殼聚糖液相檢測方法

㈠ 殼聚糖游離氨基的數目如何確定

1 范圍

本方法適用於紅曲米、紅曲紅、紅曲發酵液和功能性紅曲中桔青黴素的測定。

2 原理

試樣中的桔青黴素經提取、凈化及濃縮後, 根據在高壓液相色譜上的出峰面積測定含量。

3 試劑

3.1 乙腈：HPLC級；

3.2 磷酸：分析純或色譜純；

3.3 甲醇：HPLC級；

3.4 甲苯：分析純；

3.5乙酸乙酯： 分析純；

3.6甲酸：分析純；

3.7水：去離子水

3.8乙醇：色譜純

3.9桔青黴素標准溶液:：准確稱取桔青黴素標准品（美國Sigma公司），用甲醇溶解，製成500 mg/L的儲藏液， 工作液稀釋到100mg/L，置4°C冰箱中備用。

3.10高壓液相色譜洗脫劑：乙腈-去離子水（用色譜純磷酸調pH至2.5）[35+65，v/v]

4 儀器

4.1 高效液相色譜儀；

4.2色譜柱：Eclipse XDB C18反相色譜柱，250 × 4.6mm, 粒度直徑為5μm；

4.3試樣環：20μL；

4.4檢測器：熒光檢測器，λex=331，λem=500；

4.5 VCX 400超聲波細胞破碎儀；

4.6電子天平：千分之一或萬分之一；

4.7 pH計：精度為0.01；

4.8勻漿器；

4.9離心機；

4.10旋轉蒸發器；

4.11 分光光度計

4.12 0.45μm的微孔偏氟濾膜；

4.13具塞試管；

4.14燒杯；

4.15比色管。

5 分析步驟

5.1 桔青黴素的提取

5.1.1紅曲米樣品的預處理

准確稱取粉碎的紅曲米粉（細度達到測定色價時的要求）0.5—3.0g(根據紅曲樣品中的桔青黴素含量高低而定) 於50mL燒杯中，加入20mL復合萃取劑甲苯：乙酸乙酯：甲酸（7：3：1，v/v），稱重，記錄下連燒杯在內的重量，超聲波處理10min（強度40%，5s，5s），自然澄清後稱重，如果重量低於原重量，需用復合萃取劑補足。將上清液移入50mL具塞試管中，殘渣中另加入15mL復合萃取劑，第二次稱重並超聲波處理（10min），自然澄清後稱重，用復合萃取劑補足至超聲處理前的重量，上清液移入50mL具塞試管，殘渣用15ml復合萃取劑再重復提取一次。合並三次提取液，充分混勻後取30ml離心（3000rpm，20 min），上清液真空濃縮至干後溶於30ml甲醇中，微濾後取20μl 進行HPLC分析。

5.1.2液態發酵液的預處理

用均質器將發酵液中的菌絲打碎，取10mL均勻打碎的發酵液於比色管中，用乙醇定容至25mL，60℃加熱1h（期間不斷振搖），3000rpm離心15min，上清液微濾後取20μl進行HPLC分析。

㈡ 食品中過氧化氫殘留還有哪些檢測方法

過氧化氫也被稱為雙氧水，純品為無色液體，極不穩定易分解，它是一種性能優良的氧化劑、漂白劑、消毒劑和交聯劑，且具有高效殺菌、低殘留、易分解、漂白效果好的的特點，促使許多食品製造商在食品生產加工中使用過氧化氫，用於殺滅生產設備、包裝材料和食物中的有害微生物，提高產品的保藏期、防腐防臭、漂白食物、增加食品的美觀度等。
我國食品添加劑使用標准GB2760-2011 中允許食品級過氧化氫在食品生產中作為加工助劑使用，但在製成成品前應該清除，如果清除不完全應嚴格控制在規定的范圍內。
然而由於過氧化氫在使用過程中的眾多性能優勢，一些生產廠家在生產過程中過量添加過氧化氫和非法添加過氧化氫的現象非常嚴重，由此而引起的食物中毒事件常有發生。
因此，檢測食品中過氧化氫殘留是一件非常重要的事情，檢測方法主要有以下幾種：
1、化學滴定法
化學滴定法測定過氧化氫的原理是利用過氧化氫具有氧化性和還原性的特性，通過氧
化還原反應，顯色劑變色，目視法確定反應終點的一種檢測分析方法，該方法操作簡單，但不適用於微量分析。GB/T 23499-2009中的碘量法和鈦鹽比色法就屬於化學滴定法。但是對於脂類和蛋白含量較高的樣品，方法的精密度和准確度較差。
2、分光光度法
分光光度法是在分光光度計中，在特定波長處或一定波長范圍內，測定被測物質濃度與光的吸光度值呈線性關系，可以對被測物質進行定性、定量分析的方法。近年來，分光光度法由於操作方便、儀器設備價格低等優點被廣泛應用於檢測分析中，研究發現在過
氧化氫的特徵反應中，鋁酸鹽具有催化作用，偏釩酸銨可以作為顯示劑，過氧化氫氧化碘離子與亞甲基藍反應生成離子絡合物，使用分光光度計可以進行微量分析。
3、高效液相色譜法
高效液相色譜法是近幾十年來發展起來的一種新型分離分析技術，因其具有靈敏度好和檢測速度快等特點，現已被廣泛應用於食品、葯物、生物化學等的分析中。應用高效液相色譜檢測過氧化氫的例子也有很多。如可以採用C18色譜柱，將樣品中的過氧化氫與三苯基膦進行衍生化反應，生成氧化三苯基膦，採用高效液相色譜法可以進行定性定量測定。
4、化學發光法
化學發光法是在催化劑作用下，採用光電倍增管接受發光物質所產生光信號的一種方
法。在過氧化氫化學發光分析中，主要採用魯米諾、過氧草酸酯和光澤精三中發光物質，
魯米諾作為最有效的化學發光物質，近年來成為研究的熱點。
5、熒光光度法
物質受到紫外光照射後會發射出紫外光熒光或可見熒光，熒光光譜的范圍較廣，可以
從 X 光到紅外光譜區。過氧化酶提高了熒光光度法的靈敏度和選擇性，可用於測定低濃度
的 過氧化氫。
6、電化學分析法
電化學分析方法是基於電化學性質的一種分析方法。通常，將被測物質作為一個電化學池的一部分，被測物質的濃度與電參數存在線性關系進行測定的一種方法。電化學分析
法具有測量范圍寬、儀器設備價格低等特點，因此在一定程度上得到廣泛的應用。採用電流法和循環伏安法對該納米鉑-多壁碳納米管、殼聚糖修飾鉑玻碳電極的化學性能進行研
究，過氧化氫與還原峰呈良好的線性關系。

㈢ 求助：殼聚糖納米粒透射電鏡表徵的制樣方法

透射電鏡（結合圖象分析儀）法，光子相關譜（PCS）（或稱動態光散射），比表面積法以及X射線小角散射法（SAXS）等四種。1、透射電鏡法：透射電鏡是一種直觀、可靠的絕對尺度測定方法，對於納米顆粒，它可以觀察其大小、形狀，還可以根據像的襯度來估計顆粒的厚度，顯微鏡結合圖像分析法還可以選擇地進行觀測和統計，分門別類給出粒度分布。如果將顆粒進行包埋、鑲嵌和切片減薄制樣，還可以對顆粒內部的微觀結構作進一步地分析。當對於所檢測的樣品清晰成像後，就是一個測量和統計的問題。一種作法是選取足夠多的視場進行照相，獲得數百乃至數千個顆粒的電鏡照片，再將每張照片經掃描進入圖象分析儀進行分析統計。按標准刻度計算顆粒的等效投影面積直徑，同時統計落在各個粒度區間的顆粒個數。然後計算出以個數為基準的粒度組成、平均粒度、分布方差等，並可輸出相應的直方分布圖。在應用軟體中還包括個數分布向體積分布轉換的功能，往往將這兩種分布及相關的直方圖和統計平均值等都出來。該方法的優點是直觀，而且可以得到顆粒形狀信息，缺點是要求顆粒要處於良好的分散狀態，另外，由於用顯微鏡觀測時所需試樣量非常少，所以對試樣的代表性要求嚴格。因此取樣和制樣的方法必須規范；而且要對大量的顆粒的粒徑進行統計才能得到粒度分布值或平均粒徑。2、光子相關譜法：該方法是基於分子熱運動效應，懸浮於液體中的微細顆粒都在不停地作布朗運動，其無規律運動的速率與濕度和液體的粘度有關，同時也與顆粒本身的大小有關。對於大的顆粒其移動相對較慢，而小的顆粒則移動較快。這種遷移導致顆粒在液體中的擴散，對分散於粘度為η的球形顆粒，彼此之間無交互作用時，它的擴散系數D同粒徑x之間的關系滿足一關系。而當一束激光通過稀薄的顆粒懸浮液時，被照射的顆粒將會向四周散射光。在某一角度下所測散射光的強度和位相將取決於顆粒在光束中的位置以及顆粒與探測器之間的距離。由於顆粒在液體中不斷地作布朗運動，它們的位置隨機變動，因而其散射光強度也隨時間波動。顆粒越小，擴散運動越強，散射光強度隨即漲落的速率也就越快；反之則相反。光子相關譜（PCS）法這正是從測量分析這種散射光強的漲落函數中獲得顆粒的動態信息，求出顆粒的平移擴散系數而得到顆粒得粒度信息的，所以又稱為動態光散射法。光子相關譜法粒度分析的范圍約3nm～1000nm。測試速度快，對粒度分布集中且顆粒分散好的樣品，測量結果重復性好。該方法缺點是要求樣品要處於良好的分散狀態，否則測出的是團聚體的粒度大小。3、比表面積法：粉末的比表面積為單位體積或單位質量粉末顆粒的總表面積，它包括所有顆粒的外表面積以及與外表面積相聯通的孔所提供的內表面積。粉末的比表面積同其粒度、粒度分布、顆粒的形狀和表面粗糙度等眾多因數有關，它是粉末多分散性的綜合反映。測定粉末比表面積的方法很多，如空氣透過法、BET吸附法、浸潤熱法、壓汞法、X射線小角散射法等，另外也可以根據所測粉末的粒度分布和觀察的顆粒形狀因子來進行計算。在以上方法中，BET低溫氮吸附法是應用最廣的經典方法，測量比表面積的BET吸附法，是基於測定樣品表面上氣體單分子層的吸附量。最廣泛使用的吸附劑是氮氣，測定范圍在1—1000m2/g，十分適合對納米粉末的測定；該方法的優點是設備簡單，測試速度快，但它僅僅是納米粉末的比表面積的信息，通過換算可以得到平均粒徑的信息，但不能知道其粒度分布的情況。4、X射線小角散射法：X射線小角散射（SAXS）系發生於原光束附近0～幾度范圍內的相干散射現象，物質內部1至數百納米尺度的電子密度的起伏是產生這種散射效應的根本原因。因此SAXS技術可以用來表徵物質的長周期、准周期結構以及呈無規分布的納米體系。廣泛地用於1～300nm范圍內的各種金屬和非金屬粉末粒度分布的測定，也可用於膠體溶液、磁性液體、病毒、生物大分子以及各種材料中所形成的納米級微孔、GP區和沉澱析出相尺寸分布的測定。SAXS的結果所反映的為一次顆粒的尺寸：所謂一次顆粒，即原顆粒，可以相互分離而獨立存在的顆粒。很多顆粒粘附在一起形成團粒，這在納米粉末中是相當常見的。如不能將其中的顆粒有效地分散開來，它們將會作為一個整體而沉降、遮擋和散射可見光，其測試結果勢必為團粒尺寸的反映。而SAXS測試結果所反映的既非晶粒亦非團粒而是一次顆粒的尺寸。測試結果的統計代表性：檢測結果是否具有代表性，當取樣合理時，主要是看測量信息來源於多少個顆粒。對小角散射而言就是要看測量時X射線大約照射上多少顆粒，根據上述參數可以算出X射線輻照體積內的顆粒數近似為1.8×10的10次方個。因此，我們可以認為一般小角散射信息來自10的9次方～10的11次方個顆粒，這也就保證其結果的統計代表性。

㈣ 食品中是否含有殼聚糖成分怎樣檢測出來

殼聚糖在自然界中廣泛存在於低等生物菌類，藻類的細胞，節支動物蝦、蟹、昆蟲的外殼等。人體內是沒有的。

在pH 5.5的B-R(Britton-Robinson)緩沖溶液中，殼聚糖對熒光素的吸光度度具有明顯的降低作用,且降低程度與加入的殼聚糖濃度成線性關系,據此可以建立一種測定殼聚糖含量的分光光度法。

來自《分析試驗室》 2008年S1期 保健食品中殼聚糖含量檢測新方法的研究

㈤ 殼聚糖的制備：以蝦殼為原料，來提取殼聚糖。 急！急！急！急！希望高手來幫助啊！萬分感謝！

蝦殼蟹殼漂洗----脫鈣及無機鹽----脫蛋白質及脂----脫鹼，漂洗----水洗；烘乾----甲殼素產品----濃鹼處理----水洗；烘乾----殼聚糖初產品----提純----殼聚糖初產品----提純-----殼聚糖產品

㈥ 殼聚糖微生物檢測方法

小生新手，不知殼聚糖在微生物檢測時用的什麼標准？為什麼我用葯品的標准檢測時，每次檢出的細菌總數很少幾乎沒有？請哪位前輩指點迷境？謝謝！！

㈦ 殼聚糖的功效是什麼

1.控制膽固醇

人類健康的最大問題之一是膽固醇，它導致許多嚴重的疾病。殼聚糖有兩個機制降低膽固醇。一個是阻止脂肪的吸收，另一個是將人體血液內的膽固醇排泄掉。首先，殼聚糖抑制那些助於脂肪吸收的脂肪酶的活性。

脂肪酶分解脂肪使人體進行吸收。另外一個是排泄膽酸。一旦膽酸排泄，則血液中的膽固醇被用於製造膽酸。這兩種機制使得殼聚糖成為強膽固醇清除劑。殼聚糖是一種天然材料，具有強大的陰離子吸附力，適用於降低膽固醇而沒有任何副作用。

2.抑制細菌活性

殼聚糖在弱酸溶劑中易於溶解，特別值得指出的是溶解後的溶液中含有氨基（NH2+），這些氨基通過結合負電子來抑制細菌。殼聚糖的抑制細菌活性，使其在醫葯、紡織和食品等領域有著廣泛的應用。

(7)殼聚糖液相檢測方法擴展閱讀：

此外，殼聚糖的一個顯著特性是吸附能力。許多低分子量的材料，比如金屬離子、膽固醇、甘油三酯、膽酸和有機汞等，都可以被殼聚糖吸附。特別是殼聚糖不僅可以吸附鎂、鉀，而且可以吸附鋅、鈣、汞和鈾。殼聚糖的吸附活性可以有選擇地發揮作用。

這些金屬離子在人體中濃度太高是有害的。比如，血液中銅離子（Cu2+）濃度過高會導致銅中毒，甚至產生致癌後果。現已證明殼聚糖是高效的螯合物介質。殼聚糖的吸附能力的大小取決於其脫乙醯度。脫乙醯度越大，吸附能力越強。

參考資料來源：網路-殼聚糖

㈧ 蛋白質含量可以用液相嗎

一個完整的樣品測定方法需要大量的文獻資料考察、方法摸索、方法驗證。這么大量的工作基本是1-2個月的工作量。你提問連個懸賞都不給，實在是有點摳門。
我只能給出大致方向，具體方法還要你自己找專家去問，來這里回答問題的只能叫專業人士，很少有專家。
第一，明確測定目標，將目標物從樣本中提取出來。
螺旋藻藻藍蛋白的提取常分為蛋白溶出和蛋白沉澱兩個過程。藻藍蛋白是屬於胞內蛋白質, 要使其溶出首先要破碎細胞的細胞壁、細胞膜使其以溶解的狀態溶於提取液中, 再採用適宜的方法將其沉澱,在提取過程應保持蛋白的活性，本實驗中，將經細胞破碎後的粗提液，先用磷酸緩沖液做溶劑把蛋白質溶解出來，再用離心法除去不溶物即得藻藍蛋白初提取物，再經殼聚糖親和沉澱－活性炭吸附，透析除鹽，除掉其他雜質，最後結合陰離子交換層析即可得到高度純化的藻藍蛋白。
（參見：螺旋藻藻藍蛋白分離方法研究，網路搜索，網路文庫中文章）
第二，尋找合適的測定方法，准確定量。
其實利用鉛電極測定及總氮量測定法測定總蛋白含量是非常簡單易行且准確的。但是你要求是用液相法測，那就非常麻煩了。因為不同的蛋白質會被液相分離開來，每種蛋白質都需要用對照品進行准確定量，最終再折算成總氮量進行計算。不僅復雜、難以操作，而且其前期對色譜峰進行定性的工作就已經是非常大的工作量了。所以用液相分離是一種得不償失的檢測方法。

㈨ 殼聚糖制備水凝膠的方法

這個三言兩語是講不清楚的，建議你查一下文獻。
附一篇的摘要：
楊旭東,吳國傑,林玩金.殼聚糖水凝膠的制備及性能研究[j].化工新型材料,2005,33(12)
摘要：以殼聚糖為原料,用戊二醛作為交聯劑,在醋酸溶液中合成殼聚糖水凝膠.用正交實驗優化了制備殼聚糖水凝膠的工藝條件,實驗結果表明:當殼聚糖濃度為3%、戊二醛濃度為3%、凝膠溫度為55℃時製得的水凝膠硬度最大;當殼聚糖濃度為2%、戊二醛濃度為1%、凝膠溫度為45℃時,製得的水凝膠溶脹度最大.殼聚糖水凝膠具有良好的生物相容性.