b細胞增殖檢測方法

❶ 成熟B淋巴細胞增殖性疾病必須做哪些檢查才能確診必須化療治療

這樣的疾病一般是需要做病理切片的方法檢查就可以確診的。是否需要化療的方法治療。要遵醫囑的方法治療。

❷ 細胞增殖的研究方法

細胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU檢測方法是最新的細胞增殖檢測方法。
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子，通過基於EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EdU標記便能准確地反映細胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更准確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細胞和組織水平能更准確地反映細胞增殖等現象。

❸ 體液免疫中B細胞增殖分化的條件是什麼

B細胞的激活有兩種，一種是需要抗原和T細胞分泌的淋巴因子共同激活，又叫T細胞依賴激活(T cell dependent activation)，一種是由抗原直接激活，也叫非T細胞依賴激活(T cell independent activation)。

B淋巴細胞亦可簡稱B細胞，來源於骨髓的多能幹細胞。B淋巴細胞的祖細胞存在於胎肝（胚胎小鼠14天或通順兒8-9周）的造血細胞島（island of hematopoietic cells）中，此後B淋巴細胞的產生和分化場所逐漸被骨髓所代替。

成熟的B細胞主要定居於淋巴結皮質淺層的淋巴小結和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結內。B細胞在抗原刺激下可分化為漿細胞，漿細胞可合成和分泌抗體（免疫球蛋白），主要執行機體的體液免疫（humoralimmunity）。

介紹：

B淋巴細胞亦可簡稱B細胞。來源於骨髓的多能幹細胞。禽類是在法氏囊內發育生成，故又稱囊依賴淋巴細胞（bursa dependent lymphocyte）/骨髓依賴性淋巴細胞簡稱B細胞，是由骨髓中的造血幹細胞分化發育而來。與T淋巴細胞相比，它的體積略大。這種淋巴細胞受抗原刺激後，會增殖分化出大量漿細胞。漿細胞可合成和分泌抗體並在血液中循環。

在哺乳類是在類囊結構的骨髓等組織中發育的。又稱骨髓依賴淋巴細胞。從骨髓來的幹細胞或前B細胞，在遷入法氏囊或類囊器官後，逐步分化為有免疫潛能的B細胞。成熟的B細胞經外周血遷出，進入脾臟、淋巴結，主要分布於脾小結、脾索及淋巴小結、淋巴索及消化道粘膜下的淋巴小結中，受抗原刺激後，分化增殖為漿細胞，合成抗體，發揮體液免疫的功能。

如今使用的大多數疫苗就是通過刺激這類B淋巴細胞產生抗體的。B細胞在骨髓和集合淋巴結中的數量較T細胞多，在血液和淋巴結中的數量比T細胞少，在胸導管中則更少，僅少數參加再循環。B細胞的細胞膜上有許多不同的標志，主要是表面抗原及表面受體。這些表面標志都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。

B1細胞為T細胞非依賴性細胞。B2為T細胞依賴性細胞。B細胞在體內存活的時間較短，僅數天至數周，但其記憶細胞在體內可長期存在。

以上內容參考：網路-B淋巴細胞

❹ B細胞增殖必須兩個條件嗎

B細胞增殖分化的條件有兩個：1.B細胞的BCR識別抗原表位，產生第一信號。第一信號不足以活化B細胞，如只有第一信號，只能產生免疫失能，不發揮效應。2.Th細胞與B細胞表面的共刺激分子共同作用產生第二信號。從而徹底活化B細胞。（Th細胞在B細胞的體液免疫中起兩個作用，一個是與B細胞表面共刺激分子作用活化B細胞，一個是分泌細胞因子刺激B細胞）

❺ 成熟B淋巴細胞增殖性疾病必須做哪些檢查才能確診必須化療治療

印象：淋巴細胞約佔有核細胞的71%，其中
B淋巴細胞
約占淋巴細胞的85%，表達
HLA-DR
，CD5、CD11C，CD19，CD20，CD22，CD23，其中CD5+CD23+CD19+細胞約占淋巴細胞的63.90%，髓系增殖受抑。
慢淋
的療效總的來講是比較好的，但並不是所有的患者診斷後都需要治療，

❻ 如何檢測細胞的增殖活性，簡要描述實驗步驟

細胞增殖檢測方法 細胞增殖檢測通常是檢測分裂中的細胞數量或者細胞群體發生的變化。目前細胞增殖檢測主要分為五類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞數量檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP 濃度檢測。在這些方法中作何選擇，主要取決於所研究的細胞類型和研究方案。 1. DNA合成檢測 這是目前實驗室中檢測細胞增殖最准確可靠的方式。該法是將放射性標記的3H-胸腺嘧啶與細胞一同孵育，這樣新增殖細胞的DNA中就會摻入放射性標記，經洗脫後可用閃爍計數器檢測。該方法耗時長，而且有個明顯的弊端就，即使用和處理放射性物質既麻煩又不安全。不過，可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來進行類似實驗，因為BrdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。但這樣就需要進行額外的實驗步驟，先孵育特異性BrdU單抗和帶標記的二抗，然後再進行比色法、化學發光檢測或熒光信號檢測等步驟。該方法的優點就是不再需要放射性物質。BrdU標記很適合免疫組化IHC、免疫細胞化學IC、細胞內ELISA、流式細胞分析和高通量篩選。 2. 代謝活性檢測 檢測細胞群體的代謝活性也可以反映細胞增殖的情況。在細胞增殖過程中脫氫酶的活性會增加，因此其底物四唑鹽或Alamar Blue在代謝活躍的細胞環境中會逐漸減少，形成能夠改變培養基顏色的甲臢染料。可以通過低配置或高配置的分光光度計和酶標儀來讀取含染料培養基的吸光度，從而衡量細胞的代謝活性，檢測細胞增殖的情況。 四種最常見的四唑鹽是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在標準的細胞培養基中是不溶的，而且其生成的甲臢晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此，MTT主要作為終點檢測方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣，都是可溶且無毒。它們可以作為連續監控手段來跟蹤細胞增殖的動態改變。其中XTT的效率較低，需要添加額外的因子；WST1更靈敏有效，與其他鹽相比能夠更快顯色；Alamar Blue的靈敏度也很高，只要微孔板的孔中有100個細胞就能夠檢測到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用於多種儀器和高通量研究，非常方便。它們適用的檢測儀器包括：標准分光光度計、熒光分光光度計和酶標儀等。

❼ 檢測細胞增殖的方法有哪些

一、MTT比色：
MTT比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑鹽）可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中，而死細胞無此功能，DMSO（二甲基亞碸）能溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。在一定范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比，此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面，具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點，與細胞計數有良好的相關性。
二、rdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
三、結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。

❽ 如何分析B細胞的功能

1.可以進行淋巴細胞增殖功能的檢測，抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌體(SAC)、脂多糖(LPS，對小鼠有作用)刺激B細胞發生增殖。
2.應用抗B細胞特異性表面標志（mIG）的抗體，藉助免疫熒光法可檢測B細胞總數及亞群，主要用於判斷原發性或繼發性免疫缺陷患者的體液免疫功能。
3.ELISPOT法檢測單個B細胞分泌的特異性抗體。
4.分子生物學方法的應用，如BCR基因重排檢測，一般用於對血細胞惡性變如白血病、淋巴瘤等的診斷。
以上還很不全面，僅供參考。

❾ 檢測細胞增殖的種類以及方法步驟

主要有四種，方法步驟如下

一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）滲入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的鹼基，也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DAN合成代謝過程，通過測定細胞的放射性強度，可以反映細胞DAN的代謝及細胞增殖情況。但是具有放射性。
二、MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝，是檢測細胞增殖活力的一種簡便准確的方法，其原理是在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比
三、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團，使C E成為一種良好的細胞標記物。CFSE進入細胞後可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFsE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣，在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的熒光強度呈對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
四、Br檢測法
Br中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而後利用抗Br單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。

❿ 成熟B淋巴細胞增殖性疾病必須做哪些檢查才能確診

微小殘留白血病的檢測非常嚴格，如果檢查是嚴格准確的，殘留白血病細胞的數量在10-4（即1萬個細胞里沒有看到1個白血病細胞）以下，那麼復發是幾率就非常小。但無論任何檢查，都需要根據孩子的具體情況而定。匹多莫德的用法，一般在中國性期是每天2次，每次一袋，這樣用2周後，改為每天1袋，再用1-3月。如果孩子不是處於中國性期，也可以直接開始每天1袋的用法。 北京兒童醫院-血液科-鄭胡鏞主任醫師 查看原帖>