在實驗室檢測核酸的方法

『壹』 核酸檢測是怎樣檢測的

眾所周知，新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）是一種烈性呼吸道傳染病，其病原體為新型冠狀病毒。若想證實已出現的感染症狀是由本病毒所引起，最准確的方法是從患者體內分離出活病毒，並進行病毒培養。

然而，此方法並不適合大面積應用，在此次疑似病例的確診工作中，也並不適用。這是因為病毒培養所需時間較長，需要的場所條件也很高（P3級實驗室），時效性遠遠跟不上臨床需要。

而核酸檢測作為病原學的檢測手段之一，效率很高，一般情況下幾個小時就可以知道結果。因此，在此次疫情中，臨床上取得病原學證據的主要方式並不是病毒培養，而是核酸檢測。

核酸是遺傳信息載體，是對DNA（脫氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）的統稱。病毒則主要由遺傳物質和蛋白質組成。而新型冠狀病毒正是一種RNA病毒，其遺傳物質是單鏈RNA。核酸檢測的原理，正是檢測在被測者的咽拭子等樣本中，是否存在病毒的RNA。如果存在，說明被病毒感染。那麼，我們是否已經獲悉了病毒的RNA呢？

△RNA與DNA（圖片來源網路）

在武漢疫情初期，中國疾病預防控制中心應用宏基因組學技術，在短時間內完成該病毒的鑒定，並獲取了全基因組序列。在病毒全基因組序列公布後，實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）試劑被快速研發。

隨後，核酸檢測試劑盒被應用於臨床，並為確診新冠肺炎提供病原學證據。那麼，應用試劑盒進行核酸檢測，究竟是怎樣的一個過程呢？

首先，檢測人員需要在試劑的幫助下，將樣本中的核酸提取出來。再把已經分離出來的核酸加到核酸擴增試劑中，然後將其放到核酸擴增儀內，一般兩個小時內就會有結果。

事實上，在操作步驟中，擴增是很重要的一環。擴增的意義在於能讓微量的遺傳信息成指數增加。只要樣本中有核酸基因片段，就能用PCR法加以放大，從而更清晰地與病毒全基因組序列實現比對。

實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）法已在臨床實驗室應用多年，檢測體系成熟，具有特異性強、靈敏度高、檢測周期短和可定量檢測的優點，而且還能對病毒感染程度和治療效果進行動態監測。

中日友好醫院呼吸與危重症醫學科主任醫師陳欣在記者采訪中介紹道：核酸檢測十分敏感，只要在被檢者的分泌物樣本中找到一部分病毒的核酸，就可以通過RT-PCR擴增的方式，整合成序列。

"雖然不確定核酸是否來自於活病毒，但對於有呼吸道感染症狀的患者或疑似患者來說，如果其咽拭子有這種核酸，一般認為來源於活病毒的一部分，間接證實其體內存在著病毒的繁殖和感染。" 陳欣告訴記者。

核酸檢測容易出現"假陰性"

雖然核酸檢測有靈敏度高、檢測周期短等優點，但也存在著一定的弊端。不同於從人體內直接分離出活病毒的方式，核酸檢測採用的是一種間接的方式，有可能造成假陰性。

因為試劑盒存在最低檢測限的問題，所以只有當採到的樣本中，病毒的含量達到一定程度時才能檢測出來。少數情況下，可能康復者並未康復，但由於樣本中病毒載量低，故康復者核酸檢測的結果呈陰性，也就是我們常說的"假陰性"。

因此，在《新型冠狀病毒肺炎診療標准（試行第七版）》中，出院標准之一為連續兩次痰、鼻咽拭子等呼吸道標本核酸檢測陰性（釆樣時間至少間隔24小時）。
而之所以選取呼吸道標本進行核酸檢測，是因為新冠肺炎屬於呼吸道傳染病，故而優先考慮從呼吸道的分泌物中取得標本。呼吸道又分為上呼吸道和下呼吸道，前者主要包括鼻、咽、喉；後者主要包括氣管、主支氣管及肺內各級支氣管。

相應地，現在對疑似患者檢測病毒核酸，標本的採集一般有兩大類，上呼吸道標本和下呼吸道標本。

上呼吸道標本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子（NPS）、鼻咽吸取物（NPA）；下呼吸道標本主要包括痰液、氣管吸取物、支氣管肺泡灌洗液（BALF）等。

『貳』 核酸檢測怎麼做

核酸檢測需要去正規的醫院或者防疫中心進行檢測。

檢測步驟：

1、首先，核酸檢測盒子，也就是現在用於新冠狀病毒檢測的方式，這個盒子中主要檢測「法寶」採用咽拭子。用咽拭子擦拭咽後壁及雙側咽扁桃體處各5－10次，且不斷旋轉拭子。

2、醫務人員進行留樣，將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後立即旋緊管蓋子。

3、保存，將樣本管放入密封袋中及時送檢，而送檢過程中需要嚴格的運輸環境，2－8攝氏度保存。

4、操作核酸提取（反應管理），將滅活病毒後的樣本進行核酸提取，用於後續檢測。

5、熒光PCR核酸檢測，也就是．上機器檢測，將提取物進行熒光PCR擴曾反應，需要70－－80分鍾。

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1、新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。

2、通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發現感染者，甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。

3、感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除，不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。

『叄』 實驗室核酸檢測最常用的方法是

你好朋友，核酸檢測，現在的方法就是在鼻腔里取樣品和在咽喉當中取樣品，這都是非常簡單的，謝謝。

『肆』 核酸檢測流程

1、首先，醫務人員會使用咽拭子擦拭受檢者鼻腔或者喉嚨扁桃體處，採集唾液分泌物，這個過程其實蠻疼的。

『伍』 核酸檢測方法

對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

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核酸檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現後，我國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析。

並通過與其它物種的基因組序列對比，發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗檢測過程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染

『陸』 什麼是核酸檢測

作為新冠狀病毒的篩選手段，核酸檢測被推到了大眾視野之中，那麼核酸檢測到底是什麼呢？核酸檢測的物質是病毒的核酸。核酸檢測是查找患者的呼吸道標本、血液或糞便中是否存在外來入侵的病毒的核酸，來確定是否被新冠病毒感染。因此一旦檢測為核酸「陽性」，即可證明患者體內有病毒存在。新冠病毒感染人體之後，首先會在呼吸道系統中進行繁殖，因此可以通過檢測痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判斷人體是否感染病毒。所以說，核酸檢測陽性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標准。
現在疫情防控仍然是非常嚴峻，無論是上學還是工作，好多學校及單位都是要求結果陰性的報告單。
1、陽性代表的是感染了新冠病毒，陰性代表的是沒有感染。核酸檢測是在實驗室的條件下，通過分析致病微生物DNA或者RNA基因學的序列，進行臨床病因學的確診。
2、此種核酸檢測的方法是利用PCR擴增的方法進行檢測，需要很多的步驟，最快也要6個小時才能出結果。此種檢測靈敏度高、成本高，完全手工操作，工作量非常大，同時要求實驗室的條件也非常高。它是目前及早確定病人是否感染病毒，並且及早發現和及早治療最有效的檢測方法。

『柒』 現在核酸檢測都有什麼方法

通過呼吸道或口腔內的痰液做檢測