Ⅰ 請教流式細胞的具體實驗步驟是怎樣的
一、流式細胞術檢測細胞表面標記的具體步驟如下：
1. 將試劑平衡至室溫，並准備實驗環境：清潔消毒的工作檯面、適當的個人防護裝備（工作服、帽子、口罩和手套），以及必要的實驗耗材（棉簽、草紙和含有消毒劑的有蓋垃圾桶）。
2. 准備實驗管並編號，例如：1號管加入IgG1抗體，2號管加入CD4/CD8抗體，3號管加入CD14/CD45抗體，4號管則作為對照。
3. 在每支試管中加入相應抗體10μl，然後加入50μl全血樣本，輕輕震盪混合後，室溫下避光反應20分鍾。在加入抗體前需確保血樣充分混勻。
4. 向每管中加入1ml溶血素，震盪後室溫避光10分鍾。
5. 離心處理（1200轉，5分鍾），棄去上清液，然後輕震盪。
6. 加入2ml PBS洗液，震盪混合後再次離心（1200轉，5分鍾），棄去上清液，輕震盪。
7. 加入PBS 900μl，並在上機前置於4°C保存。
8. 准備流式細胞儀進行檢測。
二、細胞內細胞因子檢測的詳細步驟如下：
1. 准備實驗環境：清潔消毒的工作檯面、適當的個人防護裝備，以及必要的實驗耗材。
2. 准備實驗管並編號，例如：IgG1/CD8/CD3和IFN-gamma;/CD8/CD3。
3. 在超凈工作台內稀釋PMA（1∶100）、BFA（1∶10）和離子黴素（1∶10），使用無菌無疊氮鈉PBS作為稀釋液。
4. 取全血或PBMCs（細胞數在0.5-1×10^6）50μl/管，加入50μl RPMI1640稀釋一倍，然後加入刺激劑PMA、離子黴素和BFA，混勻。確保全血中的最終濃度為PMA: 50ng/ml、離子黴素：1μg/ml、BFA：10μg/ml。
5. 將細胞混合物在37℃，5% CO2條件下孵育4小時（最好在培養箱中進行，輕柔地蓋上培養箱蓋）。
6. 向各管中加入相應表面抗體20μl和激活的全血100μl，混勻後室溫避光20分鍾。
7. 加入2ml溶血素，室溫避光10分鍾，然後離心（1200轉，5分鍾），棄去上清液。
8. 加入0.5ml通透劑，室溫避光10分鍾，然後加入2ml PBS，1000轉，離心5分鍾，棄去上清液。
9. 向管中加入IFN-gamma;或IgG1的抗體20μl，混勻後室溫避光30分鍾，然後加入2ml PBS，1000轉，離心5分鍾，棄去上清液。
10. 加入PBS 500μl。在上機前置於4°C保存。
11. 准備流式細胞儀進行檢測。
注意：本實驗室提供流式細胞檢測服務或流式細胞儀操作培訓。新手可前來學習。本實驗室為三甲醫院科研共享平台，開放的實驗服務包括流式細胞術、熒光定量PCR、ChIP免疫沉澱、Western blot、細胞培養和細胞株等。
Ⅱ 用流式細胞術(FCM) 檢測大鼠盲腸腸壁組織中T淋巴細胞CD3+、CD4+ 、CD8+ 數量及CD4+/CD，具體步驟怎麼做
1.將腸壁組織研磨為單細胞懸液，用PBS懸浮，並用300目尼龍網過濾；
2.按BD試劑說明書，加試劑、染色制備好標本（如果要進行絕對計數，則需要絕對計數管）；
3.按流式細胞儀操作要求，設定好相應模板，上機檢查；
4.根據分析要求，用相應的分析軟體、分析模板進行分析數據。
Ⅲ 如何分析流式細胞儀檢測t淋巴細胞亞群結果
最常見的是分析CD4， CD8亞群。
先在FSC， SSC散點圖上劃出淋巴細胞gate。然後在此gate基礎上選取T細胞標志染色陽性的細胞群（一般是CD3）。在把CD34陽性的細胞根據CD4 和CD8染色情況形式為散點圖，得到CD4+/CD8-, CD4-/CD8+, 以及雙陽性的比率。如果還有其他細胞標志的染色，再進一步分析。