菌落總數的檢測方法可以用北 京美正生物的菌落總數測試片測試，只需3步，就可實現快速准確的測定！AC的計數結果對比傳統方法，操作簡單快捷，節約時間，節約成本。
B. 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法
大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按GB
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按GB
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按GB
4789.28中4.10規定。
2.4
EC
肉湯:按GB
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按GB
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。
C. 檢測食品化驗菌落總數的實驗步驟更原理
其實菌落總數和大腸菌的測定方法、步驟都差不多，只是一個是用培養皿一個是用試管
7.1
菌落總數的計算方法
7.1.1
若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平
均值乘以相應稀釋倍數，作為每 g（mL）樣品中菌落總數結果。
7.1.2
若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按公式（1）計算：
（1）
式中：
N——樣品中菌落數；
∑C——平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和；
n1——第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數；
n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）平板個數；
。
d——稀釋因子（第一稀釋度）
若所有稀釋度的平板上菌落數均大於 300 CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可
7.1.3
記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
若所有稀釋度的平板菌落數均小於 30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計
7.1.4
算。
7.1.5
若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小於 1 乘以最低稀釋倍數計算。
若所有稀釋度的平板菌落數均不在 30 CFU～300 CFU 之間，
其中一部分小於 30 CFU 或大於 300
7.1.6
CFU 時，則以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
這里有個例子參考一下以上是<食品安全國家標准食品微生物學檢驗 菌落總數測定>中的計算方法。
E. 食品中菌落總數的測定步驟主要為
菌落總數檢測一般步驟為：
采樣 — 樣品制備與稀釋 — 倒平板 — 塗布平板 — 倒置培養 — 菌落計數 — 計算菌落總數
樣品制備，需要對樣品進行均質，根據客戶需要檢測的樣品不同。WIGGENS提供不同的均質設備，如均質機，拍打式均質器等；
樣品的稀釋，國標中採用1:10的十倍稀釋方法，SOCOREX提供各種手動精密移液器，瓶口分液器，移液管控制器為液體操作提供了保證。
倒平板，使用的培養基為含有瓊脂的固體培養基。培養基在配備的過程中需要經過煮沸和保溫的步驟。WIGGENS紅外加熱磁力攪拌器，直接使用紅外輻射方式進行加熱，1L培養基只需要10分鍾即可煮沸，極大節約了客戶培養基制備時間。在倒平板之前，需要恆溫培養基46±1 ℃， WIGGENS恆溫水浴鍋，可以為用戶提供的溫度控制和恆溫條件；
塗布平板，培養基在培養皿中冷卻成固態之後，將稀釋後的樣品用移液器取1mL,滴到培養基表面，用塗布棒塗勻。WIGGENS有專用的培養皿轉盤，可以有效的將樣品液均勻的塗布在培養基表面。
倒置培養，將塗布完畢的平板，放入恆溫培養箱中進行培養，一般培養時間約為48h。WIGGENS恆溫培養箱內容積50-140L各種規格的台式及落地式培養箱，先進的設計及數據介面，可以直接通過電腦編程式控制制及信息處理，非常適合規范化培養要求。
菌落數計算，經過48小時的培養之後，在培養基表面會長出菌斑，每個菌斑代表一個微生物。一般在培養皿中菌落數為30-300個之間，為有效菌落數。低於30個，會因為樣本量不足，隨機性大；超過300個，會因為菌落數太多，過於密集產生菌斑重疊等現象，不利於准確計數。WIGGENS菌落計數器，是帶有非閃爍式環形光源，放大鏡，壓力感測器，計數筆等，可以讓使用者輕松計數。
計算菌落總數，培養皿中的菌落數需要通過公式換算。 WIGGENS菌落計數器，配套軟體可以直接通過壓力感測器進行培養皿中菌落計數，通過軟體內嵌程序直接計算出被檢測樣品中菌落總數。
F. 國標菌落總數檢測方法3方方圓生物結果怎麼計數
菌落總數是指樣品經過處理，在一定條件下培養後所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數，是最常用的微生物檢測項目。（FilmplateTM Aerobic BB202）是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計數時間和增強計數效果。本產品適合於各類食品及食品原料中菌落總數的測定，也可用於檢測食品加工容器、操作台和其他設備表面的菌落總數。執行標准3方方圓生物：食品安全國家標准 食品微生物學檢驗菌落總數測定（GB 4789.2）。
操作方法:
1、樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質杯內，製成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內，振搖後成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2、接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數測試片（BB202）置於平坦實驗檯面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然後再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
3、培養：將測試片疊在一起放回原自封袋中並封口，透明面朝上水平置於恆溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。一般食品培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h；水產品培養溫度為30℃±1℃，培養48h。
G. 國標中檢測菌落總數使用什麼方法
平板計數法，GB4789.2--2010
H. 菌落總數的檢測
平皿計數法
菌落總數(standardplate-countbacteria):水樣在營養瓊脂上有氧條件下37℃培養48h後，所得1mL水樣所含菌落的總數。
儀器和裝置
高壓蒸汽滅菌器。
乾熱滅菌箱。
培養箱(36±1)℃。
電爐。
冰箱。
放大鏡或菌落計數器。
pH計或精密pH試劑。
滅菌試管。
平皿直徑9cm。
培養基與試劑
營養瓊脂成分蛋白腖10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、瓊脂10～20g、蒸餾水1000mL。
製法將上述成分混合後，加熱溶解，調整pH為7.4～7.6，分裝於玻璃容器中(如用含雜質較多的瓊脂時，應先過濾)，經103.43kPa(121℃)滅菌20min，貯存於冷暗處備用。
檢驗步驟
1)水樣處理。
a.飲用水。以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣，注入來菌平皿中，傾注約15mL已熔化並冷卻到45℃左右的營養瓊脂培養基，並立即旋搖平皿，使水樣與培養充分混勻。每次檢驗時應做一平行接種，同時另用一個平皿只傾注營養瓊脂培養基作為空白對照。
待冷卻凝固後，翻轉平皿，使底面向上，置於(36±1)℃培養箱內培養48h，進行菌落計數，即為1mL水樣中的菌落總數。
b.水源水。以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1∶10稀釋液。
吸取1mL1∶10的稀釋液注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1∶100稀釋液。按同法依次稀釋成1∶1000、1∶10000稀釋液等備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支1mL滅菌吸管。
用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2～3個適宜稀釋度的水樣各1mL，分別注入滅菌平皿內。以下操作同生活飲用水的檢驗步驟。
2)菌落計數及報告方法。作平皿菌落計數時，可用眼睛直接觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平皿的菌落數後，應求出同稀釋度的平均菌落數，供下一步計算時應用。在求同稀釋度的平均數時，若其中一個平皿有較大片狀菌落生長時，則不宜採用，而應以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌落不到平皿的一半，而其餘一半中菌落數分布又很均勻，則可將此半皿計數後乘2以代表全皿菌落數。然後再求該稀釋度的平均菌落數。
不同稀釋度的選擇及報告方法:
首先選擇平均菌落數在30～300者進行計算，若只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，則將該菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例1)。
若有兩個稀釋度，其生長的菌落數均在30～300之間，則視二者之比值來決定。若其比值小於2應報告兩者的平均數(如表82.2中實例2)。若大於2則報告其中稀釋度較小的菌落總數(如表82.2中實例3)。若等於2亦報告其中稀釋度較小的菌落數(見表82.2中實例4)。
若所有稀釋度的平均菌落數均大於300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例5)。
若所有稀釋度的平均菌落數均小於30，則應以按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例6)。
若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300，則應以最接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表82.2中實例7)。
若所有稀釋度的平板上均無菌落生長，則以未檢出報告之。
如果所有平板上都菌落密布，不要用「多不可計」報告，而應在稀釋度最大的平板上，任意數其中2個平板1cm2中的菌落數，除2求出每平方厘米內平均菌落數，乘以皿度面積63.6cm2，再乘其稀釋倍數作報告。
菌落計數的報告:菌落數在100以內時按實有數報告，大於100時，採用兩位有效數字;在兩位有效數字後面的數值，以四捨五入方法計算。為了縮短數字後面的零數也可用10的指數來表示(見表82.2「報告方式」欄)。
表82.2 稀釋度選擇及菌落總數(CFU)報告方式
I. 菌落總數如何檢驗啊
菌落總數的測定，一般將被檢樣品製成幾個不同的10倍遞增稀釋液，然後從每個稀釋液中分別取出1mL置於滅菌平皿中與營養瓊脂培養基混合，在一定溫度下，培養一定時間後（一般為48小時），記錄每個平皿中形成的菌落數量，依據稀釋倍數，計算出每mL（或每克）原始樣品中所含細菌菌落總數。菌落總數的測定，一般將被檢樣品製成幾個不同的10倍遞增稀釋液，然後從每個稀釋液中分別取出1mL置於滅菌平皿中與營養瓊脂培養基混合，在一定溫度下，培養一定時間後（一般為48小時），記錄每個平皿中形成的菌落數量，依據稀釋倍數，計算出每mL（或每克）原始樣品中所含細菌菌落總數。
基本操作一般包括：樣品的稀釋——傾注平皿——培養48小時——計數報告。檢驗方法可參見：GB4789.2-94 《中華人民共和國國家標准 食品衛生微生物學檢驗
菌落總數測定》，SN0168-92 《中華人民共和國進出口商品檢驗行業標准 出口食品菌落計數》。