淮南酶活檢測方法

Ⅰ 氧化還原酶酶活測定方法

氧化還原酶能催化兩分子間發生氧化還原作用的酶的總稱。其中氧化酶（oxidase;oxydase）能催化物質被氧氣所氧化的作用，脫氫酶（dehydrogenase）能催化從物質分子脫去氫的作用。氧化還原酶對於電子供體和受體的一方或兩方都有特異性,並根據其特異性而進行分類。
這是一大類的統稱,沒有統一的測活方法.你首先要確定你的酶的電子供體受體是什麼.

Ⅱ 酶活測定方法有哪些原則最好是詳細的答案

一、原則
pH值和溫度
體外測定酶活力時選擇的測定條件應盡可能接近酶在動物體內的消化環境。

干擾成分
側定酶活力時應盡可能的去除干擾成分。

底物
在選擇底物時一定要用純度較高的底物，底物的反應濃度也不應太高。

酶樣的稀釋度
稀釋度要適中，過高，酶活力與產物生成量的關系就會超出線性范圍。

其他因素
酶促反應時間、反應體系的離子強度等因素也可以影 響酶活力的測定結果。因此,在酶活力體外測定時需要對這些 因素進行深人研究。

二、酶活測定方法
還原法
酶與底物在特定的條件下反應,酶可以促使底物釋放出還原性的基團。在此反應體系中添加化學試劑 ,酶促反應的產物可與該化學試劑發生反應,生成有色物質。通過在特定的波長下 比色 ,即可求 出還原產物的含量 ,從而計算出酶活力的大小 。

色原底物法
通過底物與特定的可溶性生色基團物質結合,合成人工底物。該底物與酶發生反應後 ,生色基團可被釋放出來 ,用分光光度法即可測定顏色的深淺,在與已知標准酶所做的曲線比較後 ,即可求出待測酶的活力。

粘度法
該法常用於測定纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶 的活力。木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情況下可形成極高的粘度,當酶作用於粘性底物時木聚糖和β-葡聚糖會被切割成較小的分子使其粘度大 為降低。基 於Poiseuille定律我們知道 ,只要測定一定條件下溶劑和樣品溶液的運動粘度,便可計算特性粘數,並以此來判斷酶的活力。

高壓液相色譜法
酶與其底物在特定的條件下充分反應後 ,在一定的色譜條件下從反應體系中提取溶液進行色譜分析,認真記錄保留時間和色譜圖,測量各個樣的峰高和半峰高,計算出酶促反應生成物的含量 ,從而換算出酶活力的數值。

免疫學方法
常用 於酶活性分析的免疫學方法包括:免疫電泳法 、免疫凝膠擴散法。這兩種方法都是根據酶與其抗體之間可發生特定的沉澱反應 ,通過待測酶和標准酶的比較,最終確定酶活力。免疫學方法檢側度非常靈敏,可檢側出經過極度稀釋後樣品中的酶蛋白,但其缺點是不同廠家生產的酶產品需要有不同特定的抗體發生反應。

瓊脂凝膠擴散法
將酶作用的底物與瓊脂混合熔融後 ,倒入培養皿中或載波片上製成瓊脂平板。用打孔器在瓊脂平面上打出一個約4-5mm半徑 的小孔。在點加酶樣並培養24h以後 ,用染色劑顯色或用展開劑展開顯出水解區,利用水解直徑和酶活力關系測定酶活力。

Ⅲ 酶活力測定的一般步驟

(一)製作對—硝基苯酚(pNP)標准曲線
按下表分別取不同體積的對—硝基苯酚(4mM)，用50mM醋酸緩沖溶液(pH5.6)稀釋成一系列濃度。然後在分光光度計上測定λ=410nm處的光密度，以濃度為橫坐標，光密度為縱坐標作曲線。

(二)α-葡萄糖苷酶活力測定
取 0.8mL對—硝基苯酚α-D-葡萄糖苷(pNPG)(1.25mM)，加入 0.2mL大麴浸提液，迅速混勻後於40℃水浴中保溫10分鍾，取出並立即加入2mL 1 M的碳酸鈉溶液終止反應，用分光光度計測定λ=410nm處的光密度，在標准曲線上查出相當於對—硝基苯酚的量，並計算酶活力。酶活力單位定義為：在上述分析條件下每分鍾催化形成一個微摩爾pNP所需要的酶量為一個活力單位。
五、計算

V—酶液量mL；
n:—酶液稀釋倍數；
t—反應時間(min)

Ⅳ 誰可以告訴我植物酶活性的檢測方法謝謝

你要知道這種酶的作用的 然後做個對比實驗 正常的和不正常的就行拉

Ⅳ 測定酶活力的方法有哪些

通過測定酶反應開始後某一時間段內（t1到t2）產物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法 稱為兩點法 其中t1往往取反應開始的時間 在酶反應一定時間後 往往通過加入強酸 強鹼 蛋白沉澱劑等 使反應完全停止 所以也叫中止反應法
2）連續監測法
又稱為動力學法或速率法 連續反應法 在酶反應過程中醫學 用儀器監測某反應產物或底物濃度隨時間的變化所發生的改變 通過計算求出酶反應初速度
3）平衡法
通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法 又叫終點法

Ⅵ 酶活力測定的方式方法有哪些

測定酶活力，可用物理法，化學法或酶分析法等方法。常用的方法有：第一，在適當的條件下，把酶和底物混合，測定生成一定量產物所需的時間，此即終點法。第二，將酶和底物混合後隔一定時間，間斷地或連續地測定反應的連續變化，如吸收度的增加或減少。
第三，將酶與底物混合後，讓其反應一定時間，然後停止反應，定量測定底物減少或產物生成的量。後兩種方法稱為動力學法或反應速率法：按取樣及檢測的方式可稱為取樣測定法或連續測定法。
（1）定時法：（兩點法）

通過測定酶反應開始後某一時間段內（t1到t2）產物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。

酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強酸、強鹼、蛋白醫學教育網整理沉澱劑等，使反應完全停止（也叫中止反應法）。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產物的變化。

該法最基本的一點是停止反應後才測定底物或物的變化。

優點：簡單易行，對試劑要求不高。

缺點：難保證測定結果的真實性。

難以確定反應時間段酶促反應是否處於線性期。隨著保溫時間的延續，酶變性失活加速。

（2）連續監測法：

又稱為動力學法或速率法、連續反應法。

在酶反應過程中，用儀器監測某一反應產物或底物濃度隨時間的變化所發生的改變，通過計算求出酶反應初速度。

連續監測法根據連續測得的數據，可選擇線性期的底物或產物變化速率用於計算酶活力。

因此連續監測法測定酶活性比定時法更准確。

實際工作中，採用工具酶的酶偶聯法已經成為醫學教育網整理應用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。

（3）平衡法：

通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點法。

Ⅶ 酶活力的常用測定方法

常用的測定方法有取樣法和連續法。

1、取樣法

在酶反應開始後不同的時間，從反應系統中取出一定量的反應液，並用適當方法停止其反應，再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析，求得單位時間內酶促反應的變化量。

2、連續法

基於底物和產物在物理化學性質上的不同，在反應過程中對反應系統添加酶的變性劑以終止反應，常用的連續測定法是光吸收測定法，即根據產物和底物在某一波長或波段上有明顯的特徵吸收差別而建立起來的連續觀測方法，幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測定。

此外如熒光法、旋光法、電化學法也是常用的連續測定方法。對不易直接測定的反應，可使用酶偶聯分析法，即用過量、專一的「偶聯工具酶」，使被測反應繼續進行到某一可直接測定的階段。近年來，酶活性的測定工作正向兩個方向發展，超微量酶活的靈敏測定，實現測定過程的自動化控制。

(7)淮南酶活檢測方法擴展閱讀

酶活力的大小可以用在一定條件下，它所催化的某一化學反應的轉化速率來表示，即酶催化的轉化速率越快，酶的活力就越高；反之，速率越慢，酶的活力就越低。所以，測定酶的活力就是測定酶促轉化速率。酶轉化速率可以用單位時間內單位體積中底物的減少量或產物的增加量來表示。

酶活力的測定既可以通過定量測定酶反應的產物或底物數量隨反應時間的變化，也可以通過定量測定酶反應底物中某一性質的變化，如黏度變化來測定。通常是在酶的最適PH 值和離子強度以及指定的溫度下測定酶活力。

Ⅷ 有關於酶活性檢測方法的書嗎

k看，大學里的酶工程課本，上面有很多酶活力測定的方法，及注意問題，如，必須測定初速度，底物和輔助因子的濃度必須過量，底物不能有裂解，酶要處於最佳狀態等，

Ⅸ 酶活力的測定方法及原理

酶活力的測定方法：有兩種主要方法即終止反應法和連續反應法。
終止反應法：是在恆溫反應系統中，每隔一定時間，取出一定體積的反應液，用強酸強鹼或SDS以及加熱等使反應立即停止，然後用化學法放射性化學法或酶偶聯法分析產物的形成量或底物的消耗量。這是最經典的酶活力測定方法，幾乎所有的酶都可以根據這一原理設計出具體的測定方法。
連續反應法：無須終止反應，而是在酶反應過程中用光化學儀器或電化學儀器等來監測反應的進行情況，對記錄結果進行分析，然後計算出酶活力。
酶活性測定的原理：
1. 超氧物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）
活性的測定 SOD採用氮藍四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）法（Beauchamp和Fridovich，1971）。反應步驟為：取200μl粗提液，加入3.7 ml NBT反應液50mmol/LpH7.8的磷酸緩沖液（PBS）配製的含77.12μmol/L氮藍四唑, 100μmol/LEDTA－Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保溫2分鍾後加入100μl核黃素溶液（pH7.8的50mmol/L磷酸緩沖液中含80.2μmol/L 核黃素和100μmol/LEDTA－Na2），在4000Lx日光下反應20min。然後迅速測定A560。以不照光的管做空白。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。酶活性按以下公式計算：以抑制NBT光化還原的50％為一個SOD活性單位，結果以U/mg蛋白表示。以加緩沖液代替酶液的作為對照。
SOD總活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中， Ack為照光對照管的吸光度；AE為樣品管的吸光度；V為樣品液總體積（ml）；Vt為測定時樣品用量（ml）；W為樣品鮮重（g）或蛋白質含量（mg）。
2. 過氧化氫酶（Catalase，CAT）
活性測定 CAT 活性參照Aebi (1984)[7]的方法進行測定。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL 。400 μL反應液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0)，30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。反應從加入過氧化氫開始計時，連續測定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定義為：一個過氧化氫酶單位相當於在規定條件下於溫度25℃，pH7.0條件下1分鍾分解1μmol過氧化氫所需酶量，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
3. 多酚氧化酶（Polyphenoloxidase，PPO）
活性的測定 PPO活性測定採用鄰苯二酚法（Aquino-Bolaños和Mercado-Silva，2004）。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。350µL反應液（用50mmol/L，pH6.4的PBS配製，內含100µmol/L鄰苯二酚）中加入50 µL的粗酶液，平衡1分鍾後連續測定398nm吸光度的變化。以1分鍾內398nm吸光度上升0.01為一個酶活性單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
4. 過氧化物酶（Peroxidase，POD）
活性測定POD活性測定採用愈創木酚法（Lurie等，1997)。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。反應體系為30μL粗酶液，290 µL 0.3%愈創木酚（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）和 80µL0.3%H2O2（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）。反應在加入H2O2 後開始准確記時。連續吸光度在470 nm的上升值。酶活性以每分鍾上升0.01為一個單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。

Ⅹ 常用的測定酶活的方法及原理

斐林試劑(或斑氏試劑)鑒定還原糖!溶液的顏色變化過程為:淺藍色----棕色-----磚紅色(沉澱).用一隻試管加入少許澱粉溶液,然後加入過量的 澱粉"酶",其他條件均為最適狀態,如溫度,PH等.放置一段時間後,加入斐林試劑,在沸水浴加熱4分鍾左右,若有磚紅色產生則 "酶" 是活的!反之則為死的. 或用一隻試管加入少許澱粉溶液,然後加入過量的 澱粉"酶",其他條件均為最適狀態,如溫度,PH等.放置一段時間後,加入碘液,溶液變為藍色.(澱粉遇碘液變為藍色)則"酶"死了.反之則是活的.(澱粉是多糖在澱粉酶的作用下,水解變為葡萄糖,葡萄糖是還原糖,澱粉不是還原糖,單糖是還原糖,二糖只有麥芽糖是其他都不是了).其他的方法也還有!但這過是最典型的了!