㈠ 檢測轉基因生物是否轉錄出mRNA,應通過何種分子雜交方法實現
檢測目的基因是否導入用的是DNA-DNA分子雜交,檢測是否轉錄用DNA-RNA分子雜交,檢測是否翻譯用抗原-抗體雜交。
前兩者都是通過一條被標記的DNA單鏈作為基因探針來實現的。這個探針具體的做法就是:用目的基因轉錄出的mRNA為模板,以被放射性同位素標記的脫氧核苷酸為原料,用逆轉錄的方法合成一條被標記的DNA,然後把模板的mRNA給水解掉,這樣就得到一條被標記的DNA單鏈,這就是探針。它的特點就是可以和目的基因轉錄的mRNA互補配對(即能形成雜交帶),所以把探針放在受體細胞中如果發現有雜交帶產生,就說明目的基因轉錄了。
另外,這個探針也可以用來做DNA-DNA分子雜交,即檢測目的基因是否導入,方法:先取出受體細胞中DNA然後高溫變性成單鏈,把探針放進去,然後降溫復性,如果形成雜交帶說明,這些DNA中有能和探針互補的DNA片段,即目的基因。因為這個探針本身就是由mRNA逆轉錄來的,它的鹼基序列與目的基因的一條鏈完全相同,當然就可以和另外一條鏈剛好互補了。
這樣可以嗎?