HIV使用DNA檢測方法

Ⅰ 艾滋病檢測方法

一般查抗體，結果陰就表示沒事，陽表示感染，其他數據不用關心，確診了的感染者才查CD4 CD8這些的。

Ⅱ HIV的檢測步驟有哪些

艾滋病檢測種類：血液試紙和唾液試紙兩大類。
目前市場上的艾滋病試紙種類主要分為兩大類，其中血液試紙主要包括雅培hiv試紙、愛康hiv試紙等。而唾液艾滋病試紙的種類就顯得比較單調，其中使用最廣泛的就是美國艾衛艾滋病檢測試紙，深受很多的高危人群及恐艾症患者的青睞。

專家指出，自從第一例艾滋病毒被確診以後，全球對於艾滋病毒的研究已經有30多年的歷史，而在這些年中也確實取得了十分重大的突破，其中艾滋病試紙研發問世，其所提倡的艾滋病自測就為艾滋病毒的預防奠定了嶄新的里程碑。據本站筆者了解得知，艾滋病試紙是一種使用膠體金免疫層析科技研發的新一代檢測試劑，可檢測血清或血漿標本中的HIV-1/2特有性抗體，從而准確的判斷出患者體內是否含有艾滋病毒，進而了解該患者是否是艾滋病毒感染者。
艾滋病檢測試紙優勢多，不同艾滋病試紙准確率達99.99%
不同的艾滋病試紙在不同的情況下使用起來具有更高的准確性和方便性。但是這幾種常見的HIV檢測試紙使用起來主要有以下幾個方面的優勢：所有操作時間15分鍾，所有的檢測操作過程簡便、出檢測結果十分迅速又准確、而且全部都是自帶質控對照，檢測過程中還不需要使用附加葯劑。值得一提的是，自己在家就能夠獨立完成所有的檢測過程，並不再像過去那樣一定要到專業的疾控中心檢測，這樣不但減輕了疑似感染者的心理折磨，而且還出檢測結果快速高效，為感染者及時治療爭取了更多有利的時間。
據悉，要想准確知道檢測結果，還需要注意的一個問題就是艾滋病檢測的最佳時間，而國際上規定以高危發生的日期開始計算，2周後即可檢測艾滋病病毒，以6周以後為准。而且如果在檢測過程中要想更加准確了解結果，最好是一次性使用多種不同品牌的艾滋病試紙，注意准確率更高，幾乎是100%。

Ⅲ 艾滋病檢測用什麼方法最好

如果你是在窗口期一周左右，強烈推薦你去上海維斯塔做核酸檢測。前提是你要有錢，核酸檢測的成本比較高的，大約要1000元左右。如果你高危2個月了，建議你上網買個試紙在家測試下好了，大約150元左右。

Ⅳ DNA檢測的方法都有哪些

DNA檢測
技術有很多，主要分為定性和定量方法。給你舉幾個：1，分子雜交技術，（包括southern雜交，northern雜交，基因晶元等）分子雜交分析的基本原理是基於DNA探針檢測變性而且固定在硝酸纖維素膜上的宿主細胞DNA。這些探針可以不依賴宿主細胞DNA來制備，例如用隨機引物制備探針。探針上標記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由於地高辛標記核酸探針，操作方便、靈敏度高，已標記的探針在4℃貯存可達兩年之久，方便隨時應用，所以現在常採用地高辛標記核酸探針，用游標記法將光敏Dig標記到探針上，製成光敏-Dig-核酸探針，再與固定在硝酸膜上的靶核酸進行靶DNA分子雜交，使之與抗Dig-鹼性磷酸酶結合，最後可用不同的檢測方式進行檢測，
發光檢測
和顯色檢測均可，靈敏度可達10pg以下2，基於DNA結合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系統是基於兩種DNA序列非特異性蛋白，單鏈DNA（ssDNA）結合蛋白（SSB）和抗ssDNA
的單抗。檢測的基本過程是當生物素—DNA單鏈結合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的單抗與變性的宿主細胞DNA結合最終形成復合物，通過親合素將此復合物連接到生物素—硝酸纖維素膜，在通過洗滌所有非特異性的被洗脫掉，最後放於有
尿素溶液
的讀數儀，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
導致PH值發生變化，讀數儀根據PH值的變化換算成DNA的量，從而達到檢測殘余DNA含量的目的。3，PCR法，其中以實時定量PCR法最為突出熒光定量
PCR是基於PCR擴增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產物的增加可以通過熒光信號指示，通過實時監控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進行定量分析。定量PCR可實時檢測產物量，通過加入已知濃度的
標准樣品
繪制標准曲線，然後根據待測樣品在標准曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達到檢測殘余DNA含量的目的。此外，對DNA的定量技術也有很多，可以看下這篇文章《核酸定量技術及其在生物檢測中的應用》

Ⅳ 常用的艾滋病檢測方法有哪些

常用的艾滋病檢測有：

1. 抗體檢測：HIV-1/HIV-2抗體檢測是HIV 檢測的金標准。經篩查試驗（初篩和復檢）確證試驗兩步。初篩實驗室主要是採用酶聯免疫試驗、化學發光法或免疫熒光法試驗。確認實驗室進行復檢主要是檢測血清gp24及gp120抗體，靈敏度達99%，抗體初篩檢測結果還要用免疫蛋白印跡法檢測確認即確認試驗。

2. 抗原檢測：抗HIVp24抗原單克隆抗體制備試劑，用酶聯免疫法測血清HIVp24抗原。有助於抗體產生窗口期和新生兒早期感染的診斷。

3. 病毒載量測定：病毒載量的測定可了解疾病進展，提供病毒治療依據、評估治療效果、指導治療方案調整以及為早期診斷提供參考。可用熒光定量PCR擴增技術。
   

Ⅵ 艾滋病檢測試紙用的什麼檢測方法

艾滋病檢測試紙的原理是： 艾滋病檢測試紙條是使用膠體金免疫層析科技研發的新一代檢測試劑，可檢測血清或血漿標本中的HIV-1/2特有性抗體。所有操作時間約是15分鍾，動作簡便、迅速、准確、自帶質控對照、無需所有附加葯劑。適合於臨床檢驗、無償獻血現場篩查等。
抗體檢測
抗體檢測
血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
確證試劑
篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由於該法相對窗口期較長，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。
FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對簡單，整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果，而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准，但不作為血液合格的標准。
篩檢試驗
篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查，因此要求操作簡便，成本低廉，而且靈敏、特異。2012年，世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡單，僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用，特別適合於試驗室大規模篩檢使用。
顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便，成本低廉的檢測方法，該方法結果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用，缺點是必須使用新鮮樣品，特異性較差。
80年代後期發展起來的斑點印跡檢測（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡便，過程短暫，整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。
人類免疫缺陷病毒抗體口腔粘膜滲出液檢測試劑盒（膠體金法）就屬於側向免疫層析法（金免疫）類別，基於免疫層析技術通過手工操作、肉眼讀取結果、20分鍾即可定性得出檢測結果的快速診斷試劑，用於檢測口腔粘膜滲出液樣本中的HIV-1型和HIV-2型抗體。可用於自願咨詢檢測、不願采血、暈針患者的初篩。該方法適用於初篩檢測，凡由該試劑測定為陽性者，需進行進一步篩查確認。[3]
【HIV陰性】說明從人體內檢測不到HIV抗體，陰性符號以（-）表示。不能說沒有感染HIV, 要看是什麼時候檢測的，在窗口期內，感染者的體內還沒有產生HIV抗體，或還沒有產生足量的HIV抗體，這時HIV檢測是陰性結果，如果在窗口期之後檢測的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV陽性】說明從人體內檢測到了HIV抗體，陽性符號以（+）表示。
【檢測結果不定因素】
感染還處於窗口期：從HIV進入體內到檢測這段時間還不夠長，因此血清還沒有形成典型的抗體反應
艾滋病進展到終末期，抗體水平下降
其他非病毒蛋白抗體的交叉反應：自身免疫性疾病、某些惡性疾病、懷孕、輸血或器官移植等情況下，身體可以產生一些抗體，其反應與HIVP24核心蛋白抗體引起的反應很相似

抗原檢測
病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大，且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄－PCR)可用於臨床診斷。HIV-1P24抗原檢測可用於HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性，但HIV-1抗體確認陰性者的輔助診斷。P24抗原檢測一般用ELISA雙抗體夾心法試劑，試劑必須經過SDA批准注冊、在有效期內，其陽性結果必須依據試劑說明書經中和試驗確認。HIV-1P24抗原檢測的敏感性為30-90%，該結果僅作為HIV感染的輔助診斷依據，不能據此確診；HIV-1 P24抗原檢測陰性只表示在本試驗中無反應，不能排除HIV感染，臨床中一般不作為常規診斷項目。

核酸檢測
HIV核酸檢測可用於HIV感染的輔助診斷、病程監控、指導治療方案及療效判定、預測疾病進展等。常用的HIV病毒載量檢測方法包括逆轉錄PCR實驗（RT-PCR）、核酸序列擴增實驗（NASBA）、分支DNA雜交實驗（bDNA）以及實時熒光定量PCR技術。值得注意的是，每一種HIVRNA定量系統都有其最低檢測限，即可以測出的最低拷貝數或國際單位，RNA定量檢測時未測出不等於樣品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性檢測陰性，只可報告本次實驗結果陰性，但不能排除HIV感染；HIV核酸檢測陽性，可作為診斷HIV感染的輔助指標，不能單獨用於HIV感染的診斷。報告HIV核酸定量檢測結果時應按照儀器讀數報告結果，註明使用的實驗方法、樣品種類和樣品量，當測定結果小於最低檢測限時，應註明最低檢測限水平。
HIV核酸定性檢測也可用於HIV感染的輔助診斷，在分析HIV基因亞型和變異等基礎研究中應用。通常使用PCR或RT-PCR技術，使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑，引物可來自文獻或自行設計，應盡量覆蓋所有或常見的毒株，也可使用復合引物。報告定性檢測結果時應註明反應條件和所使用的引物序列。此外，利用核酸檢測方法的高度敏感性，使用集合核酸擴增檢測技術和方法，對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測，可及時發現窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。aware天貓

Ⅶ 艾滋病的檢測都有哪些方法 5種方法測出你有沒有艾滋

檢測不出來的，必須說明是查艾滋的，才可以的

Ⅷ HIV的DNA檢測

一般說12周可排除100%，8周可排除99%了，再保險些半年後再檢查一次即可絕對排除了

Ⅸ 在醫院檢測艾滋病，用的什麼方法，是快速檢測法嗎

測血，DNA探針

Ⅹ HIV核酸檢測的HIV核酸檢測方法及程序

1.1 方法和試劑
1.1.1 方法
（1）檢測方法為商品化試劑盒和實驗室自建方法，商品化試劑應嚴格按說明書操作。下面介紹的方法是實驗室自建方法，供參考。
（2）檢測血漿或血清樣品使用逆轉錄PCR（RT-PCR）方法，建議第一輪PCR擴增使用RT-PCR一步法；檢測血細胞或組織樣品使用PCR方法。一般使用擴增兩輪的套式PCR方法。
（3）設立陽性、陰性及空白對照。陽性對照為與待測樣品同質、含有目的基因的樣品；陰性對照為與待測樣品同質、不含有目的基因的樣品。陽性和陰性對照樣品應與待檢樣品處理程序一致。陰性對照的設置數量應根據實驗樣品的數量設置在不同的位置。
1.1.2 試劑
（1）PCR引物：一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計，應盡量涵蓋常見的HIV流行毒株，也可使用兼並性引物。
（2）主要試劑：包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR擴增試劑。
（3）抗污染試劑：實驗室自建檢測方法可使用抗污染試劑，參考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。
1.2 擴增目的基因片段
1.2.1 樣品的採集和處理
1.2.2 核酸提取
可使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
1.2.3 逆轉錄合成cDNA
使用商品化試劑並按說明書操作。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
1.2.4 PCR擴增反應
使用商品化試劑按說明書操作。PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。一般使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
1.3 擴增產物分析及結果報告
1.3.1 擴增產物分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
1.3.2 結果判定和報告
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：使用商品化檢測試劑，發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後7個工作日內發出檢測報告。 2.1 方法
HIV核酸定量檢測主要基於靶核酸擴增RT-PCR和信號放大擴增兩種方法。國內常用的方法中，NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1採用國際單位（IU/ml），與NASBA的拷貝數關系基本為1:1；Amplicor Cobas 的拷貝數約為1.2～1.5國際單位；bDNA方法的拷貝數約為0.8～1.0國際單位。不同方法的關系與HIV的亞型有關。
2.2 試劑
必須使用經中國葯品生物製品監督管理局注冊批準的商品化試劑並嚴格按說明書操作。
2.2.1 靶核酸擴增試劑和性能
（1）RT-PCR擴增試劑
1）Amplicor HIV-1 Monitor v1.5（RT-PCR微孔板捕獲比色分析法），核酸手工提取（異丙醇沉澱），比色分析測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400～750，000；超敏法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
2）COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取（異丙醇沉澱），儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400～750，000；超敏法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
3）COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 （COBAS Amplicor 分析儀）,儀器提取核酸，儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准方法的檢測線性范圍是400～1，000，000；超敏方法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
以上三種試劑均採用基於PCR擴增靶核酸檢測法，僅在設備的使用、自動化程度和樣品制備的方法有所不同。
4）COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test（實時熒光探針RT-PCR分析法）, 儀器提取核酸,實時熒光探針PCR擴增儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。檢測線性范圍是40～10，000，000 RNA拷貝/毫升，比上述三種方法的檢測線性范圍要寬，樣品可不經稀釋一次完成檢測。
以上四種試劑均使用一個內部定量標准品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。均使用dUTP/UNG防污染試劑。
5）LCx HIV RNA Quantitative Assay（競爭性RT-PCR微顆粒酶免疫分析法）,手工或儀器提取核酸（活化硅膠柱純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，可擴增HIV-1基因M組的A-G亞型和0組病毒，尤其可檢測M組C基因亞型和一些重組病毒。檢測線性范圍是50～1，000，000 RNA 拷貝/毫升；使用一個內部定量標准品和六個外部定量標准品。
6）RealTime HIV-1 Assay（實時熒光探針RT-PCR分析法）,使用獨特的雙鏈熒光探針。手工或儀器提取核酸（磁性顆粒純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型和0組以及N組病毒。檢測線性范圍是40～1，000，000 RNA 拷貝/毫升。使用一個內部定量標准品。檢測結果與LCx HIV RNA Quantitative Assay結果高度相關。
（2）基於核酸序列擴增試劑（NASBA擴增技術）：以等溫方式直接擴增HIV-1 RNA。
NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1（實時熒光探針分析法）, 使用熒游標記的分子信標探針技術檢測擴增子。手工或儀器提取核酸（硅膠純化，異丙醇沉澱）,儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型。檢測線性范圍是50～3，000，000 RNA 國際單位/毫升；使用一個內部定量標准品，沒有陰陽性外部外部質控品。每次檢測8的整數倍樣品，直至48個。檢測結果與Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的結果有著高度的相關性。國際上已經推薦使用V2.0試劑盒。
2.2.2 信號放大擴增試劑和性能
Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA（分枝狀DNA探針雜交微孔板捕獲比色分析法）, 利用分枝狀DNA多級信號放大原理。無需RNA純化和PCR擴增步驟。離心濃縮病毒子並用去垢劑和蛋白酶K消化病毒釋放病毒RNA，儀器測定。擴增靶核酸位置是pol基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-H亞型，檢測線性范圍是50～500，000 RNA 拷貝/毫升；使用六個外部定量標准品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。每次可檢測12的整數倍樣品。
以上試劑均可使用EDTA和ACD作為樣品的抗凝劑，NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA試劑還可以使用肝素作為抗凝劑。如果必須使用經肝素處理的血漿樣品進行RT-PCR擴增，則必須在樣品中直接加肝素酶消化肝素。
2.2.3 實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值）。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
實時熒光定量PCR擴增的實驗檢測過程可分為：（1）樣品制備,抽提和濃縮目標RNA分子，並除去可能存在的抑制因子。（2）Real-time PCR，檢測PCR的產物使用熒游標記的寡核苷酸探針。檢測的原理基於熒光信號增長曲線與循環數相關。（3）RT-PCR反應，病毒RNA利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA，然後通過DNA聚合酶對特定片段進行擴增。（4）擴增產物的檢測，基於檢測閾值的設定，當病毒載量高時，低循環數即能檢測到熒光信號，當病毒載量低時，高循環數時才能檢測到熒光。循環數與樣品載量成線性關系。利用標准品製作循環數與載量的標准曲線就能對樣品載量進行定量檢測。 使用集合核酸擴增檢測技術和方法，利用核酸檢測方法的高度敏感性，對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測，可及時發現窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。
3.1 樣品集合程序
3.1.1 根據預處理樣品量，計算預形成一級和二級集合數量，在登記表格上記錄一級和二級集合及對應的原始樣品編號。
3.1.2 吸取130mL樣品，移入標記二級集合的離心管中；10份樣品形成一個1300mL的二級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.3 從5個二級集合管中分別吸取210mL樣品，移入標記有一級集合的離心管中，形成由50份樣品1050mL體積組成的一級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.4 從每個一、二級集合管中吸取500mL集合樣品，分裝至另一相應標記的離心管，用超敏感核酸檢測試劑進行檢測。
3.1.5 制備陰性集合外部質控品：使用50份HIV抗體和核酸陰性樣品，按上述步驟，分別集合成5個陰性二級集合外部質控品和1個一級集合外部質控品。
3.1.6 制備陽性集合外部質控品：從9份HIV抗體和核酸陰性樣品和一份至少含有HIV RNA10c/ml陽性樣品中，分別移取130mL加入離心管中，形成一個1300mL的陽性二級集合外部質控品。再分別從4個已制備好的陰性二級集合外部質控品和上述陽性二級集合外部質控品中，移取210mL至標記為一級陽性集合外部質控品的離心管中，形成一級陽性集合外部質控品。
3.1.7 一級和二級陰、陽性集合外部質控品分別用於RT-PCR中每一輪一級和二級集合樣品的檢測。
3.2 集合樣品的檢測和分解路線
使用商品化核酸檢測試劑，應嚴格按照試劑說明書操作。按照各商品化核酸試劑集合PCR的方案進行檢測，集合樣品的數量根據各試劑方案操作。方法簡述如下：
3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對一級集合樣品進行檢測，陽性反應的一級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對所有組成陽性一級集合的二級集合樣品進行檢測，陽性反應的二級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.3 用HIV RNA RT-PCR標准檢測方法檢測所有組成陽性二級集合樣品的的10份單個樣品，確定核酸陽性的單個樣品。 HIV感染產婦所生嬰幼兒在出生後18個月內可應用HIV核酸（DNA或RNA）檢測進行早期HIV感染診斷。盡管HIV RNA檢測敏感性在感染早期較高（出生後1個月內），但是HIV DNA檢測不受母親圍產期抗逆轉錄病毒治療和人乳汁中抗逆轉錄病毒葯物以及嬰幼兒預防性抗逆轉錄病毒治療的干擾而影響早期診斷。另外，考慮母親血液污染因素，不推薦使用臍帶血進行HIV核酸檢測。嬰幼兒的抗體檢測流程和結果判斷見第二章（HIV抗體檢測）。
4.1 適用范圍
未滿18個月的HIV感染產婦所生嬰幼兒；未滿18個月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態不詳，兒童出現HIV相關臨床表現，臨床懷疑HIV感染者。
4.2 檢測程序及結果報告
4.2.1 於嬰兒出生後6周（42天）採集第一份血樣本（血樣本可制備成DBS或EDTA抗凝全血），送檢。
4.2.2 若第一份血樣本檢測呈陽性反應，盡快再次採集第二份血樣本進行檢測。若兩份血樣本檢測均呈陽性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」，診斷兒童HIV感染。及時對HIV感染兒童進行追蹤和病情監測，將其轉介到兒童抗病毒治療醫療服務機構，並為其提供機會性感染預防等服務措施；若第二份血樣本檢測呈陰性反應，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。若第一份血樣本檢測呈陰性反應，繼續提供兒童保健和隨訪服務，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。
4.2.3 若嬰兒滿3個月再次檢測呈陰性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」，按照未感染兒童處理，繼續提供兒童保健隨訪服務；於兒童滿12個月時，按照「HIV感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」（圖4），開始HIV抗體檢測，最終確定兒童感染狀態。若嬰兒滿3個月再次檢測呈陽性反應，盡快再次採集血樣本進行檢測。第三份血樣本檢測呈陽性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」；若第三份血樣本檢測呈陰性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」；分別按照前述流程提供相應服務。
4.2.4 不同時間「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測均呈陰性反應的喂哺母乳的兒童，應在完全停止喂哺母乳後的6周和3個月（若6周時檢測結果為陽性可盡快）再次采血進行核酸定性檢測，進行早期診斷。兒童滿18個月後則可直接進行抗體檢測。
4.2.5 如果嬰兒第一次采血時已滿3個月，但未滿12個月，則應盡快在不同時間採集兩份血樣本；同時將兩份血樣本送檢，按照前述流程進行檢測。如果兒童第一次采血時已滿12個月，則應首先按照「艾滋病感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」（ 圖4）進行HIV抗體檢測。若兩種不同原理或廠家生產的HIV抗體檢測試劑檢測結果均為陰性，則排除兒童感染；若HIV抗體檢測試劑檢測結果呈陽性反應，不能通過抗體檢測確定兒童感染狀態，則可在不同時間採集兩份血樣本，按照前述流程進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。如果兒童第一次采血時已滿18個月，則應按照HIV抗體檢測流程（圖1）進行HIV抗體檢測，無需進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。