松材線蟲分子的檢測方法

❶ 在野外如何識別松材線蟲病，該病害在普查和調運檢疫中的取樣和鑒定方法

野外識別是看是否出現松樹枯死、針葉褪色、黃化、枯萎以及呈紅褐色等松針變色症狀等異常情況。取樣鑒定是否發生松材線蟲病。

取樣方法和鑒定方法具體參照最新《松材線蟲病防治技術方案》指導：

（三）取樣。

1.取樣對象。抽取尚未完全枯死或者剛枯死的松樹，不應當抽取針葉已全部脫落、材質已腐朽的枯死樹。可參照以下特徵選擇取樣松樹：

——針葉呈現紅褐色、黃褐色的松樹；

——整株萎蔫、枯死或者部分枝條萎蔫、枯死，但針葉下垂、不脫落的松樹；

——樹幹部有松褐天牛等媒介昆蟲的產卵刻槽、侵入孔的松樹；

——樹幹部松脂滲出少或者無松脂滲出的松樹。

2.取樣部位。一般在樹干下部（胸高處）、上部（主幹與主側枝交界處）、中部（上、下部之間）3個部位取樣。其中，對於僅部分枝條表現症狀的，在樹幹上部和死亡枝條上取樣。對於樹干內發現媒介昆蟲蟲蛹的，優先在蛹室周圍取樣。

3.取樣方法。在取樣部位剝凈樹皮，用砍刀或者斧頭直接砍取100-200克木片；或者剝凈樹皮，從木質部表面至髓心鑽取100-200克木屑；或者將枯死松樹伐倒，在取樣部位分別截取2厘米厚的圓盤。所取樣品應當及時貼上標簽，標明樣品號、取樣地點（需標明地理坐標）、樹種、樹齡、取樣部位、取樣時間和取樣人等信息。

4.取樣數量。對需調查疫情發生情況的小班進行取樣時，總數10株以下的要全部取樣；總數10株以上的先抽取10株進行取樣檢測，如沒有檢測到松材線蟲，應當繼續取樣檢測，直至全部取樣檢測為止。

5.樣品的保存與處理。採集的樣品應當及時分離鑒定，樣品分離鑒定後須及時銷毀。樣品若需短期保存，可將樣品裝入塑料袋內，扎緊袋口，在袋上扎若干小孔（若為木段或者圓盤無需裝入塑料袋），放入4℃冰箱。若需較長時間保存，要定期在樣品上噴水保濕，保存時間不宜超過1個月。

（四）分離鑒定。

1.分離。採用貝爾曼漏鬥法或者淺盤法分離松材線蟲，分離時間一般需12小時以上。將分離液體收集到試管或者燒杯中，通過自然沉澱或者使用離心機處理後進行鑒定。

2.鑒定。

（1）常規顯微鏡形態鑒定。僅適用於雌雄成蟲，以雌成蟲為主。將製作好的玻片置於顯微鏡下觀察其形態，判別是否為松材線蟲。若分離的線蟲為幼蟲，需培養至成蟲後進行鑒定。

（2）分子檢測（適用於各蟲態）。採用PCR檢測技術判別是否為松材線蟲。

松材線蟲分離、培養、檢測鑒定的具體方法可參照國家標准《松材線蟲病檢疫技術規程（GB/T 23476）》進行。

其中，PCR檢測技術通常是通過松材線蟲自動化分子檢測系統來完成的，這是能准確無誤測出松材線蟲的一種方法。

❷ 松材線蟲的發生規律如何怎樣防治

（1）發生規律松材線蟲病多發生在每年7～9月份。高溫乾旱氣候適合病害發生和蔓延，低溫則能限制病害的發展；土壤含水量低，病害發生嚴重。傳播松材線蟲的主要媒介是松墨天牛。松墨天牛一般5月前後羽化，從罹病樹中羽化出來的天牛幾乎100%攜帶松材線蟲，天牛體內的松材線蟲均為耐久性幼蟲，這階段幼蟲抵抗不良環境能力很強，它們主要分布在天牛的氣管中，每隻天牛都可攜帶成千上萬條線蟲，最高可達28萬條。當天牛在樹上咬食作補充營養時，線蟲幼蟲就從天牛取食造成的傷口進入樹脂道，然後蛻皮成為成蟲。被松材線蟲侵染的松樹往往又是松墨天牛的產卵對象。翌年，在罹病松樹內寄主的松墨天牛羽化時又會攜帶大量線蟲，並「接種」到健康的樹上，導致病害的擴散蔓延。病原線蟲近距離由天牛攜帶傳播，遠距離則隨調運帶有松材線蟲的苗木、枝丫、木材及松木製品等傳播。松樹線蟲雌雄蟲交尾後產卵，每雌蟲產卵越100粒。蟲卵在溫度25℃下30小時孵化，幼蟲共4齡。在溫度30℃時，線蟲3天即可完成一個世代。松材線蟲生長繁殖的最適溫度為20℃，低於10℃時不能發育，28℃以上繁殖會受到抑制，在33℃以上則不能繁殖。（2）防治方法①嚴格檢測制度，禁止疫區的苗木、木材、木製品、枝丫、鋸片等運往非病區。
②清除病害的枯木或瀕於枯死的樹木，集中成堆，用塑料布密封，以溴甲烷熏蒸5～10小時，葯量為69～83克/米3，可殺滅天牛成蟲及幼蟲。樹丫集成小堆燒毀。也有用天牛化學引誘劑Ⅰ號誘殺天牛或養放腫腿蜂（Scleroderma guani）寄生天牛幼蟲誅殺。
③預防性噴葯，噴葯一次可持效2.5～3個月。可用25%殺螟松乳劑，每公頃3～3.6千克。

❸ 松材線蟲病防治方法

松材線蟲病的發生和傳播必須具備3個基本條件，病原體、傳播媒介和寄主。因此，根據松材線蟲病的發生傳播規律，林區松材線蟲病的防治主要從以下3個方面入手，即消滅病原（松材線蟲）、切斷傳播（松墨天牛）以及保護寄主（松樹）。
在加強對林木檢查檢驗檢疫的基礎上，對枯死樹進行砍伐和營林改造，樹干注葯防治（如打注干劑），切斷傳播途徑；松墨天牛用化學噴粉防治（如噴灑綠僵菌）、生物防治（如釋放花絨寄甲）、引誘劑誘捕（如掛設松墨天牛光電智能誘捕器）等進行防治，以及保護寄主；選有抗病樹種等方法來達到防治松材線蟲病的發生和傳播。

❹ 如何防治松材線蟲病防治時要注意哪些環節

防治松材線蟲病，只要切斷寄主、病原、傳媒三者的任何一環，都能達到控制的目的。目前我國防治松材線蟲病，主要採用改造松林、清除病死樹並殺死其中傳媒昆蟲和病原，以及採取化學和生物手段防治傳媒昆蟲等措施。主要做法有：
（1）全面皆伐重病松林和孤立發病松林，並採用熏蒸、熱處理、切片等方法殺死其中傳媒昆蟲和線蟲。
（2）徹底清除發病松林中的病死樹，對病材、病枝、根樁等採用熏蒸、熱處理、切片等方法殺死傳媒昆蟲和線蟲。
（3）皆伐病區周圍松林，或以化學葯劑封鎖，建立防治隔離帶。
（4）對發生區實施檢疫封鎖，嚴禁未經處理的病材等運到未發生區。
（5）在傳媒昆蟲羽化期間，噴灑葯劑防治或設置誘木誘殺。
（6）噴灑化學葯劑或採用釋放腫腿蜂、施放白僵菌等生物措施防治傳媒昆蟲幼蟲。
防治松材線蟲病重點應注意以下環節：①要把好檢疫封鎖關。這是防止松材線蟲病傳入或遠距離傳播的重要手段。②要做到「治早、治小、治了」。即要搞好監測工作，早發現，早治理，在疫情發生面積小、為害程度輕的時候下大決心，下大力氣進行防治。把松材線蟲病消滅在萌芽狀態之中。③要及時徹底清理病死樹。「及時」就是在傳媒昆蟲羽化前，把病死樹全部清除，「徹底」就是病樹的木材、枝椏、根樁等都要進行除害處理，殺死其中線蟲和傳媒昆蟲，防止再次傳播為害。

❺ 擬松材線蟲與松材線蟲的形態區別

最主要的區別是尾部的尾尖突不同：

二者在形態上的區別專業描述

擬松材線蟲都有尾突，長度比松材線蟲略長，但實際操作中，這個特徵很難把握，近些年來逐步發展起來了許多新技術和方法，其中PCR技術被作為形態學鑒定的輔助手段，對於鑒定那些形態特徵不夠典型的松材線蟲或擬松材線蟲以及幼蟲有很大的幫助，有助於快速准確地鑒別松材線蟲。

由於分子檢測過程繁瑣，且需要專業的分子生物學技術基礎，集成了該檢測技術的松材線蟲自動化分子檢測系統可以自動檢測，避免人為因素影響檢測結果。

❻ 在野外如何識別松材線蟲病，該病害在普查和調運檢疫中的取樣和鑒定方法檢驗松材線蟲病要什麼水泡十八片

摘要 第一，野外識別是看是否出現松樹枯死、針葉褪色、黃化、枯萎以及呈紅褐色等松針變色症狀等異常情況。取樣鑒定是否發生松材線蟲病。第二，取樣方法有木條和用鑽頭鑽取的木屑，採集的樣品應當及時分離鑒定，採用貝爾曼漏鬥法或者淺盤法分離松材線蟲，分離時間一般需12小時以上。第三，檢驗松材線蟲病要的水是蒸餾水。

❼ 松材線蟲病的鑒別特徵

1、測量數據：雌⒇：L=1140µm；a=39.4；b=11.1；c=27.3；v=72.9%；st=15.2 µm；雄⒇：L=1070µm；a=47.6；b=11.0；c=31.3；st=15.1 µm；sp=29.8 µm 2、雌雄蟲都呈蠕蟲形，蟲體細長，長1mm左右。唇區高，縊縮顯著。口針細長，其基部微增厚。中食道球卵圓形，占體寬的2/3以上，瓣膜清晰。食道腺細長葉狀，覆蓋於腸背面。排泄孔的開口大致和食道與腸交接處平行，半月體在排泄孔後約2/3體寬處。卵巢單個，前伸；陰門開口於蟲體中後部73%處。上覆以寬的陰門蓋。後子宮囊長190µm，約為陰肛距的3/4。雌蟲尾亞圓錐形，末端寬圓，少數有微小的尾尖突。雄蟲交合刺大，弓狀，成對，喙突顯著，交合刺遠端膨大如盤。雄蟲尾似鳥爪，向腹面彎曲，尾端為小的卵狀交合傘包裹，退火的交合傘在光學顯微鏡下不易看見，交合傘（為翼）是尾的角質膜的延伸，在問短呈鏟狀，由於邊緣向內捲曲，從背面觀呈卵形，從側面觀呈尖圓形。病材中的幼蟲蟲體前部和成蟲相似，但其後部則因腸內積聚大量顆狀內含物，以至呈暗色並接結構模糊。幼蟲尾亞圓錐形。

❽ 松材線蟲病的取樣株率什麼意思

取樣株數占總株數的比。例如總株數100，取樣10株，則取樣株率10%

關於松材線蟲病取樣檢測時的取樣數量，《松材線蟲病防治技術方案》指出：

對需調查疫情發生情況的小班進行取樣時，總數10株以下的要全部取樣；總數10株以上的先抽取10株進行取樣檢測，如沒有檢測到松材線蟲，應當繼續取樣檢測，直至全部取樣檢測為止。

❾ 松材線蟲病的治理方法是什麼

1、砍除病樹：新發現的感病松林，要立即採取封鎖撲滅措施。小塊的林地要砍除全部松樹；集中連片的松林，要將病樹全部伐除，同時刨出伐根，連同病樹的枝、干一起運出林外，進行熏蒸或燒毀處理。

2、葯劑熏蒸：感病的原木及加工製品，可進行熏蒸處理，但必須在松褐天牛羽化前完成。在自然界用溴甲烷進行帳幕熏蒸，5－10℃時，68－83ɡ／熏蒸72h；11－21℃時，42－56ɡ／，熏蒸72h。

3、水浸處理：在有條件的地方可將應處理的松木沉於水塘中浸泡，浸泡期間木材不得長期露出水面，要定期進行翻動，浸泡時間必須達到5個月以上。

4、集中燒毀：對利用價值不大的松木、枝椏、伐根及其他松木加工製品，可集中燒毀，在焚燒過程中要加強防火管理，特別是余火的處理

❿ 松材線蟲病的檢疫方法是什麼

1、直觀檢驗：此種方法主要在產地調查時使用。在調查時仔細觀察樹木發育是否正常，注意察看有無樹脂分泌減少、停止，針葉變褐、萎蔫，枝幹及整株枯死的現象，同時觀察樹幹上有無天牛蛀食的痕跡、產卵孔、羽化孔等，如有再行解剖檢查。

2、解剖檢驗：用工具將可疑感病的樹木鋸斷劈開，看材質重量是否明顯減輕；木質部有無藍變現象；樹干內有無松褐天牛棲居的痕跡。

3、漏斗分離檢驗：從罹病木發病部位或天牛棲居處鑽取木材組織並粉碎，用雙層紗布包好，置於下方帶有膠管和截流夾的玻璃漏鬥上，加水浸泡12小時，取下部浸泡液離心，取其沉澱液15ml，置於解剖鏡下，對照松材線蟲的形態特徵進行檢查鑒定。

4、接種試驗：把分離到的松材線蟲接種到健康的松樹上，觀察健康樹是否發病。