㈠ 細胞能量代謝分析系統檢測效果怎樣
主要有四種檢測,效果都挺好的,方法步驟如下
一、胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法
胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的鹼基,也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DAN合成代謝過程,通過測定細胞的放射性強度,可以反映細胞DAN的代謝及細胞增殖情況。但是具有放射性。
二、MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝,是檢測細胞增殖活力的一種簡便准確的方法,其原理是在活細胞生長和增殖過程中,線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲(Formazan),生成的甲量的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比
三、羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂(CFSE)檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺脂(CFSE)是一種可穿透細胞膜的熒光染料,具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺脂基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團,使C E成為一種良好的細胞標記物。CFSE進入細胞後可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時,CFsE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強度是親代細胞的一半。這樣,在一個增殖的細胞群中,各連續代細胞的熒光強度呈對遞減,利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
四、Br檢測法
Br中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細胞培養加入,而後利用抗Br單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物,雙重染色,可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學有重要意義。
㈡ 怎麼判斷細胞代謝水平
1.機體細胞中
與
比值升高.
2、
數量較多.因為
旺盛的細胞需要能量多
3、
的量多.細胞代謝旺盛時需要大量蛋白質進行生命活動,
於蛋白質的合成有關
4、
相對較大.因為
與
形成有關
5、核孔相對較多.細胞代謝旺盛時需要大量蛋白質進行生命活動,而
時的模版mRNA在
內形成後是通過核孔進入
的 可以好評嗎?新年快樂哦!(右上角採納)
(1)生物學檢測法:又稱生物活性檢測,是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。生物活性檢測法又可分為: 1、細胞增殖法; 2、靶細胞殺傷法; 3、細胞因子誘導的產物分析法; 4、細胞病變抑製法。
(2)免疫學檢測法:細胞因子均為蛋白或多肽,具有較強的抗原性,可利用抗原抗體特異性反應的特性,用免疫學技術定量檢測細胞因子,常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印跡法
(3)分子生物學方法:目前公認的細胞因子的基因均已克隆化,較容易地得到某一細胞因子cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。常使用斑點雜交、Northernblot、逆轉錄PCR,細胞或組織原位雜交等。具有靈敏、快速等優點,甚至從l~10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA
㈣ 檢測細胞增殖的方法有哪些
一、MTT比色:
MTT比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法,其原理是外源性MTT(四唑鹽)可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中,而死細胞無此功能,DMSO(二甲基亞碸)能溶解細胞中的紫色結晶物,用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值,可間接反映活細胞數量。在一定范圍內,MTT結晶物形成的量與細胞數成正比,此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面,具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點,與細胞計數有良好的相關性。
二、rdU標記法
1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處於G0期。
2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。
3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。
4.甲醇/醋酸固定10min。
5.經固定的玻片空氣乾燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6.5%正常兔血清封閉。
7.甲醯胺100℃,5min變性核酸。
8.冰浴冷卻後PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。
9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。
三、結晶紫法
1.體外細胞培養結束後,去培養液,加入11%的戊二醛固定,置於振盪器上搖20min。
2.固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3.置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4.加入0.1%的結晶紫液對細胞染色,振搖30min。
5.用蒸餾水洗滌,至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6.置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7.加入10%的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8.1h後在酶標儀上測定光吸收度,波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1.96孔細胞培養板中培養細胞,去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次(如為懸浮細胞則用離心洗滌)。
2.去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3.37℃,孵育1~4h。
4.加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5.在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度,將細胞培養板其中不含細胞,同樣處理過的一孔作為空白對照,所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照,以細胞數為X軸,光吸收度為Y軸,可作直線回歸,可推算出每孔中的細胞。
㈤ 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼
簡單說幾個把
染色體法 主要在培養基中利用死活細胞對燃料親和力不同 來判斷
克隆形成實驗 原理是單個細胞在體外增至六代後,後代形成的細胞群體 ,通過計算其克隆形成率 來判斷
比色法 也是比較經典的 M,RR 活體細胞中的線粒體中的琥珀酸脫氫酶可以將M,rr還原成藍紫色的結晶甲醋 死細胞無此功能
㈥ 如何檢測細胞的增殖活性,簡要描述實驗步驟
細胞增殖檢測方法 細胞增殖檢測通常是檢測分裂中的細胞數量或者細胞群體發生的變化。目前細胞增殖檢測主要分為五類:DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞數量檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP 濃度檢測。在這些方法中作何選擇,主要取決於所研究的細胞類型和研究方案。 1. DNA合成檢測 這是目前實驗室中檢測細胞增殖最准確可靠的方式。該法是將放射性標記的3H-胸腺嘧啶與細胞一同孵育,這樣新增殖細胞的DNA中就會摻入放射性標記,經洗脫後可用閃爍計數器檢測。該方法耗時長,而且有個明顯的弊端就,即使用和處理放射性物質既麻煩又不安全。不過,可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來進行類似實驗,因為BrdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。但這樣就需要進行額外的實驗步驟,先孵育特異性BrdU單抗和帶標記的二抗,然後再進行比色法、化學發光檢測或熒光信號檢測等步驟。該方法的優點就是不再需要放射性物質。BrdU標記很適合免疫組化IHC、免疫細胞化學IC、細胞內ELISA、流式細胞分析和高通量篩選。 2. 代謝活性檢測 檢測細胞群體的代謝活性也可以反映細胞增殖的情況。在細胞增殖過程中脫氫酶的活性會增加,因此其底物四唑鹽或Alamar Blue在代謝活躍的細胞環境中會逐漸減少,形成能夠改變培養基顏色的甲臢染料。可以通過低配置或高配置的分光光度計和酶標儀來讀取含染料培養基的吸光度,從而衡量細胞的代謝活性,檢測細胞增殖的情況。 四種最常見的四唑鹽是:MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在標準的細胞培養基中是不溶的,而且其生成的甲臢晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此,MTT主要作為終點檢測方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣,都是可溶且無毒。它們可以作為連續監控手段來跟蹤細胞增殖的動態改變。其中XTT的效率較低,需要添加額外的因子;WST1更靈敏有效,與其他鹽相比能夠更快顯色;Alamar Blue的靈敏度也很高,只要微孔板的孔中有100個細胞就能夠檢測到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用於多種儀器和高通量研究,非常方便。它們適用的檢測儀器包括:標准分光光度計、熒光分光光度計和酶標儀等。
㈦ 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼
在目前的細胞活性檢測方法中,MTT法是較早且較為經典的方法。但是,由於MTT法形成的甲物是非水溶性的,需要加有機溶劑溶解,這不僅增加了研究人員的工作量,也給實驗帶來了一定的誤差。在這里我們向大家介紹一種國外最新檢測方法—CCK-8法,它具有方便、靈敏、快速、無放射性、重復性好的特點。現在已廣泛用於細胞增殖檢測、細胞毒性檢測、葯物篩選、葯敏試驗等。
另外還將向大家介紹幾種氧化應激和蛋白質抗體標記的新方法。
內容:
1、新型細胞活性檢測方法介紹
2、國外氧化應激測定方法介紹
3、蛋白質抗體標記的新方法介紹
原理恕在下不知
㈧ 細胞的代謝是怎樣進行的
在常溫常壓下,在酶的催化作用下進行的。
㈨ 求細胞周期檢測方法:PI法操作步驟
1. 細胞培養:取對數生長期的細胞,按1×106cells/ mL以1mL接種24孔板或2mL接種於6孔板內,進行所需的處理(比如加入葯物),特定時間後終止培養,進行下一步的實驗。
2. 細胞固定: 800rpm離心5min,收集細胞沉澱,棄上清,用預冷PBS洗滌兩次,加入預冷75%乙醇,於4℃固定4h以上。
3. 細胞染色:1500rpm離心5min,棄上清,以3mL的PBS洗滌一次,加入400uL溴化乙錠(PI,50ug/mL),100ul RNase A(100ug/mL ),4℃避光孵育30min。
4. 流式分析: 以標准程序用流式細胞儀檢測,一般計數2~3萬個細胞,結果用細胞周期擬和軟體ModFit分析。
㈩ 細胞活性檢測的方法有多少種
細胞活性測定方法有台盼藍染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素摻入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡便,不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的,需要加有機溶劑溶解,由於在去上清操作時會有可能帶走小部分的 Formazan ,故有時重復性略差。為了解決這個問題,研究人員又開發了很多種水溶性的四氮唑鹽類:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。