檢測膜電位的簡單方法

❶ 怎樣檢測線粒體膜電位

質泵存於線粒體內膜基質內質泵入膜間隙質跨膜轉運使線粒體膜間隙積累量質形質梯度：線粒體膜間隙產量電荷線粒體基質產量負電荷形跨線粒體內膜跨膜電位 (ΔΨ)簡稱線粒體膜電位線粒體膜電位維持線粒體進行氧化磷酸化、產ATP前提維持線粒體功能所必需凋亡程重要變化即線粒體膜電位崩潰 (Rostovtseva et al., 2005)

❷ western blot能檢測線粒體膜電位變化嗎

我專門搞過一段時間線粒體功能檢測，主要有以下流式細胞術檢測方法供你參考：
1 以NAO標記線粒體表面心肌磷脂含量，評價線粒體質量
2 以 JC－1檢測線粒體膜電勢
3 以DiOC6（3） /PI雙染檢測線粒體膜電勢和死亡細胞
4 以Mitotracker Green FM標記線粒體質量

Rodamin123和其他Radamin衍生染料不推薦，原因是熒光焠滅過快，而且對線粒體特異性染色程度較差，質膜系統基本都染

❸ 線粒體跨膜電位的測定方法有哪些

線粒體膜間隙產生大量正電荷、產生ATP的前提，是維持線粒體功能所必需, 2005)，質子跨膜轉運使得線粒體膜間隙積累大量質子.質子泵存在於線粒體內膜，而線粒體基質產生大量負電荷，形成質子梯度，可將基質內質子泵入膜間隙，簡稱為線粒體膜電位。正常線粒體膜電位是維持線粒體進行氧化磷酸化，而凋亡過程中一個重要的變化即是線粒體膜電位的崩潰 (Rostovtseva et al，從而形成跨線粒體內膜的跨膜電位 (ΔΨ)

❹ 靜息電位的測定方法

插入膜內的是尖端直徑<1μm的玻璃管微電極，管內充以KCl溶液，膜外為參考電極，兩電極連接到電位儀測定極間電位差。靜息電位都表現為膜內比膜外電位低，即膜內帶負電而膜外帶正電。

❺ 膜電位測量電極和參考電極怎麼區分

氟離子選擇電極的膜電位的產生是由於：氟離子進入晶體膜表面的晶格缺陷而形成雙電層結構。相關知識：一、膜電位將一個玻璃薄膜置於H+ 濃度不同的兩溶液間，由於玻璃膜的水化作用，膜內外便形成雙電層而產生電位差，該電位差稱為膜電位。二、電位分析法的定義、分類和特點1、定義：利用測得電極電位與被測物質離子濃度的關系求得被測物質含量的方法叫電位分析法。2、分類：a、直接電位法：利用專用的指示電極――離子選擇性電極，選擇性地把待測離子的活度（或濃度）轉化為電極電位加以測量，根據Nernst方程式，求出待測離子的活度（或濃度），也稱為離子選擇電極法。這是二十世紀七十年代初才發展起來的一種應用廣泛的快速分析方法。b、 電位滴定法：利用指示電極在滴定過程中電位的變化及化學計量點附近電位的突躍來確定滴定終點的滴定分析方法。電位滴定法與一般的滴定分析法的根本差別在於確定終點的方法不同。3、特點：應用范圍廣――可用於許多陰離子、陽離子、有機物離子的測定，尤其是一些其他方法較難測定的鹼金屬、鹼土金屬離子、一價陰離子及氣體的測定。因為測定的是離子的活度，所以可以用於化學平衡、動力學、電化學理論的研究及熱力學常數的測定。a、測定速度快，測定的離子濃度范圍寬。b、可以製作成感測器，用於工業生產流程或環境監測的自動檢測；可以微型化，做成微電極，用於微區、血液、活體、細胞等對象的分析。

❻ RP的測定靜息電位的方法

插入膜內的是尖端直徑<1μm的玻璃管微電極，管內充以KCl溶液，膜外為參考電極，兩電極連接到電位儀測定極間電位差。靜息電位都表現為膜內比膜外電位低，即膜內帶負電而膜外帶正電。這種內負外正的狀態，稱為極化狀態。靜息電位是一種穩定的直流電位，但各種細胞的數值不同。哺乳動物的神經細胞的靜息電位為-70mV（即膜內比膜外電位低70mV），骨骼肌細胞為-90mV，人的紅細胞為-10mV。
靜息電位的產生與細胞膜內外離子的分布和運動有關。正常時細胞內的K+濃度和有機負離子A-濃度比膜外高，而細胞外的Na+濃度和Cl-濃度比膜內高。在這種情況下，K+和A-有向膜外擴散的趨勢，而Na+和Cl-有向膜內擴散的趨勢。但細胞膜在安靜時，對K+的通透性較大，對Na+和Cl-的通透性很小，而對A-幾乎不通透。因此，K+順著濃度梯度經膜擴散到膜外使膜外具有較多的正電荷，有機負離子A-由於不能透過膜而留在膜內使膜內具有較多的負電荷。這就造成了膜外變正、膜內變負的極化狀態。由K+擴散到膜外造成的外正內負的電位差，將成為阻止K+外移的力量，而隨著K+外移的增加，阻止K+外移的電位差也增大。當促使K+外移的濃度差和阻止K+外移的電位差這兩種力量達到平衡時，經膜的K+凈通量為零，即K+外流和內流的量相等。此時，膜兩側的電位差就穩定於某一數值不變，此電位差稱為K+的平衡電位，也就是靜息電位。其具體數值可按Nernst公式計算。
計算所得的K+平衡電位值與實際測得的靜息電位值很接近，提示靜息電位主要是由K+向膜外擴散而造成的。如果人工改變細胞膜外K+的濃度，當濃度增高時測得的靜息電位值減小，當濃度降低時測得的靜息電位值增大，其變化與根據Nernst公式計算所得的預期值基本一致。但是，實際測得的靜息電位值總是比計算所得的K+平衡電位值小，這是由於膜對Na+和Cl-也有很小的通透性，它們的經膜擴散（主要指Na+的內移），可以抵銷一部分由K+外移造成的電位差數值。

❼ 如何使用JC-1檢測線粒體膜電位

博凌科為生物科技-為你解答：線粒體膜電位的降低是凋亡的一個早期事件，5,5,6,6-tetrachloro-1,1,3,3- iodide (JC-1)可用於流式細胞術檢測線粒體膜電位的變化。正常細胞的線粒體膜電位電壓較高，可形成JC-1的聚集體，發出紅色熒光，而線粒體膜電位降低的細胞，則會形成JC-1單體，發出綠色熒光。材料： 細胞懸液 完全細胞培養基 去極化葯物：如0.1mM valinomycin或0.25mM carbonyl cyanide m-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) in DMSO 1mg/ml JC-1儲存液（溶於DMSO），分裝成小包裝，在－20℃可保存1年。 PBS 具有488nm激發光源的流式細胞儀，配備525－590nm帶寬的濾鏡。JC-1染色： 收集2105的細胞，用預溫到37℃的新鮮完全培養基調整至1ml。制備陽性對照（以去極化葯物處理過的細胞）。標本和陽性對照的染色步驟相同。 融化1管JC-1儲存液，每1ml細胞懸液中通過邊振盪邊加的方式加入2.5L（終濃度：2.5ug/ml）。振盪細胞懸液直至標本形成均一的紅紫色。 JC-1在水相容易形成聚集體，所以需要邊振盪邊加。未用完的JC-1不要再保存至－20℃。 37℃避光保存10分鍾。 加入2ml PBS至細胞懸液中，500g室溫離心5分鍾，去上清。 以0.3ml PBS重懸細胞。上機取樣，注意獲取細胞的速度不要250至300細胞/秒。Fig1 HL-60 cells, (A) control and (B) depolarized (treated with 100 nM valinomycin), stained with 2.5 g/ml JC-1. Note the shift to the bottom and to the right by cells with depolarized mitochondria.Fig2 After incubation with 2.5 g/ml JC-1 at 37C, peripheral blood mononulear cells usually show a single population of monocytes, while here lymphocytes give rise to two separate peaks. This could indicate the presence of a functional heterogeneity within lymphocytes (A). Such a phenomenon, however, is not always present. Treating cells with valinomycin results in a loss of orange signal either from lymphocytes or from monocytes (B).

❽ jc-1檢測線粒體膜電位時應注意什麼

1）原理：JC-1是一種廣泛用於檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的理想熒光探針。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以產生橙色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體(monomer)，可以產生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。

（2）材料與儀器
JC-1購自Sigma公司，分子量652.23，用DMSO溶解，儲存濃度為5 mg/ml，終濃度稀釋成10 µg/ml; 熒光顯微鏡，多功能熒光酶標儀

（3）步驟
① 接種細胞：96孔板，接種細胞數為每孔1.5萬；或內置蓋玻片的24孔板，每孔細胞數為9萬。
② 處理：接種24小時後用有糖earle』s 液洗兩遍, 給予相應處理（氧化應激或葯物）。
③ JC-1孵育：用有糖earle』s 液洗1遍，並換上終濃度為10µg/ml JC-1培養箱孵育20 min.
④ 檢測：用有糖earle』s 液洗2遍，蓋玻片可在熒光顯微鏡下檢測熒光變化，96孔板在多功能熒光酶標儀檢測熒光值，檢測JC-1單體時激發光設置為488nm，發射光設置為530nm；檢測JC-1聚合物時，激發光設置為529nm，發射光設置為590nm

（4）注意點
稀釋JC-1時要迅速，否則易聚集，不易溶解；建議用碧雲天的JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒。

❾ 如何測量細胞膜電位需要什麼儀器

膜片鉗技術。不過這個東西很貴的……沒有幾百萬弄不齊一套。
不過那東西一般是做測電流的。測電壓……用電流鉗比較好。
膜片鉗技術是用微玻管電極(尖端直徑約1 ～5μm)接觸細胞膜而不刺入,然後在微電極另一端開口施加適當的負壓,將與電極尖端接觸的那一小片膜輕度吸人電極尖端的纖細開口,這樣在這小片膜周邊與微電極開口處的玻璃邊沿之間,會形成緊密的封接( gigaohm seal) ,在理想的情況下其電阻可達數個或數十個千兆歐姆( l09Ω )以上的阻抗封接,使與電極尖開口處相連的細胞膜的小區域(膜片)與其周圍的細胞膜在電學上完全分隔,如果在這一小片膜中只包含了一個或少數幾個通道蛋白質分子,那麼通過此微電極就可測出單一通道開放時的離子電流和電導,並能對單通道的其他功能特性進行分析。

❿ 流式細胞儀檢測線粒體膜電位如何分析

一般是使用JC-1或者rhodamin123來測量的，前者是看紅綠的比值，而後者是看綠色的強度。