結核菌素檢測的方法

⑴ 簡述結核菌素試驗的原理、方法和結果分析

本試驗是用結核菌素進行的皮膚IV型過敏變態反應試驗，用以判斷機體是否受到結核菌感染進行結核病流行病學調查，發現病人，協助診斷和鑒別診斷，選擇卡介苗（BCG）接種對象並考核其接種效果，藉以判斷機體細胞免疫狀態的一種常用試驗。 「抗原」有兩種即舊結核菌素簡稱舊結素（old tuberculin，OT）和結核菌純蛋白洐化物（purified protein derivative，PPD）。OT為人型結核桿菌培養二個月後，加熱殺死結核菌，將濾去死菌後含菌體自溶及培養基成分的剩餘部分濃縮至原量1/10的棕色透明液體，1952年WHO將其標准化，每ml含1000mg相當10萬TU（結素單位）。PPD是用化學方法從結核菌培養液中提取的結核菌蛋白，較OT更精純，用後不產生非特異性反應（表7-2）。「方法」有皮上、皮膚劃痕或點刺與皮內注射法，以後者應用最為廣泛，效果准確。1、 部位，選左臂屈側中部皮膚無瘢痕部位，如近期（2周內）已作過試驗，則第2次皮試應選在第一次注射部位斜上方3~4cm處，或取右前臂。2、 局部75％酒精消毒，用1.0ml注射器、4.5號針頭（針頭斜面不宜太長），吸取稀釋液0.1ml （5TU）皮內注射，使成6~8mm大小圓形皮丘。3、 注後48小時觀察一次，72小時判讀結果，測量注射局部紅腫處的硬結橫與縱徑，取其均值為硬結直徑。＜5mm為陽性，5~9mm為弱陽性（+），10~19mm為陽性（+ +），≥20mm或局部出現水泡、壞死或有淋巴炎，均為強陽性（+ + +）。「意義」陽性：①示機體受到結核桿菌感染，且已產生變態反應；②城市居民，成人絕大多數為陽性，一般意義不大；如用高倍稀釋液（1/10000）1TU皮試呈強陽性，提示體內有活動性結核病灶；③3歲以下兒童，呈陽性反應（+ +），不論有無臨床症狀，均現為有新近感染的活動性結核，應予治療。陽性：提示①機體未受到結核菌感染，或雖已感染但機體變態反應尚未建立（4~8周內）；如一周後，再用5TU重新皮試，利用結素的復強作用，若仍為陽性，則可除外結核菌感染。此外見於：②高齡，一般60歲以上20％、70歲以上30％、80歲以上50％為陰性；③兒童患麻疹、百日咳後，變態反應被抑制，大約3周後可漸恢復；④重症結核病，當經過治療隨病情好轉，結素反應可復陽；⑤結節病（陽性率僅10％，且多為弱陽性）、淋巴瘤與其他惡性腫瘤患者；⑥接受糖皮質激素或免疫抑制劑治療者；⑦營養不良和AIDS（acquired immune deficiency syndrome）患者。「注意事項」1、 已配製稀釋液置有色瓶內。避免日光直射、4℃可保存2周。2、 玻璃及塑料對結素有明顯吸附作用，抽取後務於1小時內用完，否則效價降低影響效果。3、 結素試驗後可能會出現一些異常反應，應予妥善處理。局部：出現水泡、潰瘍，應保持清潔，塗2％甲紫，必要時可用注射器將水泡液抽除。全身：①發熱，多屬熱原反應與器具消毒不嚴有關，一般於數小時內可恢復；②厥與休克，多與精神緊張、恐懼有關，可囑其平卧、保溫，必要時皮下注射0.1％腎上腺素0.5~1.0ml；③病灶反應，注後數小時肺部病灶周圍毛細血管擴張，通透性增加，侵潤滲出，形成變態反應性病灶周圍炎，一般不必特殊處理，2~5天可自行消退。4、有下列情況暫不宜作結素試驗 發熱，體溫37.5℃以上；傳染病恢復期，器質性心臟病、肝腎血管疾病、精神病、癲癇、細胞免疫功能缺陷、丙種球蛋白缺乏和月經期。

⑵ 結核菌素試驗的實驗步驟

基於Ⅳ型變態反應（見變態反應）原理的一種皮膚試驗，用來檢測機體有無感染過結核桿菌。凡感染過結核桿菌的機體，會產生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力。當再次遇到少量的結核桿菌或結核菌素時，致敏T淋巴細胞受相同抗原再次刺激會釋放出多種可溶性淋巴因子，導致血管通透性增加，巨噬細胞在局部集聚，導致浸潤。約在48～72小時內，局部出現紅腫硬節的陽性反應。若受試者未感染過結核桿菌，則注射局部無變態反應發生。
結核菌素是結核桿菌的菌體成分，有兩種，舊結核菌素（old tuberculin，OT）是柯赫（R.Koch）首先發明的。而純蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）則是由塞伯爾（Seibert）首先制備的。結核菌素試驗方法很多，常用的是芒圖（Mantoux）氏法，即將OT或PPD用無菌生理鹽水稀釋成不同濃度，取0.1毫升注射於左前臂掌側前1/3中央皮內（注意：左手），72（48h～96h）小時檢查反應情況，應注意局部有無硬節，不可單獨以紅暈為標准。若注射部位有針眼大的紅點或稍有紅腫，硬節直徑小於0.5厘米，則為陰性反應。若注射部位硬節直徑超過0.5厘米，但在1.5厘米以下，為陽性反應。若注射部位反應較強烈或硬節直徑超過1.5厘米以上，為強陽性反應。陽性反應表明機體對結核桿菌有變態反應，過去曾感染過結核，但不表示有病，因接種過卡介苗的人也呈陽性反應。強陽性反應則表明可能有活動性感染，應進一步檢查是否有結核病。陰性反應表明無結核菌感染，但應考慮以下情況：如受試者處於原發感染早期，尚未產生變態反應，或正患嚴重結核病，機體已喪失反應能力，或受試者正患其他傳染病，在此類情況下，均可暫時出現陰性反應。結核菌素試驗可為接種卡介苗及測定免疫效果提供依據。若結核菌素試驗陰性者應接種卡介苗，接種後若反應轉為陽性，即表示接種已產生免疫效果。結核菌素試驗還可作為嬰幼兒結核病診斷的參考，測定腫瘤患者的非特異性細胞免疫功能及在未接觸過卡介苗的人群中調查結核病的流行情況。

⑶ 結核菌素試驗的程序

標准劑量是5結核菌素單位（0.1毫升） ，進行皮內注射，並在48至72小時後觀察結果。一個曾經暴露在病菌的人會顯示出免疫反應。
這個測試的結果通過硬結（明顯突起的硬化區）的直徑（垂直於手臂）來反映。如果不存在任何硬結，結果應記錄為0mm。皮膚的紅斑不應加以測量。
如果一個人有陽性的測試史，其他的測試是不需要的。

⑷ 如何查結核素

結核菌素,是用結核菌的培養液製成的一種試劑,主要成份是結核菌的新陳代謝產物.應用免疫反應的原理：對受結核菌感染或者曾接受卡介苗預防接種的機體產生特異的免疫反應.從而判斷機體是否受過結核菌感染,或者判斷卡介苗預防接種的效果.這種結核菌素的試驗在肺結核或懷疑其他臟器的結核感染的診斷以及衛生防疫的結核病防治工作中是常用的.
現在我們常用的結核菌素有二種：舊結核菌素（OT）和結核菌素的純蛋白衍化物（PPD）.
1,舊結核菌素,簡稱為舊結素（OT）是德國科學家柯赫最初採用的方法製取的結核菌素.有二個劑型：⑴舊結素原液：它每毫升含10萬個結素單位.可以稀釋成不同的濃度,對可疑結核病患者進行測試,作為一種輔助的診斷方法之一.舊結素原液在專門的結核病防治醫院應用比較多.⑵稀釋的舊結核菌素；它是由專門的生物製品製造單位將舊結素稀釋成安瓿劑,一般濃度為1：2000每支2毫升.這個劑型在結核病防治機構應用較多,主要應用於兒童進行卡介苗接種時,篩選接種對象：試驗陽性的說明曾經受過結核菌感染,體內已經存在這種免疫反應,或者已經接受過卡介苗的接種體內已存在免疫反應,無需再行卡介苗的接種.
2,結核菌素的純蛋白衍生物（PPD）.使用這種試劑應嚴格按說明書應用,目前主要應用於結核病的流行病學調查和結核病的科學研究,在醫療機構的臨床應用也在逐步開展.下面介紹一下結核菌素試驗的操作方法.
試驗的試劑：舊結核菌素1：2000的稀釋液（它每毫升含50個結素單位）注射部位：被測試者的左（或右）腕關節以上前臂選擇血管少無疤痕的部位,皮膚消毒後注射.
注射方法：採用皮內注射法,切忌注入皮下,甚至肌肉,血管內.
注射劑量：用蘭芯針筒看準刻度緩緩注入0.1毫升,成皮丘,可以看見小圓形凸起的小白泡,大約在8毫米左右直徑大小.接種後處理：注射完畢以後,退出針尖皮膚消毒,並做好各項登記,登記的內容為：姓名,年齡,性別,接種日期,被接種兒童家長姓名,接種部位,注射劑量（含接種試劑的濃度）,試劑的製造廠商批號等等,以及接種者單位姓名,觀察反應的日期和時間.
進行結核菌素試驗應注意的事項：
1,首先應該有組織,有秩序地進行（指集體試驗時）建立好登記卡簿,對接受測試的對象進行詳細登記,以備今後查驗用.
2,對結核菌素的試劑進行查驗是否合格：試劑安瓿上的品名,濃度,批號,有效期,再看看安瓿有否裂縫,內裝結核菌素有否混濁,沉澱物,甚至雜質.
3,詳細閱讀結核菌素的使用說明書,對有試驗禁忌症的兒童一律不予測試.
4,試驗必須在室內進行,不要在日光直射下進行,因為：⑴結核菌素受陽光直接照射以後會降低效價,試驗後可能出現假陰性反應.⑵陽光照射下測試,皮膚會增加敏感性也可能出現假陽性反應.
5,操作人員必需以高度認真負責的精神對待此項工作,任何失誤會造成測試結果的偏差,如果在無菌操作上不認真,篩選測試對象不認真,那麼可能造成的後果將會很嚴重.
6,順便提一下結核菌素試驗的結核菌素和卡介苗預防接種的疫苗千萬不能搞錯,存放時絕不能混在一起,必須嚴格分開.

⑸ 怎麼檢查體內結核菌

病情分析：
常用的檢查體內是否存在或提示感染過結核菌的方法是結核菌素試驗
指導意見：
因為結核菌素試驗的結果不能完全提示是否有結核感染，目前常用的方法是做結核抗體試驗和結核探針DNA檢測。如果懷疑是肺結核還可做X線檢查和痰液查找結核菌檢查

⑹ 試述結核菌素實驗的方法，結果及意義

原理：
結核菌素皮膚反應是遲發型細胞超敏反應。它是抗原（結核菌或卡介苗）進入機體使機體的免疫T淋巴細胞致敏，並大量分化增殖。
當已致敏的機體再次遭受到抗原入侵時，致敏淋巴細胞就會與之結合，引起變態反應性炎症。表現在結核菌素注射部位形成硬結甚至發生水泡、壞死。
結素試驗陽性表明機體曾經受到結核菌感染或接種過卡介苗，也表示機體對結核菌有一定免疫力。但也有少數免疫力低下的人（約5%）呈陰性或因技術原因而呈現假陰性。通常接種卡介苗後，若PPD皮試陰性，說明接種失敗。
結核的免疫特點為「免疫、感染、超敏反應」共存。
判斷：
通常在前臂掌側皮內注射5IU的PPD，經48-72小時檢查局部反應，凡硬結直徑平均〉5㎜為陽性；6-10㎜為+；11-20㎜為++；＞20㎜為+++；局部發生水泡為++++。
意義：
（一）陰性反應
未受結核桿菌感染，或免疫反應窗口期。
（二）陽性反應
說明已受結核桿菌感染，可能有以下幾種情況：
1、結核病患者，但不能作為確診依據；
2、卡介苗接種後，免疫反應已建立；
3、3歲以內未種卡介苗者，提示體內存在結核病灶；
4、非結核分枝桿菌交叉反應。
（三）強陽性反應
1、有助於確診結核病；
2、已感染，未發病者；
3、強陽性人群結核病發病率高，在未找到病變時，可以實施預防性治療；
4、強陽性伴有肺部病灶時，則有利於結核病的診斷。但肺部無病灶時，說明機體處於結核菌敏感狀態。

⑺ 確診結核的方法

痰液塗片染色找到抗酸桿菌或痰液培養出結核桿菌。

⑻ 結核桿菌用什麼方法檢測

結核桿菌培養特性 1. 液體培養基（蘇通氏培養基、小川培養基、血清酸性培養基等）結核桿菌生長表現：標本材料經前處理（即酸鹼處理，可液化標本，也可殺死雜菌，還可濃縮集菌）後接種液體培養基，35℃培養1-2周，由於表面生物，可在培養基表面表成污灰、乾燥、有皺褶的菌膜。 2. 固體培養基（改良羅氏培養基、丙酮酸鈉培養基等）結核桿菌生長表現：標本材料經前處理後，接種固體培養基，37℃培養2-4周，在培養基表面可形成乳白或米黃色、不透明、粗糙顆粒狀或節狀堆聚的菌落，呈現「菜花狀」。 3. 結核桿菌快速培養檢測方法：無菌手續將前處理後的材料塗片，置液體培養基中，35℃恆溫箱CO2培養箱內培養，3-5日後，每隔日取出一玻片，染色鏡檢，可快速獲得結果。 詳細的檢測方法生物幫上面有的，蛋白質互作 http://www.bio1000.com/zt/protein/232119.html

⑼ 結核菌素試驗的判斷方法

我國規定以72小時為觀察反應時間，48-96小時內皆可測量反應，記錄方法是將測得的硬結橫徑毫米數×縱徑毫米數表示，如有水泡、硬結、壞死和淋巴結炎時，應作記錄。 硬結平均直徑在5mm或5mm以上者為陽性，5-9mm為一般陽性，10-19mm為中度陽性，20mm以上局部有水泡，出血、壞死及淋巴管炎者均為強陽性。

⑽ 結核菌素的試驗方法有哪些

結核菌素試驗方法有皮內注射法，皮上劃痕法，皮上貼膏法等。

皮內注射法是臨床上最常用的一種方法。

（1）皮內注射法：臨床上用此方法，如同做青黴素皮試一樣，將舊結核菌素稀釋液（1 ∶ 1000 或1 ∶ 2000）1ml，注射於左前臂掌側下1/3，於48 ～ 72 小時看結果，局部出現紅暈且有硬結，直徑超過5mm 以上者為陽性結果。如懷疑有嚴重活動性肺結核者，宜用1 ∶ 10000 稀釋液，以防局部的過度反應以及可能的病灶反應。注射後48 ～ 72 小時看結果，陰性者用高一級濃度再試，直到1 ∶ 100稀釋液為止。

（2）皮上劃痕法：與上述相同部位滴舊結核菌素原液1 滴，然後，以消毒的針劃破表皮，劃痕不超過5mm，若劃2 或3 條以上時，劃痕間應有1cm 的距離，以有淋巴液滲出為度，但勿使出血，48 ～ 72小時看結果，沿線出現紅腫達3mm 以上者為陽性。此種方法，因陽性率低，故不常用。

（3）敷貼試驗法：將定量的結核菌素或純蛋白衍生物（PPD），浸在1cm2 的布上，敷貼在前臂掌面1/3 處，上蓋塑料薄膜固定，48小時後除去敷布，再隔48 小時看結果，陽性者局部可有3 ～ 4 個丘疹或小水泡，主要用於嬰幼兒。