檢測是否表達蛋白質的方法

A. 鑒別蛋白質的方法有哪些

常見的蛋白質鑒定方法有：

一、最簡單的方法就是對所要鑒定的物體進行灼燒

二、使用化學葯劑進行化學反應來鑒定蛋白質

三、較為精準的方法是使用儀器進行蛋白質鑒定，如質譜儀等

在生物學研究中經常會遇到一些關於蛋白質鑒定的問題，如單一蛋白質或者簡單混合物的鑒定；對單一蛋白質的序列分析等。這一類蛋白質鑒定，在精密度上要求較高，所以幾乎都是採用質譜儀器，來對蛋白質進行精密鑒定。

質譜技術是鑒定蛋白質的其中一種平台技術。可用到的質譜儀有Thermo Fisher的Q Exactive質譜儀，LTQ Orbitrap Velos質譜儀，以及AB SCIEX的6500 Q TRAP質譜儀。所在鑒定機構的不同，在硬體品牌的使用上也會有不同。

蛋白質鑒定的流程一般分三大步：蛋白質提取、純化、鑒定。這個流程是一個將蛋白質層層「解剖」的過程，從中我們可以對蛋白分子量進行測定，蛋白膠點、膠條、IP樣品蛋白質進行鑒定，非變性質譜分析以及Pull-down靶蛋白質譜鑒定等，較為細致的去分析蛋白質中的各種物質、性質等。

B. 檢測基因蛋白水平的表達有哪些方法

轉錄水平檢測：RT-PCR，real-time PCR，northern blot
翻譯水平檢測：western blot
還有直接檢測，如報告基因、融合熒光蛋白等。

C. 蛋白質表達檢測有哪幾種方法

有三種，第一是用DNA探針檢測，看目的基因是否存在。第二種是用mRNA做探針，看是否有由DNA轉錄形成的mRNA，原理和前面是一樣的，利用鹼基互補配對原則。前面兩種都是在分子水平檢測，第三種是在個體水平直接檢測的。比如：直接拿害蟲去侵蝕抗蟲棉

D. 檢測基因表達的方法

主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)

一、外源基因轉錄水平的鑒定

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以DNA（基因）為模板生成mRNA的過程，翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。

即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交，它是以DNA或RNA為探針，檢測RNA鏈。和Southern雜交相同，Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄，然後再經PCR擴增。

如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與Northern雜交的實驗結果結合。

二、外源基因表達蛋白的檢測

表達蛋白的檢測方法有三種：

1、生化反應檢測法：主要通過酶反應來檢測；

2、免疫學檢測法：通過目的蛋白（抗原）與其抗體的特異性結合進行檢測，具體方法有Western雜交、酶聯免疫吸附法（ELISA）及免疫沉澱法；

3、生物學活性的檢測。

Western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離抗原（Antigen）固定在固體支持物上（如硝酸纖維素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同，據此可確定特定的抗原存在與否以及相對豐度，或者蛋白質是否遭到降解等。

蛋白質電泳後轉到NC膜，放在蛋白質（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，溫育，以封閉非特異性位點，然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交，抗原-抗體結合，再通過放射性自顯影或顯色觀察。

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外顯子與內含子表達過程中的相對性 從內含子與外顯子的定義來看，兩者是不能混淆的，但是真核生物的外顯子也並非都「顯」（編碼氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外顯子完全「不顯」之外，幾乎全部的結構基因的首尾兩外顯子都只有部分核苷酸順序編碼氨基酸，還有完全不編碼基酸的外顯子，如人類G6PD基因的第一外顯子核苷酸順序。

已發現一個基因的外顯子可以是另一基因的內含子，所這亦然。以小鼠的澱粉酶基因為例，來源於肝的與來源於唾液腺的是同一基因。澱粉酶基因包括4個外顯子，肝生成的澱粉酶不保留外顯子1，而唾液腺中的澱粉酶則保留了外顯子1的50bp順序，但把外顯子2與前後兩段內含子一起剪切掉，經過這樣剪接，外顯子2就變成唾液澱粉酶基因中的內含子。

同一基因在不同組織能生成不同的基因產物來源於不同組織的類似蛋白，可以由同一基因編碼產生，這種現象首先是由於基因中的增強子等有組織特異性，它能與不同組織中的組織特異因子結合，故在不同組織中同一基因會產生不同的轉錄物與轉錄後加工作用。

此外真核生物基因可有一個以一的poly(A)位點，因此能在不同的細胞中產生具有不同3』末端的前mRNA，從而會有不同的剪接方式。由於大多數真核生物基因的轉錄物是先加poly(A)尾巴，然後再行剪接，因此不同組織、細胞中會有不同的因子干預多聚腺苷酸化作用，最後影響剪接模式。

E. 檢測蛋白質表達量的實驗方法有哪些，western-blotting的原理，方法

蛋白質印跡（免疫印跡試驗）即Western Blot物、物化免疫遺傳用種實驗其基本原理通特異性抗體凝膠電泳處理細胞或物組織品進行著色通析著色位置著色深度獲特定蛋白質所析細胞或組織表達情況信息
蛋白質印跡由瑞士米歇爾弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼爾·伯奈特（Neal Burnette）於1981所著《析物化》（Analytical Biochemistry）首稱Western Blot蛋白免疫印跡（Western Blot）電泳離細胞或組織總蛋白質凝膠轉移固相支持物NC膜或PVDF膜用特異性抗體檢測某特定抗原種蛋白質檢測技術現已廣泛應用於基蛋白水平表達研究、抗體性檢測疾病早期診斷等面

F. 如何檢測一個細胞中的蛋白質表達量

實時熒光定量PCR檢測mRNA的表達,然後westernblot檢測蛋白表達量.
首先你確定拿到了這兩種細胞系，通過PCR反應證明一個是野生型一個是突變型，即snp。然後用試劑盒提取RNA，設計引物，採用半定量或絕對定量的方法，測定mRNA表達水平；然後另取細胞裂解，提取總蛋白，用特異性抗體檢測蛋白表達量。

G. 我們可以用什麼辦法檢測食物中是否含有蛋白質

日常簡單方法可以用燒灼，因為蛋白質燒灼了以後有一股特殊的味道，就比如說頭發燒著了以後的味道就是蛋白燃燒的味道。

H. 檢測蛋白質表達除了Western blot，還有什麼方法

你能否說的詳細一點呢？你想要怎麼做？至少說，你想看的蛋白是體內的，還是外源轉染進去的質粒表達的？
如果是體內的，western是比較好的方法；如果是分泌蛋白，則可以用ELISA；如果是外源轉染進去的，則可以融合一個GFP什麼的進去，看熒光就行了。還是得看你想怎麼做，還有你的蛋白是什麼狀態的。
上面有人說RT-PCR，檢測mRNA是一種間接的途徑。如果此蛋白有轉錄後調控的機制，則mRNA的量不能反應蛋白的量。

I. 怎樣用抗原-抗體的方法檢驗目的基因是否翻譯出蛋白質原理是什麼

檢測目的基因是否進入到受體細胞的方法，一般包括分子水平檢測和個體水平檢測。其中分子檢測有3個層次：1目的基因是否整合到受體細胞染色體dna上，2目的基因是否轉錄出mrna，3目的基因是否翻譯出蛋白質。1和2都可以用dna分子雜交技術檢測，3可以用抗體-抗原的方法檢測。個體水平的檢測包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性及抗性的程度；基因工程產品需要與天然產品的功能進行活性比較等。
stern雜交──蛋白質分子（抗原—抗體）之間的雜交。它是檢測目的基因是否表達出蛋白質的一種方法。
具體做法是：
第一步，將目的基因在大腸桿菌中表達出蛋白質；
第二步，將表達出的蛋白質注射動物進行免疫，產生相應的抗體，並提取出抗體（一抗）；
第三步，從轉基因生物中提取蛋白質，走凝膠電泳；
第四步，將凝膠中的蛋白轉移到硝酸纖維素膜上；
第五步，將抗體（一抗）與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，這時抗體（一抗）與目的基因表達的蛋白（抗原）會特異結合。
由於這種抗原—抗體的結合顯示不出條帶，所以加入一種稱為二抗的抗體，它可以與一抗結合，二抗抗體上帶有特殊的標記。如果目的基因表達出了蛋白質，則結果為陽性。