雜蛋白時.離心拋去沉澱，上清液上DEAE--纖維素或SephadsxG--100層析柱(1*20cm或2.5*30cm)，梯度洗脫 ， 洗脫液為PH7.6，0.2M，NaH2PO4--NaHPO4緩沖液，下流速度控制在0.2--0.5ml/min，在分光光度計上用紫外譜325nm處測流出液，合並活力峰，再用蒸餾水反復透析，透析徹底後， 放入樣品皿置於冷凍乾燥機中乾燥後即得SOD精品。
五、注意事項：
1.掌握適當的溫度和時間：雖然SOD對熱較穩定， 但在分離純化過程中最好還是採用較低溫度，一般以0--10度為宜，時間長不要超過3天。
2.注意提取，提純方法：使用有機溶劑或者加熱均能有效沉澱蛋白質， 但掌握適當溶劑和加熱結合的辦法可以達到最佳效果。
六、SOD的檢測方法：活性檢驗，比較方便的辦法是用連笨三酚自氧化法， 先測得連笨三酚的自氧化速率，然後加入SOD再測得加入SOD之後的氧化速率，按照酶活性單位定義，即在最佳條件下，每分鍾抑制連笨三酚自氧化分解速率達50% 的酶量定義為一個酶單位.依次求出活力總值 ，同時也可以用聚丙烯醯胺凝膠電泳來測定其純度，看其分子量32000左右的一條帶是否與有關文獻指導一致.
超氧化物岐化酶(superoxide dimutase 簡稱SOD)是一種重要的氧自由基清除劑，作為一種葯用酶，引起國內外生化屆和醫葯屆的極大關注。SOD應用於醫學臨床上可以治療多種疾病，類風濕性關節炎、心肌梗塞等，在防輻射，抗衰老，抗腫瘤等方面也有積極的作用，而且廣泛用於化妝品和食品添加劑的行列。
自1969年Mccord和Fridovich 首次發現從牛血細胞中發現超氧化物岐化以來，到目前為止，國內已有幾十家科研單位對SOD作了大量的研究和試產工作，而且有些已批量生產。SOD引起了國內生化界的重視，1988年在浙江寧波如開了《全國首屆SOD學術會議》。1989年4月在河南開封《第三屆葯用酶學術會議》上，SOD被列為重點開發項目，90年7月在大連《全國第二屆SOD學術會議》，SOD已作為一種葯用酶發展較快，將成為一種很有前途的生化產物。
SOD是一種廣泛存於動物、植物和微生物的生物酶，國外葯用SOD系從血中提取，國內SOD已開發的品種已超過20種，證明我國對SOD的研究和應用已進入新時期。
我國從牛、馬、豬、雞、狗等動物血中提取SOD來源豐富，成本低，提取和純化較方便，葯細胞膜易破，用常規分離純化法可獲得高純度的SOD。
本技術採用熱變性，超濾新技術，不僅大大簡化了工藝過程，而且產品質量和收率都比老工藝有較大的提高，其提取的SOD均為CuZu-SOD。
一、葯品與儀器：
(1)檸檬酸三鈉：Na3C6H6O7 (2)工業丙酮CaH6O
(3)鄰苯本酚 (4)酸磷鉀K3Poe4
(5)弱鹼性陰離子交換劑DEAE Sephadsxa-50外觀40-120ubrd或者DEAE-cell-ujose(DE-32)二乙基纖維素。 (6)冷凍乾燥器(自己組配)
(7)層折柱(7.5＊30cm) (8)離心機
以上試劑及其它葯劑、儀器可在各省市化學試劑商店、醫療器械商店購買。
二、Cu、Zu-SOD的提取及純化(牛、馬血為例)
1、工業流程：
加抗凝劑 鹽洗
鮮牛血--------------------->紅血球------------------------>
離心除黃色血漿 加NaCL
熱變性1 熱變性2
壓積紅細胞-------------->淡黃色混合液--------------------->
68度30分鍾 60-65度20分鍾
加丙酮 加丙酮 層析
淺藍色清液----------->絮狀沉澱-------------->沉澱------------>
凍干
透析除鹽
洗脫----------------->透析液--------->SOD(凍干品)
2、提取方法
(1)收集紅細胞：鮮牛血100升，加入3. 8％檸檬酸三鈉抗凝劑攪拌均勻，靜置，使紅細胞自然沉降，除去上層大部分血漿，下層液再離心除盡其餘血漿，再加入3倍量0.9％氯化鈉(精製食鹽)洗滌兩次， 離心可收集到壓積紅細胞(40升)。
(2)熱變性1：收集的紅細胞再加入4公斤氯化鈉，40克氯化銅，蒸餾水100升攪勻，水浴加熱到68度恆溫30分鍾，迅速冷卻加至室溫，過濾除沉澱，收集濾液。
(3)熱變性2：濾液在65度恆溫水浴下，向濾液中慢慢中入40克氯化銅，至濾液清澈變為淡藍色為止，保溫20分鍾，迅速冷卻至室溫，離心去沉澱得上清液。
(4)SOD粗品：超濾心清液加入0.75倍全積的丙酮沉澱， 離心收集沉澱於離於水，離心除去不溶物得清液，清液加入0.75倍體積的丙酮沉澱， 離心收集沉澱，沉澱經無水丙酮洗滌脫水兩次，真空乾燥得淡藍色粉末狀SOD粗品
(5)SOD粗品提純：SOD粗品溶於2.5mmol/L，PH值7.6磷酸鉀緩沖液，將該混合液上在7.5＊30cm的層柱上，離子換劑為DEAE-SphadexA-50(該柱事先用緩沖平衡)，以100～200ml/小時速度上樣，完畢後用同一緩沖A280mm值，低於0.02然後用25～200mmol/L，PH值7.6磷酸鉀緩沖液進行直線梯度分段洗脫，流速為100ml/小時。用部分收集器收集， 洗脫液經透析除鹽後，得濃縮的透析液，經冷凍乾燥，得SOD成品，(呈淺綠色)。
三、SOD活性測定：
SOD的測定方法很多，常見的有化學法，免疫法等電點聚焦法等，化學法測定的原理主要是利用有些化合物如鄰苯三酚，在自氧化過程中會產生有色中間物降超氧游離基(O2)這樣就可以利用SOD分例(O2)。阻止中間物的積累而測定其酶活性。
1、試劑及儀器
(1)鄰苯本酚分析純，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。
(2)UV－754紫外分光光度計。
2、測定方法：
(1)鄰苯三酚自氧化速度的測定。
在25度、45ml`50mmol/L、PH值8.3、K2HPO4－KH2PO4緩沖液中加入10mmol/L的鄰苯三酚，迅速搖勻，倒入光徑1cm的比色杯內，在325mm波長下每隔30秒測A值一次，要求自氧化速度控制在0.0700d/mm 左右。
(2)SOD或粗酶抽提液活性測定：
測定方法同測鄰苯三酚自氧化速度，在加入鄰苯三酚前加入待測SOD樣液，測得數據按以下公式計算酶活性。
0.0700－A325mm/min
----------------------------------------＊100％度
0.70
樣液稀釋倍數 樣液稀釋倍數
酶活性(u/m1)＝------------＊反應液總體積＊----------------
50％ 樣液體積
3、蛋白濃度(mg/ml)和蛋白的計算：
SOD或粗酶抽提液，經280mm紫外比色測定後，查牛轎清白蛋的標准曲線，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白濃度＝ug蛋白/ml＊樣液稀釋倍數＊10負3次方＝mg蛋白/ml總蛋白＝mg蛋白/ml＊原液總體積＝mg蛋白。
4、比活(u/mg蛋白)的計算：
單位活力(u/ml) 總活力
比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白
蛋白的濃度(mg蛋白/ml) 總蛋白
四、Cu、Zn－SOD性質：
1、Cu、Z n－SOD呈藍綠色，分子量在3200左右，由兩個中一個Cu和一個Zn。
2、對熱穩定，天然牛血SOD，75度下加熱數分鍾其酶活喪失很小。
3、PH值對SOD的影響，SOD在PH5.3～10.5范圍內，其催化速度不受影響，PH3.6時SODZn脫落95％，PH12SOD構象發生不可遞的構象，導致酶活性喪失。
4、SOD的紫外線吸收特徵：SOD在280mm處沒有吸收高峰。
5、金屬輔其與酶活性。SOD屬金屬酶Zn僅於分子結構有關，而Cu與催化活性有關。
6、SOD是其具有還有和失活作用的。
五、葯品與儀器：
檸檬三鈉，分析純：江蘇花橋北工四廠；
工業丙酮：上海溶劑廠；
鄰苯三酚，分析純：貴州遵義化工廠；
六、SOD的包銷單位：
(1)河南鄭州國營聖科研究所鄭州南陽路14號 郵編：450053《河南科技報》91年10月3日
(2)四川省金堂縣工藝製品技校生化科接待室：金堂准口執行的院內，政府辦公大樓1樓 郵編：610404 聯系人：鄧勇 彭麗 《四川農村報》 91年3月1日
(3)廣東省深圳市上步區石夏東二蒼14號科技所 郵編：518031聯系人：黃秋林 《科技消息報》92年7月10日
說明：1、資料後附的產品銷售地址信息均為我們從近兩年的報刊上摘錄的各單位廣告，並註明有出處。
2、你先看完資料後，行根據自己的實際情況，先小量試驗， 並事先聯系好產品的收購單位，待取得經驗後再批量生產。
3、讀者在聯系收購單位時，請一定事先去聯系，並附上郵資， 待得到明確答復後再根據情況去人辦理，千萬不要冒然前往，以免造成不必要的經濟負擔。
4、原料及儀器各地經營原料店供應，廣州市人民南路，上九路等地均有供應。
附：詳細SOD收購信息
1、廣西南寧市生物化學制葯廠
地址：魯班路1號
2、上海生物化學制葯廠
地址：海主路513號
3、江蘇徐州市生物化學葯廠
地址：海沛路86號
4、山東兗州市生物化學制葯廠
地址：肉聯廠內
5、湖南常德生物化學制葯廠
地址：肉聯廠內
6、佛山市生物化學制葯廠
地址：佛山市
7、廣州市明興制葯廠
地址：廣州市河南路工業大道北48號
8、廣州市白雲制葯廠
地址：從廣州越綉公園坐21路車到三元里北展下車沿著礦泉別墅側入200米
9、哈爾濱生化葯廠哈肉聯廠
地址：哈爾濱道外南極街12號院；電話：88423轉制葯廠
10、沈陽市生物化學制葯廠
地址：哈爾濱皇姑區明廉路2號；
11、江蘇省南京生物制葯廠
地址：江蘇省南京市下關區寶塔橋附近；
12、浙江省金華生物化學制葯廠
地址：浙江省金華市河盤橋路51號
13、廣東生物制葯廠
地址：廣州市三元里
14、廣東汕頭市生物化學制葯廠
地址：湖山路西巷3號2號；電話：666124
11、江蘇省南京生物制葯廠
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12、浙江省金華生物化學制葯廠
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13、廣東生物制葯廠
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14、廣東汕頭市生物化學制葯廠
地址：湖山路西巷3號15.上海霞飛日用化工廠
16.北京麗源日用化工廠
17.南京化妝品廠
18.上海日用化學品二廠
19廣州美容化妝品廠
20南京第二葯物化學制葯廠
上海永芳日用化學品廠
廣州化妝品廠
杭州市鳳喜化妝品廠
上海日用化學品四廠
天津市津樂制葯廠
杭州第一生物化學制葯廠
上海葯物研究所實驗葯廠
天津市南開區美容化妝品廠
蘇州市昊縣生物化學廠
上海生物化學制葯廠
天津生物醫學技術開發中心
上海香海美容品廠
北京日用化學品四廠
武漢市辛安渡制葯總廠
湖北沙市生化制葯廠
北京市三露廠
注各大制葯廠化妝品廠美容院均為銷售對象
電話：010-68150495，68212139
傳真：010-68212015
地址：北京市石景山區吳家村華電集團大樓三層
通訊：北京市石景山區40-021信箱
郵編：100040
4. SOD酶活力國家檢驗標准
國家還沒有這個標准，你看一下這幾個能不能用的上。你去工標網找一下吧國標有的話一般都有http://www.csres.com/
標准編號:SB/T 10317-1999
標准名稱:蛋白酶活力測定法
標准狀態:現行
英文標題:Measurement of proteinase activity
替代情況:原標准號ZB X66030-87
實施日期:1999-4-15
出處: http://www.csres.com/detail/112528.html
下載:http://www.csres.com/upload/qy/fm/sb-t10317-19991.pdf
標准編號:NY/T 912-2004
標准名稱:飼料添加劑 纖維素酶活力的測定 分光光度法
標准狀態:現行
英文標題:Determination of cellulase activity in feed additives -- Spetrothoetric method
實施日期:2005-2-1
出處: http://www.csres.com/detail/167757.html
標准編號:NY/T 911-2004
標准名稱:飼料添加劑 β葡聚糖酶活力的測定 分光光度法
標准狀態:現行
英文標題:Determination of β-glucanase activity in feed additives -- Spetrothoetric method
實施日期:2005-2-1
出處: http://www.csres.com/detail/167756.html
查詢關鍵字
http://www.csres.com/s.jsp?keyword=%C3%B8%BB%EE%C1%A6
5. 請教檢測組織中MDA SOD有關問題
SOD酶的活力的測定方法如下： 1.直接法 原理是根據O2 或產生O2 的物質本身的性質測定O2 的歧化量，從而確定SOD的活性。
經典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由於所需的儀器設備價格昂貴，一般較少應用。
6. 過氧化氫酶活性測定公式計算方法
這樣應該可以了吧
一、實驗目的：
（1）掌握SOD酶的提取、分離、檢測一般步驟。
（2）了解酶在提取過程中的兩個參數：回收率、純化倍數。
（3）掌握離心機的使用。
二、實驗原理:
鄰苯三酚在鹼性條件下，能迅速自氧化，釋放出O2-，生成帶色的中間產物，中間物的積累在滯留30～45s後，與時間成線性關系，一般線性時間維持在4min的范圍內，中間物在420nm波長處有強烈光吸收。當有SOD存在時，由於它能催化O2-與H+結合生成O2和H2O2，從而阻止了中間產物的積累，因此，通過測定光吸收即可求出SOD的酶活性。
三、實驗試劑：
大蒜、冷丙酮、磷酸緩沖液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、鄰苯三酚、濃鹽酸、天平、石英砂、研缽、冷凍離心機、50mL離心管 8個、紫外-可見分光光度計、250mL三角瓶8個、玻璃棒8根、試劑瓶250mL 3個、500mL 3個、250mL燒杯16個、試管帶膠塞80根、移液管各5根
四、實驗步驟：
（1）SOD提取：
稱取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎細胞，加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸緩沖液，研磨攪拌20分鍾，使SOD充分溶解，6000rpm離心，棄去沉澱，得上清液。(留出1mL備用，准確量取剩餘上清液體積，記錄)
（2）除雜蛋白：
提取液加入1/4體積的氯仿-乙醇混合液攪拌10min，6000rpm離心15min去沉澱，得粗酶液。（取1mL粗酶液備用,精確測量剩餘粗酶液體積）
（3）SOD酶的沉澱分離：
剩餘的粗酶液中加入等體積的冷丙酮，攪拌15min，6000rpm離心15min，得到SOD酶沉澱。將沉澱先加2mL磷酸緩沖液，溶解後再加3mL混勻。6000rpm離心15min，取上清得到SOD酶液。取1mL備用，其餘量取體積。
（4）粗酶液活性測定：
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力檢測，具體步驟如下。
加入鄰苯三酚後迅速混勻，准確計時4min，加一滴濃鹽酸停止反應，420nm測吸光值。
試劑/（mL）
空白管
對照管OD1
提取液OD2
粗酶液OD2
酶液OD2
PH8.3緩沖液
3
3
3
3
3
SOD提取液
0
0
0.1
0.1
0.1
蒸餾水
2
1.8
1.7
1.7
1.7
室溫放置20min
鄰苯三酚
0
0.2
0.2
0.2
0.2
（5）溶液中可溶性蛋白含量測定：
分別從1mL備用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍數稀釋，260nm/280nm測定吸光值，按公式計算蛋白質濃度。
提取液稀釋：50 ×
粗酶液稀釋：20 ×
酶液稀釋：10 ×
五、實驗數據：
提取液
粗酶液
酶液
總體積（ml）
提取液
粗酶液
酶液
260nm吸光度值
280nm吸光度值
公式
蛋白質濃度(mg/ml)=(1.45A280－ 0.74A260) ×稀釋倍數
蛋白質濃度（mg/ml）
對照管（OD1）
提取液（OD2）
粗酶液（OD2）
酶液（OD2）
420nm吸光值
六、實驗結果及數據處理：
（1）酶活力單位
提取液酶活力單位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
粗酶液活力單位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
酶液活力單位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
（2）總活力
提取液總活力U=活力單位×總體積=
粗酶液總活力=活力單位×總體積=
酶液總活力=活力單位×總體積=
（3）比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力單位/蛋白質濃度=
粗酶液比活力U/mg=活力單位/蛋白質濃度=
酶液比活力U/mg=活力單位/蛋白質濃度=
（4）純化倍數
粗酶液純化倍數=粗酶液比活力/提取液比活力=
酶液純化倍數=酶液比活力/提取液比活力=
（5）回收率
粗酶液回收率=粗酶液總活力/提取液總活力=
酶液回收率=酶液總活力/提取液總活力=
七、實驗結果誤差分析：
（1）研磨和離心大概還不夠充分。
（2）由於測量儀器的精密度引起的誤差。
（3）在操作的過程中，加入鄰苯三酚後未混合均勻，可能致使化學反應進行得不很充分，這可能是造成實驗數據與預期不符的一個原因；
（4）在實驗過程中，所需化學試劑加入的量不是很准確，這可能是實驗數據出現問題的另一個原因；
（5）此外，實驗本身還很粗糙，酶的提取、分離和純化都不能十分徹底，還有很多雜蛋白乾擾實驗。
7. 氧化應激指標的常用檢測方法
氧化應激檢測
用氧化應激指標檢測試劑盒（由南京建成生物公司提供），按照說明書操作檢測。
T-AOC、ROS、SOD、MDA、NO檢測
用Fe3+還原法測定血漿總抗氧化能力（T-AOC），採用Fenton 反應及Gress 顯色原理測定活性氧(ROS)，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法(TBA)測定丙二醛(MDA)含量，硝酸還原酶法測定一氧化氮（NO）。
實時定量PCR檢測
取肝素抗凝新鮮人外周血5 ml，淋巴細胞分離液［密度1 g/cm3(20℃)］分離外周血單個核細胞，加入TRIZOL(Invitrogen公司產品)，抽提總RNA。紫外吸收測定法檢測RNA濃度和純度，A 260
nm/A 280 nm比值在1.8-2.1之間。採用變性瓊脂糖凝膠電泳, 紫外透射光下觀察並拍照。5 μg總RNA經oligo(dT) 引物逆轉錄合成cDNA，逆轉錄反應為37℃ 1小時、95℃ 5分鍾，cDNA溶液儲存於-20℃備用。由上海康成生物公司合成引物，hOGG1正義引物： 5'-CCCCAGACCAACAAGGAACT-3'； 反義引物： 5'-TGGAACCCTTTCTGCGCTTT-3'，擴增片段145 bp；管家基因正義引物： 5'- CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'；反義引物： 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3'，擴增片斷211 bp。定量陽性模板擴增曲線以hOGG1模板起始拷貝數的常用對數為橫坐標，循環閾值為縱坐標，得到標准曲線，相關系數r=0.99991。熒光定量PCR反應體系25 μl： SybergreenⅠ(Invitrogen公司產品) 終濃度6.25 μl，25 mmol/L MgCl2 溶液3 μl， 20 μmol/L 的PCR特異引物各0.5 μl，Taq聚合酶3 U， dNTP混合液3 μl，cDNA 1 μl。 反應條件(Rotor-Gene3000 Realtime PCR儀): 94℃5分鍾，40個循環(94℃ 10秒，58℃ 15秒，72℃ 20秒)。PCR產物與100 bp DNA Ladder在2％瓊脂糖凝膠電泳，GoldViewTM染色，檢測PCR產物是否為單一特異性擴增條帶。hOGG1與β-actin絕對拷貝數之比，作為hOGG1基因的相對表達量
8. sod測定方法有哪些
超氧化物歧化酶（SOD）的催化底物是O2，一般多以一定時間內產物生成量或底物的消耗量作為酶活性單位。由於O2自身很不穩定，且不易制備，測定SOD的方法除少數採用直接法外，一般多為間接法。1.直接法原理是根據O2或產生O2的物質本身的性質測定O2的歧化量，從而確定SOD的活性。經典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由於所需的儀器設備價格昂貴，一般較少應用。2.一般化學法這些方法的共同特點是要有一個O2的產生體系和一個被O2還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2被SOD歧化，因而O2還原或氧化檢測體系的反應受到抑制。根據反應受抑製程度，測定SOD的活性。一般化學法有鄰苯三酚自氧化法、細胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和鹼性二甲亞碸法。常用的有：⑴鄰苯三酚自氧化法：即改良Marklund法。原理是基於經典的分光光度法，在鹼性條件下，鄰苯三酚自氧化成紅桔酚，用紫外-可見光譜跟蹤波長為325nm、420nm或650nm（經典為420nm），同時產生O2，SOD催化O2發生歧化反應從而抑制鄰苯三酚的自氧化，樣品對鄰苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映樣品中的SOD含量。本法具有特異性強，所需樣本量少（僅50μl），操作快速簡單，重復性好，靈敏度高，試劑簡單等優點。⑵細胞色素C還原法（McCord法）：原理是黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶體系中產生的O2使一定量的氧化型細胞色素C還原為還原型細胞色素C，後者在550nm有最大光吸收。在SOD存在時，由於一部分O2被SOD催化而歧化，O2還原細胞色素C的反應速度則相應減少，即其反應受到抑制。將抑制反應的百分數與SOD濃度作圖可得到抑制曲線，由此計算樣品中SOD活性。本法是間接法中的經典方法，但本法靈敏度較低。3.化學發光法原理是黃嘌呤氧化酶在有氧條件下，催化底物黃嘌呤或次黃嘌呤發生氧化反應生成尿酸，同時產生O2。後者可與化學發光劑魯米諾反應，使其產生激發。SOD能清除O2從而抑制魯米諾的化學發光。本法可應用於SOD的微量測定，不僅靈敏度高，簡便易行，而且特異性與准確性至少與細胞色素C還原法類似。4.免疫學方法上述方法測定的是SOD活性，免疫學方法則可測定樣品中SOD的質量，因此特異性較好，是較理想的測定SOD方法，免疫法有放射免疫法、化學發光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是只能測定抗體相應的抗原，對於檢測不同種類的SOD，則須制備相應的特異性抗體，手續繁瑣。5.電泳法電泳染色定位法的基本原理是根據光化學法與NBT還原法。電泳則採取垂直板聚丙烯醯胺凝膠電泳。既可採用SOD活性正染色（呈現棕色區帶）也可採取SOD活性負染色（呈現無色透明區帶）。根據凝膠上電泳分離的SOD區帶的著色深淺與面積大小，對樣品進行半定量分析，也可製作校正曲線計算樣品中的SOD含量。染色定位法常用於鑒定SOD，很少為了定量，主要原因是它不及化學法簡便，但鑒定SOD卻較化學法為優。用電泳法可鑒定SOD是否摻有雜質蛋白，有無同工酶，且可半定量地確定SOD的活性大小。6.平行放在距20W熒光燈管3cm處的光照台上，光照8min後，立即在200A分光光度計的460nm波長下比色。用測得的結果計算樣品中的SOD含量..
9. SOD酶的活力的測定
SOD酶的活力的測定方法如下：
1.直接法 原理是根據O2 或產生O2 的物質本身的性質測定O2 的歧化量，從而確定SOD的活性。經典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由於所需的儀器設備價格昂貴，一般較少應用。
2.一般化學法 這些方法的共同特點是要有一個O2 的產生體系和一個被O2 還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 還原或氧化檢測體系的反應受到抑制。根據反應受抑製程度，測定SOD的活性。一般化學法有鄰苯三酚自氧化法、細胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和鹼性二甲亞碸法。
10. 目前具有國家標準的檢測方法的酶有哪些
中華人民共和國國家標准 生物催化劑 酶制劑分類導則 GBT 20370-2006
中國人民共和國國家標准 食品加工用酶制劑企業良好生產規范GBT 23531-2009
中華人民共和國國家標准 食品安全國家標准 食品工業用酶制劑GB 25594-2010
中華人民共和國農業行業標准 飼料用酶制劑通則 NY/T 722-2003
中華人民共和國輕工行業標准 工業酶制劑通用檢驗規則 和標志、包裝、運輸、貯存QB/T 1804一1993
浙江省地方標准 飼料添加劑飼料用復合酶制劑 DB33/T 459—2003
中華人民共和國輕工行業標准 工業酶制劑通用試驗方法 QB/T 1803一1993 進出口標准 進出口食品添加劑檢驗規程 第12部分：酶制劑 SNT 2360.12-2009
中華人民共和國國家標准 飼用植酸酶活性的測定 分光光度法 GB/T 18634-2009
中國人民共和國地方標准 飼料添加劑 葡萄糖氧化酶的測定DB13/T 1444-2011
中國人民共和國國家標准 飼料添加劑木聚糖酶活力的測定分光光度法GBT 23874-2009
中華人民共和國國家標准α-澱粉酶制劑 GBT 24401-2009
中華人民共和國國家標准 食品添加劑 α-澱粉酶制劑 GB 8275-2009
中華人民共和國輕工行業標准 食品添加劑 真菌α-澱粉酶 QB2526一2001
中華人民共和國輕工行業標准 耐高溫α一澱粉酶制劑 QB/T 2306一1997
中華人民共和國國家標准 糧油檢驗 穀物及其製品中α-澱粉酶活性的測定 比色法 GBT 5521-2008
中華人民共和國國家標准 穀物和穀物產品α-澱粉酶活性的測定 比色法GB/T 5521-89
中華人民共和國國家標准 小麥粉破損澱粉測定法 α-澱粉酶法 GB/T 9826-88
中華人民共和國國家標准 蜂蜜中澱粉酶值的測定方法 分光光度法 GB/T 18932.16-2003
中華人民共和國國家標准 食品添加劑 糖化酶制劑 GB 8276-2006
中華人民共和國行業標准 食品添加劑 果膠酶制劑 QB 1502-92
中國人民共和國國家標准飼用纖維素酶活性的測定 濾紙法GBT 23881-2009
中華人民共和國農業行業標准 飼料添加劑 纖維素酶活力的測定 分光光度法 NY/T 912-2004
中華人民共和國輕工行業標准 纖維素酶制劑 QB 2583-2003
中國人民共和國國家標准脂肪酶制劑GBT 23535-2009
中華人民共和國國家標准 糧油檢驗 糧食、油料的脂肪酶活動度的測定 GBT 5523-2008
中國人民共和國國家標准 飼料添加劑酸性、中性蛋白酶活力的測定 分光光度法 GB/T 28715-2012
中國人民共和國國家標准蛋白酶制劑GBT 23527-2009
中華人民共和國輕工行業標准 洗滌劑用鹼性蛋白酶制劑 QB 1806一1993
中華人民共和國輕工行業標准 工業用蛋白酶制劑 QB 1805.3-93
中華人民共和國國家標准 動物性蛋白質飼料胃蛋白酶消化率的測定 過濾法 GBT 17811-2008
中華人民共和國國家標准 大豆製品中胰蛋白酶抑制劑活性的測定 GBT 21498－2008
中華人民共和國農業行業標准轉基因植物及其產品食用安全檢測 抗營養素第2部分：胰蛋白酶抑制劑的測定 NY/T 1103.2-2006
中華人民共和國專業標准 蛋白酶活力測定法 SB/T 10317-1999 進出口標准 進出口糧食、飼料粗蛋白質檢驗方法 SN/T0800.3-1999
中華人民共和國農業行業標准 飼料添加劑 β-葡聚糖酶活力的測定 分光光度法 NY/T 911-2004
中華人民共和國 企業標准 β-葡聚糖酶制劑（2013-12-1實施）QB/T 4481-2013
中華人民共和國國家標准 糧油檢驗 糧食、油料的過氧化氫酶活動度的測定 GBT 5522-2008
中華人民共和國輕工行業標准 工業用糖化酶制劑 QB 1805.2一93
中華人民共和國國家標准固定化葡萄糖異構酶制劑 GBT 23533-2009
中華人民共和國國家標准 食品添加劑 固定化葡萄糖異構酶制劑 GB274-87
中華人民共和國國家標准 乳酸菌飲料中脲酶的定性測定 GBT5009.186-2003
中華人民共和國國家標准 嬰幼兒配方食品和乳粉脲酶的定性檢驗 GBT 5413.31-1997
中華人民共和國國家標准 植物蛋白飲料中脲酶的定性測定 GBT5009.183-2003
中華人民共和國國家標准 大豆製品中尿素酶活性測定方法 GB-T8622-1988 進出口標准 進出口糧食、飼料尿素酶活性測定方法 SN/T0800.4-1999
中華人民共和國國家標准 食品添加劑 a-乙醯乳酸脫羧酶制劑 GB 20713-2006
中華人民共和國輕工行業標准 食品添加劑 α-葡萄糖轉苷酶 QB2525一2001
中華人民共和國國家標准 保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性測定 GB 05009-171
中華人民共和國國家標准 保健食品中輔酶Q10的測定 GB/T 22252-2008
中華人民共和國衛生行業標准 全血膽鹼酯酶活性的分光光度測定方法 羥胺三氯化鐵法WST 66-1996
中華人民共和國衛生行業標准 全血膽鹼酯酶活性的分光光度測定方法 硫代乙醯膽鹼-聯硫代雙硝基苯甲酸法 WST 67-1996
地方標准乳及乳製品中β-內醯胺酶的測定 db13 t 1080-2009