抗原檢測的方法圖片

❶ 酶聯免疫法的檢測方法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。
當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。 血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。 在臨床檢驗中一般採用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；⑵酶標記的抗原或抗體（結合物）；
⑶酶的底物；
⑷陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標准品和控制血清（定量測定中）；
⑸酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；
⑹洗滌液；
⑺酶反應終止液。

❷ 核酸檢測已經成為常態，抗原檢測可代替核酸檢測嗎哪些人可以做

不可以代替核酸檢測，第一，密切接觸人員，第二，有相似症狀的人，第三，懷疑自己被感染的人，第四處於隔離當中的人，第五，想要自行檢測的人

❸ 免疫學的檢測方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。

❹ 乙肝表面抗原的測定方法

中國最常使用的測定表面抗原的方法是酶聯免疫吸附試驗（ELISA），其次是放射免疫試驗（RIA）。
ELISA簡單、方便、快速，進口試劑盒可測到的血清表面抗原最低濃度為0.2ng/ml，國產試劑盒目前能達到0.5ng/ml。

❺ 國家為什麼要採取抗原檢測作為補充抗原的檢測方法是什麼

根據抗原和抗體的不同性質和反應條件的不同，抗原抗體反應呈現不同的形式，顆粒抗原呈現凝集反應。可溶性抗原呈沉澱反應；與補體結合時，細菌抗原呈溶菌反應，而紅細胞抗原呈溶血反應。毒素抗原顯示中和反應等。可溶性抗原與相應抗體結合產生的沉澱反應，可溶性抗原與相應抗體結合產生的凝集反應，抗原抗體結合激活的補體引起的細胞裂解反應，病毒與相應抗體結合引起的中和反應，免疫標記的抗原抗體反應。

具體方法是:第一步是在大腸桿菌中表達目的基因的蛋白質；第二步，免疫注射表達蛋白的動物，產生相應的抗體，並提取抗體(一抗)；步驟3，從轉基因生物中提取蛋白質並進行凝膠電泳；第四步，將凝膠中的蛋白質轉移到硝酸纖維素膜上；第五步，將抗體(一抗)與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，然後抗體(一抗)會與目的基因表達的蛋白(抗原)特異性結合。因為這種抗原抗體結合不出現條帶，所以加入了一種叫做二抗的抗體，它可以和一抗結合，二抗有一個特殊的標記。如果目標基因表達蛋白質，結果為陽性。

❻ HPV有哪些檢查方法

當代社會女性的身體疾病越來越嚴重，種類也越來越多，女人總是先想著怎麼照顧好家人以及孩子，卻很少給自己做一個健康檢查的計劃。有時候為了家庭為了孩子就是身體有一點不舒服也沒有放在心上，畢竟去趟醫院就是就是一大筆的開銷。今天小編就為您簡單的說明一下女性疾病重的一種hpv那麼女性hpv有幾種檢。

每個人的身體機制都是不一樣的，就連醫生有時候也無法堅定的給出一個不變的答案，很多的時候我們不能一概而論。如今社會的科技在發展，我們高科技的產品越來越多，面對很多疾病也會游刃有餘的。所以我們不必壓力山大，給自己一點希望，世界會還你一個奇跡!

❼ 可居家自檢的新冠病毒抗原檢測來了，檢測試劑的原理是什麼

國務院應根據新冠狀病毒疾病的檢測結果，對新冠病毒組進行抗原檢測。該計劃明確規定，如果社區居民有自檢需求，可以通過零售葯店、網上銷售平台等渠道購買抗原檢測試劑進行自檢。COVID-19有四種主要的結構蛋白：S蛋白（S蛋白）、核衣殼蛋白（核衣殼蛋白、N蛋白）、膜蛋白（膜蛋白、M蛋白）和包膜蛋白（包膜蛋白、E蛋白）。

核酸檢測在具備核酸檢測能力的情況下仍然是主流。發放抗原測試盒，讓人們自己測試，這樣他們可以更快地知道測試者是否具有傳染性，並盡早隔離傳染性最強的患者。抗原檢測和核酸檢測應該相輔相成。核酸和抗原是重要的檢測方法，它們有自己最適用的場合。例如，當沒有核酸檢測能力，例如遠離檢測點，或在半夜有發燒或感冒症狀時，可以使用更方便的抗原檢測。

❽ 檢測乙肝表面抗原的方法都有什麼具體一點點

去醫院化驗。有專門的一項叫乙肝抗體
然後抗原抗體都查了
僅僅抗體陽性不能確診乙肝
如果抗原抗體都陽的話才行

❾ 新冠抗原自測產品正式上市，誰能測怎麼測准確率如何

新冠抗原自測產品已經通過我國葯監局的審批成功上市，抗原自測產品將為我國新冠防控防控工作帶來更大的便利。

一、抗原自測產品的適用人群

這三類人群可以採用抗原自測試劑：1、不具備核酸檢測條件有自我檢測需求的個體。2、屬於居家隔離、密接隔離、入境隔離或者管控區域內的個體。3、連續幾天內有發熱、咳嗽等症狀的個體。抗原自測可以根據個體內是否有病毒抗原確定個體是否有感染新冠，抗原自測一般十幾分鍾就可以有結果，因此對於以上三個群體進一步診斷有著提效的作用。

❿ 抗原檢測與核酸檢測有哪些區別這兩款產品的准確率如何

核酸檢測由於對設備及採集人員的要求較高，因此准確率比抗原檢測更有效。但抗原檢測有比核酸檢測更快的初步檢驗結果，適用於多人群的大規模基礎診斷。

由於核酸檢測對於病毒的感染性以及結果都有較為准確地預判和估計，因此現在我國在許多人群的篩查上都會使用核酸檢測作為評估結果。但隨著防控局勢的逐步嚴峻，抗原檢測也可以作為一種補充的檢測方法。雖然抗原檢測的准確率不高，但在大規模人群的初步篩選上，有非常好的表現和作用。

一：核酸檢測由於對設備以及採集人員的要求較高，因此檢測結果更加有效。

由於核酸檢測具有早期診斷、靈敏度和特異性高等突出特點，是目前確診新冠肺炎的重要標准之一，核酸檢測使用的是實時熒光定量RT-PCR技術。這種技術對於目前新冠病毒的初期發現和判斷有很好的作用和幫助。但缺點是高靈敏度的RT-PCR儀價格不菲，對相關實驗室的潔凈度和操作人員要求也較高，且檢測時間較長，一個檢測通常會需要4-6個小時才有結果。