檢測dna病毒用哪個方法好

❶ 關於乙肝DNA檢測的問題{急！！！！！！}

傳統檢測乙肝的方法為「乙肝兩對半」和「肝功能」檢測，但是這兩種檢測方法均不能測定乙肝病毒在體內的含量及復制情況、傳染程度，是否有必要繼續服葯，不能判定患者服用哪一類抗病毒葯物才是對症。如果盲目給患者用葯，恐因個體差異而引起治療失敗，致使病情延誤。這也是一些乙肝患者久治不愈的主要原因。

乙型肝炎病毒DNA為乙型肝炎病毒核心的主要成分，臨床上可應用斑點雜交法和聚合酶鏈反應法從被感染者血清中檢測到它，陽性（＋）表示感染者血清中存在游離乙型肝炎病毒，具有傳染性。另一方面，可檢測血清中乙型肝炎病毒在體內的含量。DNA檢測結果為臨床診斷治療提供了可靠的依據，成為臨床治療療效判定的依據。
乙肝病毒DNA檢測是通過一種較為先進的檢測技術———聚合酶鏈反應（
即PCR檢測方法），檢測出存在於體內極其微量的乙肝病毒DNA基因的一種較新的檢驗方法。在臨床上治療乙肝病人，通過此檢測能清楚的明確以下情況：
1、了解乙肝病毒在體內存在的數量。
2、是否復制。
3、是否傳染，傳染性有多強。
4、是否有必要服葯。
5、肝功能異常改變是否由病毒引起。
6、判斷病人是適合用哪類抗病毒葯物。
7、判斷葯物治療的療效。
一般來講，患有乙肝的病人，通過此檢測能明確指導臨床用葯的方向，為科學合理的治療乙肝提供堅實的保障。
感謝咨詢！如果您還有不明白的地方，請來我院就診。

❷ DNA血液病毒問題

乙肝病毒DNA定量檢測已經走進大小醫院和一些診所，每一個乙肝患者在診療過程中，都要反復檢測該指標。乙肝病毒DNA定量往往被描述成為判斷乙肝傳染性大小、病情嚴重程度以及治療效果的「金指標」，其實這些認識都是片面的。乙肝病毒DNA定量檢測為了解乙肝病毒在體內的變化增添了新的手段，彌補了以往乙肝病毒「兩對半」檢測的不足，只要抽血化驗檢測乙肝病毒DNA呈陽性，無論其他乙肝病毒檢測結果如何，都說明患者體內存在復制狀態的乙肝病毒，血液具有一定傳染性，這對於評估治療效果和了解病情變化有一定幫助。但是目前乙肝病毒DNA檢測尚處於研究階段，並非完美無缺。DNA定量只能在部分有條件的大醫院檢測，結果也只能用於參考，不宜當做確診的「金指標」，在大小醫院普及。 乙肝病毒DNA定量不能說明病情輕重 乙肝病毒DNA定量數值只能說明游離在血液中病毒的含量，病毒多少、含量高低與病情嚴重程度沒有直接關系。乙肝病情嚴重程度必須通過檢測肝功系列指標確定，這些指標包括：轉氨酶、膽鹼酯酶、膽紅素、白蛋白、凝血酶原活動度、轉肽酶、蛋白電泳等等，凝血酶原活動度、白蛋白、膽鹼酯酶數值越低，說明病情越嚴重。病毒定量數值高低與病情無直接關系。相反，絕大多數無症狀乙肝病毒攜帶者，尤其是少年兒童患者，乙肝病毒DNA檢測都為陽性，乙肝病毒處於高復制狀態，而他們的病情十分輕微，肝穿結果顯示，他們的肝組織僅為輕度的非特異性炎症改變;而大多數肝硬化或肝癌患者的乙肝病毒DNA檢測多為陰性，而病情卻十分嚴重。乙肝病毒本身不引起肝細胞病變，感染的肝細胞仍然是長壽的，半衰期6～12個月或更長。乙肝病情輕重取決於很多因素，例如患者的免疫狀態、遺傳因素、病毒的變異等，病毒數量多少不是病情演變的決定因素。 乙肝病毒DNA定量說明療效只在理論上有意義 從目前實際看，乙肝病毒定量是一個隨時都在發生變化的不穩定數值，影響數值變化的因素很多，治療時數值可能發生變化，不治療時，數值也會發生變化。數值變化有可能是治療效應，也有可能是自然變化或檢驗偏差。從目前實際情況看，乙肝病毒DNA定量檢測還處於探索階段，各種檢測方法尚不完善，得出的數值左右漂浮，偏差很大。1.用於檢測乙肝病毒DNA定量的方法不統一。目前使用的檢測方法主要有：熒光定量PCR技術、競爭PCR技術、PCR酶聯免疫吸附法、熒游標記物法和PCR酶聯化學發光法。這些方法各有優缺點，使用的試劑來源於不同國家和地區，儀器設備也是五花八門，設立的標准曲線以及標准熒光等各不相同，得出的正常值各不相同。有的醫院正常值定在103/ml以下，有的定在104/ml以下，有的定在105/ml以下，各個醫院檢測數值沒有可比性。2.影響定量准確性的因素太多，導致結果的重復性差，其變異系數有時可達30％。極微量的核酸污染即可導致檢測結果差異。為此定量檢測尚局限於一些實驗條件好的大醫院，全面推廣尚需時日。3.乙肝病毒DNA定量尚無國家統一標准，其正常值和異常值范圍難以統一，各地、各單位檢測數據沒有可比性。4.同一位患者抽血檢查乙肝病毒DNA，其定量數值每天都在變化，即便是患者不進行任何治療，定量檢測到的數值都在時刻變化之中。同一份血清在不同的時間檢測，或在不同的實驗室檢測，其數值都會有所不同。以這種時刻都在自然變化數值來說明療效，也是難以令人信服的。5.抽樣誤差無法避免，實驗結果相差一個數量級（即10倍）是常有的誤差。6.檢測乙肝病毒DNA使用的PCR技術敏感性極高，實際操作中，極微量的核酸污染即可出現假陽性結果。7.實驗室水平要求較高，實驗室的隔離條件、清潔程度和儀器設備、試劑等不可能保證絕對的統一和規范，不少條件簡陋的小單位，隨便買一個PCR檢測儀，就開始收費檢查，其結果的准確性可想而知。 乙肝病毒DNA陽性決不意味著患者就是「毒王」 乙肝病毒要傳染必須具備傳染途徑和條件，否則病毒數量再多，也不會傳染。只要乙肝病毒復制指標，例如乙肝病毒DNA、乙肝病毒e抗原、乙肝病毒前S抗原、乙肝病毒核心抗體IgM等等，檢測時出現陽性，都說明患者血液及體液含有復制狀態的乙肝病毒。但是如果要讓這些病毒傳染給人，並且讓人得上乙肝，並非一件容易的事。乙肝病毒DNA定量數值高，說明病毒復制活躍，血液具有傳染性。但是無論病毒有多少，復制有多麼活躍，要傳染必須通過具體傳染途徑實現，接觸乙肝患者不是乙肝的傳播途徑，傳染性只針對輸血、針刺、輸液和垂直傳播等途徑，和乙肝患者共事、學習和工作不會導致乙肝的傳播。對於成年人來說，乙肝病毒感染極少造成發病，絕大多數成年人感染乙肝病毒只是一過性的隱性感染。因為成年人具備正常的免疫功能，完全可以識別乙肝病毒，並迅速清除來犯之敵。小孩如果從來沒有打過乙肝疫苗，體內沒有形成有效的抗體，一旦接觸乙肝病毒，危險性比成年人大得多。如果所有的新生兒和未受過乙肝病毒感染的成年人都及時接種乙肝疫苗，體內產生了表面抗體，具備了預防能力，無論怎樣和乙肝患者接觸，也不會得上乙肝。 PCR及斑點雜交技術檢測病毒易出現偏差 開展PCR檢測方法受到實驗環境、試劑質量、實驗器材等多方面因素的限制。一些地方不具備實驗條件、試劑質量有問題、技術人員素質差，這樣可能造成不少假陽性，形成冤假錯案;也可能造成假陰性，而形成漏網之魚。因此PCR檢測方法尚不能做到普及和大眾化，要注意由於檢驗誤差帶來的負面作用，更要注意有人利用這些技術，謀取經濟利益。1998年以前，各地出現不少利用PCR方法檢測性病的廣告，這項不太成熟的技術，被大量盜用，給當時的性病治療帶了不少的混亂。因此，衛生部果斷決定，終止PCR方法在臨床上的使用。目前只有部分三甲醫院經過嚴格審批後，可以使用PCR檢測技術，但是也不作為常規臨床檢測，數據只供醫師參考。

❸ HBV-DNA檢測方法有哪些

斑點雜交法是傳統的老方法，檢測成本低，但是檢測的靈敏度不高，而且准確度也不高，只能定性檢測乙肝病毒DNA，不能定量；PCR法是基因檢測中使用最多的方法我國是一個肝炎大國，其中乙肝病毒攜帶者都佔四川人口的十分之一，政府為了改變現狀，下決心大力宣傳普及乙肝知識，卓有成效，以前的許多乙肝盲現在也知道HBV-DNA了，但是還有許多人可能了解不夠全面，今天肝病專家就開展一次知識普及課堂，專門說明，希望廣大朋友能對此有一個全面的認識。？目前我們常用的只有兩種方法，一種是斑點雜交法，還有一種是PCR法。我們下面對這兩種方法進行詳細的說明。推薦閱讀：乙肝病毒DNA的正常值是多少一、斑點雜交法此方法是傳統的老方法，檢測成本低，但是檢測的靈敏度不高，而且准確度也不高，只能定性檢測乙肝病毒DNA，不能定量。也就是說只能檢測患者體內的乙肝病毒DNA是陰性還是陽性，而不能檢測出機體內乙肝病毒的數量。推薦閱讀：什麼是乙肝病毒定量檢查二、PCR法PCR法是基因檢測中使用最多的方法，是聚合酶鏈式反應的簡稱，是一種酶促反應。此方法可以在短時間內將待測基因擴增到上百萬倍，這樣可以大大提高基因診斷的准確度，保證此檢查方法的靈敏度。分為三步，第一是對待測的基因進行PCR，然後電泳此結果，接下來就是對此結果進行分析。

❹ 煮沸法提取病毒dna與離心柱法哪種好

自然界中無論是植物、動物還是病毒，DNA作為大部分生物的遺傳物質，在遺傳中起著不可替代的作用，為了研究生物的基因，就需要將DNA從細胞中提取出來，這個過程有很多方法可以實現，目前比較常用的有苯酚氯仿抽提法、離心柱法和磁珠法，實驗室就這三種提取方法進行了梳理和比較，總結出各方法的優缺點供廣大科研工作者參考。
1.苯酚氯仿抽提法
苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質的變性劑，反復抽提，使蛋白質變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)將細胞膜裂解，在蛋白酶KEDTA的存在下消化蛋白質或多肽或小肽分子，變性降解核蛋白，使DNA從核蛋白中游離出來。而DNA易溶於水，卻不溶於有機溶劑。蛋白質分子表面帶有親水基團，也容易進行水合作用，並在表面形成一層水化層，使蛋白質分子能順利地進入到水溶液中形成穩定的膠體溶液。當有機溶液存在時，蛋白質的這種膠體穩定性遭到破壞，變性沉澱。離心後有機溶劑在試管底層(有機相)，DNA存在於上層水相中，蛋白質則沉澱於兩相之間。利用萃取原理，根據蛋白核酸溶於不同的試劑層，將槍頭伸入不同液層內抽取所需的成分，經多次洗滌後獲得純化核酸。
該方法的缺點是由於使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長時間操作對人員健康有較大影響，而且核酸的回收率較低，損失量較大，由於操作體系大，不同實驗人員操作重復性差，不利於保護RNA，很難進行微量化的操作。優點是採用了實驗室常見的試劑和葯品，做起來成本比較低廉。
2.離心柱法
離心柱法主要原理是將對核酸有吸附作用的官能基團固定在離心柱模上，通過加入不同的裂解試劑、洗滌試劑並反復離心，以達到核酸與雜質分離的目的，獲得純化的核酸。離心柱法DNA提取它的優點是比傳統的酚氯法提取的純度高，有利於RNA保護，而且能進行微量操作，以其低廉的價格和相對便捷的操作，漸逐取代了傳統DNA提取方法，被高校科研所等市場普遍接受。
離心柱法DNA提取的缺點是需要較多的樣本，耗材多，對於珍稀樣本無能為力，特別是在法醫、考古等領域顯得力不從心。同時離心柱法DNA提取需要反復離心，不便於高通量、自動化操作，與現代生物學實驗的高通量、自動化要求格格不入，特別是在基因診斷、疾病檢測、轉基因檢測等領域，離心柱法DNA提取需要大量的操作人員及儀器設備。當面對突發疫情時，更是需要有高通量的DNA提取設備與方法才能更有效准確的監測疫情、控制疫情。為此需要一種新的DNA提取方法解決這個實際難題。在這個時代潮流需求的驅動下，磁珠法DNA提取應運而生。
3.磁珠法
磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對核酸有吸附作用的特定活性官能基團，通過不同的裂解液結合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質進行特異性結合，同時利用磁珠自身的磁性，在外磁場的作用下可以方便的實現定向移動與富集，從而達到核酸與雜質分離的目的，進而實現對目標物質的分離純化，獲得純化核酸。
磁珠法是納米科技與生物技術的完美結合，具有其他DNA提取方法無法比擬的優勢，主要體現在：
a.能夠實現自動化、高通量操作，配合96孔的核酸自動提取儀，在以往做一個樣品的提取時間內可同時實現對96個樣品的處理，效率直接提高96倍，滿足了當前生物學高通量操作的要求，使得在大規模疫情爆發時能夠進行快速篩查原因，這個優點是其他方法難以趕超的。
b.操作簡單、用時短，整個提取流程只有裂解、結合、洗滌、洗脫四步短時間內即可完成。
c.安全無毒，不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對實驗操作人員的傷害少，保護了實驗人員的身體健康。
d.磁珠與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。
e.靈敏度高，適合法醫樣本等痕量DNA提取。
隨著當代生物學的高速發展及核酸提取儀的大量普及，為了滿足時代要求，專業研製磁珠法DNA提取，並開發了多系列磁珠法DNA提取的系統化方案，為廣大科研工作者提高試驗效率，簡化試驗過程提供強有力的技術支持和產品保障，磁珠法DNA提取也將成為現代分子生物學的主流。

❺ DNA檢測的方法都有哪些

DNA檢測
技術有很多，主要分為定性和定量方法。給你舉幾個：1，分子雜交技術，（包括southern雜交，northern雜交，基因晶元等）分子雜交分析的基本原理是基於DNA探針檢測變性而且固定在硝酸纖維素膜上的宿主細胞DNA。這些探針可以不依賴宿主細胞DNA來制備，例如用隨機引物制備探針。探針上標記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由於地高辛標記核酸探針，操作方便、靈敏度高，已標記的探針在4℃貯存可達兩年之久，方便隨時應用，所以現在常採用地高辛標記核酸探針，用游標記法將光敏Dig標記到探針上，製成光敏-Dig-核酸探針，再與固定在硝酸膜上的靶核酸進行靶DNA分子雜交，使之與抗Dig-鹼性磷酸酶結合，最後可用不同的檢測方式進行檢測，
發光檢測
和顯色檢測均可，靈敏度可達10pg以下2，基於DNA結合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系統是基於兩種DNA序列非特異性蛋白，單鏈DNA（ssDNA）結合蛋白（SSB）和抗ssDNA
的單抗。檢測的基本過程是當生物素—DNA單鏈結合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的單抗與變性的宿主細胞DNA結合最終形成復合物，通過親合素將此復合物連接到生物素—硝酸纖維素膜，在通過洗滌所有非特異性的被洗脫掉，最後放於有
尿素溶液
的讀數儀，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
導致PH值發生變化，讀數儀根據PH值的變化換算成DNA的量，從而達到檢測殘余DNA含量的目的。3，PCR法，其中以實時定量PCR法最為突出熒光定量
PCR是基於PCR擴增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產物的增加可以通過熒光信號指示，通過實時監控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進行定量分析。定量PCR可實時檢測產物量，通過加入已知濃度的
標准樣品
繪制標准曲線，然後根據待測樣品在標准曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達到檢測殘余DNA含量的目的。此外，對DNA的定量技術也有很多，可以看下這篇文章《核酸定量技術及其在生物檢測中的應用》

❻ 用DNA探針法檢測基因,具體怎麼操作越詳細越好

DNA探針是最常用的核酸探針，指長度在幾百鹼基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現已獲得DNA探針數量很多，有細菌、病毒、原蟲、真菌、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列，或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的，如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴於分子克隆技術的發展和應用。以細菌為例，目前分子雜交技術用於細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要准確的多，是細菌分類學的一個發展方向。加之分子雜交技術的高敏感性，分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。細菌的基因組大小約5×106bp，約含3000個基因。各種細菌之間絕大部分DNA是相同的，要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要採取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段後分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫。然後用多種其它菌種的DNA作探針來篩選，產生雜交信號的克隆被剔除，最後剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。將此重組質粒標記後作探針進一步鑒定，亦可經DNA序列分析鑒定其基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針，常常是比較繁瑣的。探針DNA克隆的篩選也可採用血清學方法，所不同的是所建DNA文庫為可表達性，克隆菌落或噬斑經裂解後釋放出表達抗原，然後用來源細菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆，所得到多個陽性克隆再經其它細菌的抗血清篩選，最後只與本細菌抗血清反應的表達克隆即含有此細菌的特異性基因片段，它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。
DNA探針可以用來診斷寄生蟲病，現場調查及蟲種鑒定，可用於病毒性肝炎的診斷，遺傳性疾病的診斷，可用於改造變異的基因，可用於檢測飲用水病毒含量。具體方法：用一個特定的DNA片段製成探針，與被測的病毒DNA雜交，從而把病毒檢測出來。與傳統方法相比具有快速、靈敏的特點。傳統的檢測一次，需幾天或幾個星期的時間，精確度不高，而用DNA探針只需一天。據報道，能從1t水中檢測出 10個病毒來，精確度大大提高

❼ 什麼是DNA檢測

dna是一種很重要的遺傳物質。脫氧核糖核酸（英語：deoxyribonucleic
acid，縮寫為dna）又稱去氧核糖核酸，是一種分子，可組成遺傳指令，以引導生物發育與生命機能運作。主要功能是長期性的資訊儲存，可比喻為「藍圖」或「食譜」。其中包含的指令，是建構細胞內其他的化合物，如蛋白質與rna所需。帶有遺傳訊息的dna片段稱為基因，其他的dna序列，有些直接以自身構造發揮作用，有些則參與調控遺傳訊息的表現。
dna檢測是在核酸水平上的檢測，常見的方法有pcr,基因晶元等等

❽ hpv檢測有哪些常見的辦法

隨著HPV疫苗的上市，人們對HPV也越來越 重視。那目前應該用什麼方式去篩查HPV?

三、基因檢測

基因檢測包括雜交捕獲2代技術(HC-Ⅱ)、實時熒光定量PCR技術(Cobas 4800)、酶切信號放大法(Cervista
HPV)、基因晶元法。其中實時熒光定量PCR技術在DNA擴增時結合了特異探針的雜交，進一步提高了實驗的敏感性和特異性。它可以實時利用熒光監測DNA擴增過程，使結果准確可靠，非常適合用於臨床的大面積篩查。

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種屬於乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖.目前已分離出130多種，不同的型別引起不同的臨床表現。

不同型的HPV所引起的疾病不同，目前的篩查方法，建議使用基因檢測，可以明確感染是哪型的HPV，可以做相應的干預，也對自己的身體狀況有比較清楚的認知。

❾ DNA損傷有什麼檢測方法

DNA損傷修復-檢測方法
大部分DNA損傷修復都依賴於DNA的修復合成,所以對修復合成的測定常用來作為DNA修復的檢測方法。常用的有以下幾種：
放射自顯影法
在細胞培養物中加入氚標記的胸腺嘧啶核苷等放射源,用放射自顯影方法計數銀顆粒數來測定修復合成過程中參入到DNA分子中的量。
液體閃爍計數法
用液體閃爍計數器測定培養物中的放射源因修復合成而參入到DNA分子中的量。這一方法適用於大批量樣本。
超速離心法
一種應用比較廣泛的方法，可應用於切除修復、復制後修復及鏈斷裂修復方式的檢測。一般是用氚標記溴脫氧尿嘧啶核苷等參入到修復合成的DNA分子中去以改變DNA分子的重量(BrdU的分子量比尿嘧啶核苷大),通過超速離心可以從沉降系數不同的各組分中收集修復合成中參入量不同的DNA片斷,然後分別測定其放射性的強度來判斷修復合成的多少。
病毒宿主細胞復活法
以SV40病毒、腺病毒、皰疹病毒、噬菌體等感染培養的人體細胞或細菌，然後以紫外線等處理以造成病毒DNA分子的損傷，因為病毒DNA分子損傷的修復是靠宿主細胞的修復酶系統，所以受損傷的病毒能否繼續生存繁殖可間接地反映宿主細胞的修復功能。
姐妹染色單體互換(SCE)法
姐妹染色單體互換率的檢測也能反映一部分DNA修復功能。人類中的某些先天性DNA修復缺陷疾病如布盧姆氏綜合征患者的自發SCE顯著增高;另一些如著色性干皮病則誘發SCE增高。這是由於DNA修復功能的缺陷導致染色體穩定性減弱所致。

❿ 檢測胞內DNA病毒，用到熒光定量的時候，模板用病毒DNA ,還是病毒的cDNA謝謝了

理論上的差別不大。不過要點是你要知道模板的定量。

實際上在實驗的過程中，還要考慮到PCR條件，比如DNA結構，是否有特殊的序列影響PCR效率等等（比如病毒DNA中，在PCR目標附近的序列，cDNA上就沒有），所以用病毒DNA是最好的。