⑴ 如何提取澱粉酶。。。單一的澱粉酶就行了。。。及其檢驗的方法
你好，如果是馬上需要使用的話建議從網上的生物公司直接購買澱粉酶成品。想自己製作的話建議採集自己的唾液，裡面就有唾液澱粉酶。不要將唾液加溫，以免酶失活。檢驗方法可用澱粉遇碘變色的原理，用分光光度計測定酶是否存在，若酶存在，加入澱粉與碘的混合溶液後，因澱粉被澱粉酶分解成糊精，藍色將會有所消退。若需提取單一的純澱粉酶，可以使用電泳法確定唾液澱粉酶蛋白質的分子質量，再用柱層析法將它層析出來。這是一個很麻煩的過程，需要大量的實驗，如果只是為了達成消化澱粉的目的的話，不妨直接使用唾液。如果需要考慮溫度和消化質量的話，買成品是比較省時間的選擇。
如還有問題，歡迎追問
⑵ 澱粉酶比活力測定
穀物種子萌發時澱粉酶活力的測定
幾乎所有植物中都存在澱粉酶，尤其是萌發的禾穀類種子，澱粉酶活性最強。主要是α-澱粉酶和β-澱粉酶。種子萌發時，澱粉酶活性隨萌發時間迅速增加，將澱粉分解成小分子糖類，供幼苗生長。α-澱粉酶隨機水解澱粉的α-1，4-糖苷鍵，作為澱粉分解的起始酶而起主要作用；其水解產物為麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原性糖；β-澱粉酶水解非還原端的第二個α-1，4-糖苷鍵，水解產物為麥芽糖，並能使一部分糊精糖化。本實驗以萌發種子為材料，測定其中α-澱粉酶和β-澱粉酶活性的差異。
【原理】
兩種澱粉酶具有不同理化特性，α-澱粉酶不耐酸，在PH3�6以下迅速鈍化；β-澱粉酶不耐熱，在70℃下15Min則被鈍化。據此，在測定時鈍化其中之一，就可以測定出另一種酶的活力，本實驗採用加熱鈍化β-澱粉酶測出α-澱粉酶活力，再與非鈍化條件下測得的總澱粉酶活力比較，求出β-澱粉酶活力。澱粉的水解產物麥芽糖及其他還原性糖能與3，5-二硝基水楊酸試劑反應，使其還原生成紅色3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，其顏色深淺與澱粉酶水解產物的濃度成正比，可用麥芽糖(或葡萄糖)濃度表示，用比色法測定澱粉生成的還原糖的量，以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。
【儀器與用具】
分光光度計；離心機；恆溫水浴器；研缽；具塞刻度試管25Ml 13支，刻度吸管1ml、2ml、5Ml各1支；容量瓶50Ml 2支。
【試劑】
麥芽糖標准液(1Mg／Ml)：稱取100Mg麥芽糖，用蒸餾水溶解並定容至100Ml。
DNS試劑(3，5-二硝基水楊酸)：精確稱取3，5-二硝基水楊酸1g，溶於20Ml 12Mol／L NAOH溶液中，加入50Ml蒸餾水，再加入30g酒石酸鉀鈉，待溶解後用蒸餾水定容至100Ml。蓋緊瓶塞，勿使CO2進入。若溶液混濁，可過濾後使用。
0�1Mol／L PH5�6的檸檬酸緩沖液：A液(0�1Mol／L檸檬酸)：稱取分析純檸檬酸21�01g，用蒸餾水溶解並定容至1L；B液（0�1Mol／L檸檬酸鈉）：稱取檸檬酸鈉29�41g用蒸餾水溶解並定容至1L；取A液55Ml與B液145Ml混勻，即為0�1Mol／L PH5�6的檸檬酸緩沖液。
1％澱粉溶液：稱取1g澱粉溶於100Ml 0�1Mol／L PH5�6的檸檬酸緩沖液中。
【方法】
1.酶液提取稱取25℃下萌發3～4天的小麥種子1�0g(芽長1�0～1�5CM)，置研缽中，加少量石英砂和2Ml蒸餾水，研磨成勻漿後轉入離心管中，用7Ml蒸餾水分次將殘渣洗入離心管，提取液在室溫下放置提取15～20Min，每隔數分鍾攪動1次，使其充分提取。然後在3000r／Min轉速下離心10Min，將上清液倒入50Ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為澱粉酶原液。吸取上述澱粉酶原液5Ml，放入50Ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度搖勻，即為澱粉酶稀釋液。
2�麥芽糖標准曲線製作取7支幹凈的具塞刻度試管，編號，按表18-1加入試劑：
表18-1製作麥芽糖標准曲線配方表
試劑管號1234567麥芽糖標准液（ml)00.20.40.81.21.62.0蒸餾水（ml)2.01.81.61.20.80.40麥芽糖含量（mg)00.20.40.81.21.62.03,5-二硝基水楊酸（ml)2222222搖勻，置沸水浴中煮沸5Min。取出後流水冷卻，加蒸餾水定容至20Ml。以1號管作為空白調零點，在540nM波長下比色測定。以麥芽糖含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標准曲線。
3�酶活力的測定取6支幹凈的具塞刻度試管，編號，按表18-2進行操作。
表18-2酶活力的測定配方表
操作項目管號Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ-3Ⅱ-1Ⅱ-2Ⅱ-3澱粉酶原液（ml)1.01.01.0000鈍化β-澱粉酶置70℃水浴中15Min,取出後在流水中冷卻澱粉酶稀釋液（ml)000111DNS試劑（ml)2.0002.000預保溫40℃恆溫水浴中保溫10Min1%澱粉溶液（ml)(40℃)1.01.01.01.01.01.0保溫40℃恆溫水浴中准確保溫5MinDNS試劑（ml)02.02.002.02.0搖勻，置沸水浴中5Min，取出後冷卻，加蒸餾水至20Ml，搖勻，在540nM波長下比色，記錄測定結果。
4�結果計算 用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值與Ⅰ-1吸光度值之差，在標准曲線上查出相應的麥芽糖含量(Mg)，再按下式計算α-澱粉酶的活力(Aα)，澱粉酶活性以每克鮮重所含麥芽糖毫克數(Mg／g·Min)表示：
Aα＝CαVTFW×t×V1（18-1）
Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值與Ⅱ-1吸光度值之差，在標准曲線上查出相應的麥芽糖含量(Mg)，按式18-1計算(α＋β)-澱粉酶的活性AT�
AT＝CT×VTFW×t×V1
式中A:澱粉酶活性，Aα為α-澱粉酶的活性，AT為澱粉酶總活性，主要是α、β-澱粉酶的活性；
Cα:α-澱粉酶水解澱粉生成的麥芽糖量(查標准曲線求值，以下同)；
CT:(α＋β)澱粉酶共同水解澱粉生成的麥芽糖量；
V1:顯色所用酶液體積(Ml)；
T:酶作用時間(Min)；
VT:樣品稀釋液總體積(α-澱粉酶為50Ml，α＋β澱粉酶為500Ml)；
FW:樣品鮮重(g)。
【思考題】
1.萌發種子和干種子α-澱粉酶和β-澱粉酶活力有何差異�這種變化有何生物學意義�
2�實驗中設置對照的意義何在�
3�α-澱粉酶和β-澱粉酶性質有何不同�作用特點有何不同
⑶ 測定酶活力需要控制哪些條件
最適測定條件與條件的優化
國際臨床化學聯合會（ifcc）和中華醫學會檢驗分會均推薦選擇在「最適條件」下測定酶活性濃度。所謂最適條件是指能滿足酶促反應速度達到最大反應速度所需的條件。包括：①合適的底物和最適底物濃度；②理想的緩沖液種類和最適離子強度；③反應液的最適ph；④最適反應溫度；⑤合適的輔因子、激活劑濃度；⑥若是酶偶聯反應，還需要確定指示酶和輔助酶的用量；⑦合理的測定時間，包括延滯期盡量短暫，有足夠的線性期；⑧合適的樣品與反應試劑的比例；⑨足夠的檢測范圍；⑩盡量去除各種抑制劑等。
1．底物濃度
除選擇適合的底物外，在實際應用中更多考慮的是底物濃度。由於[s]與反應速度v成雙曲線關系，在酶活性測定時，要求[s]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比。[s]范圍一般選擇在10～20km為宜，此時反應速度基本達到最大反應速度，測定的誤差在可接受范圍。
2．酶濃度
在反應條件一定時，酶濃度與反應速度成正比。按照中間產物學說，只有[s]>>[e]時，酶才能被底物分子飽和，反應速度才能達到最大值。因此當標本酶活力過高時，應將標本適當稀釋後再加以測定。
3．溫度
不同的酶最適溫度可以不同，多數酶的最適溫度在37～40℃，高於或低於最適溫度，酶活性都降低。目前，酶活性的測定溫度尚未統一，但常規實驗室多使用37℃。溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度系數(q10)表示。溫度系數指溫度每升高10℃，化學反應速度增加的倍數。q10通常為l～2。由溫度系數得知，溫度的變化對酶活性有著重要影響，因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行，溫度波動要控制在±1℃。
4．離子強度和ph值
在最適ph時，酶的活性最強，高於或低於最適ph，酶的活性都降低，多數酶的最適ph在5～8之間。在測定酶活性時，要求緩沖液具有足夠的緩沖容量，以便使ph值保持穩定。血漿或血清標本含有多種緩沖溶質，具有較強的緩沖能力。為了防止血漿或血清標本緩沖溶質對反應液酸鹼度的影響，使ph不致偏離設定值，標本用量不宜過大，血漿或血清標本體積／反應液體積≤1／10為宜。
5
輔助因子
某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子，例如zn2+是羧基肽酶的輔基，mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基，nadh是不需氧脫氫酶的輔酶。這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性，因此在酶活性測定時，就要保證輔基或輔酶的供給。
6．激活劑
有些酶在有激活劑存在時才有活性或活性較高，例如mg2+是肌酸激酶的激活劑，cl-是澱粉酶的激活劑。因此在酶活性測定時，也要滿足酶對激活劑的需要。
7．抑制劑
酶的抑制可分為不可逆抑制和可逆抑制，後者又可分為競爭性抑制和非競爭性抑制。重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類葯物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制；哇巴因對na+，k+-atp酶的抑制屬於非競爭性抑制。抑制劑使酶活性降低，在測定酶活性時，應避免抑制劑的影響。
綜上所述，測定酶活性時，最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適ph值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則。
⑷ 澱粉酶的測定方法有哪些
植物中的澱粉酶能將貯藏的澱粉水解成麥芽糖。澱粉酶幾乎存在於所有植物中，其中以禾穀類種子的澱粉酶活性最強。植物中有α–澱粉酶和β–澱粉酶，其活性因植物的生長發育時期不同而有所變化。通過本實驗掌握澱粉酶的提取和測定方法。
原理：
α–澱粉酶和β–澱粉酶，各有其一定的特性，如β–澱粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化，而α–澱粉酶不耐酸，在pH3.6以下則發生鈍化。通常提取液中同時有兩種澱粉酶存在，測定時，可根據它們的特性分別加以處理，鈍化其中之一，即可測出另一酶的活性。將提取液加熱到70℃維持15 min以鈍化β–澱粉酶，便可測定α–澱粉酶的活性。或者將提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以處理，鈍化α–澱粉酶，以求出β–澱粉酶的活性。
澱粉酶水解澱粉生成的麥芽糖，可用3，5–二硝基水楊酸試劑測定。由於麥芽糖能將後者還原生成3–氨基–5–硝基水楊酸的顯色基團，在一定范圍內其顏色的深淺與糖的濃度成正比，故可求出麥芽糖的含量。以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。
⑸ 澱粉酶活力測定還有哪些方法
澱粉酶可以催化澱粉分解成葡萄糖，所以首先建立已知濃度的葡萄糖標准曲線（葡糖濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標），然後令澱粉酶在一定條件下催化一定量澱粉反應，反應結束後檢測反應完成液的吸光度（一般需染色劑染色），對比標准曲線即可換算出產物葡糖的量，然後可以計算出澱粉酶的活力
⑹ 影響酶促反應速度的因素有哪些 實驗報告
pH、溫度、紫外線、重金屬鹽、抑制劑、激活劑等通過影響酶的活性來影響酶促反應的速率,紫外線、重金屬鹽、抑制劑都會降低酶的活性,使酶促反應的速度降低,激活劑會促進酶活性來加快反應速度,pH和溫度的變化情況不同,既可以降低酶的活性,也可以提高,所以它們既可以加快酶促反應的速度,也可以減慢；酶的濃度、底物的濃度等不會影響酶活性,但可以影響酶促反應的速率.酶的濃度、底物的濃度越大,酶促反應的速度也快.
望採納
⑺ 唾液澱粉酶活力的測定方法
實驗原理：
唾液澱粉酶能催化水解澱粉，生成分子較小的糊精和麥芽糖。本實驗利用碘的呈色反應來測定唾液澱粉酶水解澱粉作用的速度，從而測定唾液澱粉酶活力的大小。
實驗儀器和試劑：
1.儀器(1)多孔白瓷板(2) 50mL三角瓶(3)恆溫水浴鍋(4)燒杯(5) 500mL容量瓶(6) 100mL容量瓶(7)漏斗(8)吸管
2.試劑（1) 原碘液:稱取碘11g、碘化鉀22g，加少量蒸餾水完全溶解後，定容至500mL，於棕色瓶中保存。（2)稀碘液:吸取原碘液2mL，加碘化鉀20g，用蒸餾水溶解，定容至500mL，於棕色瓶保存。
(3) 標准「終點色」溶液
①准確稱取氯化鈷40.2439g、重鉻酸鉀0.4878g，加蒸餾水溶解並定容至500mL。
②准確稱取鉻黑T 40mg,加蒸餾水溶解並定容至100mL。取①液80mL與②液10mL混合，即為終點色。冰箱保存。
(4) 2%可溶性澱粉溶液:稱取烘乾可溶性澱粉2.00g,先以少許蒸餾水混勻,傾入80ml沸水中，繼續煮沸至透明，冷卻後用蒸餾水定容至100mL。(需新鮮配製)
(5)稀釋100倍的唾液用蒸餾水漱口，以清除食物殘渣,然後讓唾液流入量筒並稀釋100倍,混合備用。
(6) 0.02mol/L、 pH6.8磷酸氫= _鈉-檸檬酸緩沖溶液:稱取磷酸氫二鈉45.23g和檸檬酸8.07g，用蒸餾水溶解後定容至1000mL，配好後用酸度計或精密試紙校正pH。
操作步驟：
(1) 將「標准色」溶液滴於白瓷板的左.上角空穴內，作為比較終點色的標准。
(2)在50ml 的三角瓶中，加入2%可溶性澱粉溶液20mL，加緩沖液5mL在37°C水浴中平衡約10min,加入0. 5mL稀釋唾液，立即記錄時間，充分搖勻。定時用滴管取出反應液約0.25mL，滴於預先充滿此稀碘液(約0.75mL)的調色板空穴內，當空穴顏色由紫色變為棕紅色，與標准色相同時,即為反應終點，記錄時間T (min) 。
⑻ α–澱粉酶制劑活力測定方法
（1） 在比色試管中，加入1ml標准糊精溶液和3ml標准稀碘液，混勻，作為比較顏色的標准管。
（2） 在25mm×250mm試管中，加入2%可溶性澱粉溶液20ml，pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液5ml，在60℃水浴中平衡約5min，然後加入預先用緩沖液稀釋好的酶液0.5ml，立即計時並充分混勻。定時取出1ml反應液加入預先盛有3ml比色稀碘液的試管中，然後每隔1min重復此操作，當試管中的顏色與標准管顏色相同時，即達到終點（比色時兩試管面向直射光線，憑肉眼觀察），記錄反應總時間。此反應應在3min之內達到終點，如反應時間不在此范圍內，應重新調節樣品或酶的稀釋度在做。
（3） 計算α–澱粉酶活力 以1ml酶液於60℃、Ph6.0的條件下，在1h液化可溶性澱粉的克數為1個酶活力單位。
酶活力單位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5
式中，60—酶活定義中反應時間為60min；
T—反應時間（min）；
20—可溶性澱粉的毫升數；
2%—可溶性澱粉濃度；
N—酶液稀釋倍數；
0.5—測定時所用酶液量（ml）。
⑼ 澱粉酶活力的測定有幾種方法
第一種：相同條件下，分別將等物質的量的酶加入適宜條件的澱粉中，然後用碘液測定
第二種：相同條件下，分別將等物質的量的酶加入適宜條件的澱粉中，然後用斐林試劑進行還原糖的測定