蛋白質還有哪些檢測方法

⑴ 實驗室測定蛋白質分子量的方法有哪些

測定蛋白質分子量的常用方法：

粘度法、凝膠過濾層析法、凝膠滲透色譜法、SDS-凝膠電泳、滲透壓法、質譜法包括電噴霧離子化質譜技術和基質輔助激光解吸電離質譜技術、光散射法（多角度激光散射）、沉降法（超速離心法）。

1、粘度法

一定溫度條件下，高聚物稀溶液的粘度與其分子量之間呈正相關性，隨著分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。通過測定高聚物稀溶液粘度隨濃度的變化，即可計算出其平均分子量(粘均分子量)。

如果高聚物分子的分子量愈大，則它與溶劑間的接觸表面也愈大，摩擦就大，表現出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之間的經驗關系式為：

8、電噴霧離子化質譜技術

電噴霧離子化質譜技術（ESI-MS）是在毛細管的出口處施加一高電壓，所產生的高電場使從毛細管流出的液體霧化成細小的帶電液滴，隨著溶劑蒸發，液滴表面的電荷強度逐漸增大，最後液滴崩解為大量帶一個或多個電荷的離子，致使分析物以單電荷或多電荷離子的形式進入氣相的質譜技術。ESI-MS 測定蛋白質大分子是根據一簇多電荷的質譜峰群，通過解卷積的方式計算得到蛋白質的分子量，由於ESI-MS可以產生多電荷峰，因此使得測試的分子質量范圍大大擴大。

優缺點：（1）對樣品的消耗少，不會造成樣品的大量浪費；（2）對樣品分子質量測試靈敏度、分辨力和准確度都相當高；（3）能夠方便地與多種分離技術聯用，如毛細管電泳、高效液相色譜等，是解決非揮發性、熱不穩定性、極性強的復雜組分化合物的定性定量的高靈敏度檢測方法。

9、基質輔助激光解吸電離質譜技術

基質輔助激光解吸電離質譜技術（MALDI-MS）是將待測物懸浮或溶解在一個基體中，基體與待測物形成混晶，當基體吸收激光的能量後，均勻傳遞給待測物，使待測物瞬間氣化並離子化。基體的作用在於保護待測物不會因過強的激光能量導致化合物被破壞。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜，基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子，而電離過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子，而使生物分子電離的過程。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比（M/Z）與離子的飛行時間成正比，檢測離子。

優缺點：（1）同ESI-MS 一樣對樣品的消耗很少；（2）隨著質量分析器的不斷改進、新的基質的不斷發現和應用以及延遲萃取技術的使用，使得MALDI-MS 的最高解析度不斷提高，甚至超過ESI-MS；（3）MALDI-MS 單電荷峰佔主要部分，碎片峰少，非常有利於對復雜混合物的分析，且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發成分，降低了對樣品預處理的要求；（4）MALDI-TOF 質譜對生物大分子分子量的測定范圍是所有測試技術中最廣的。

⑵ 檢測蛋白質的方法

檢測蛋白質的方法如下：

1、凱氏定氮法：准備4個50mL凱氏燒瓶並標號，向1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品，另外兩個燒瓶作為對照，在每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物。

再加入濃硫酸，將4個燒瓶放到消化架上進行消化，之後進行蒸餾。全部蒸餾完畢後用標准鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量，直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色，即為滴定終點，結算出蛋白質含量。

它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯系在一起的物質。機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。蛋白質占人體重量的16%~20%，即一個60kg重的成年人其體內約有蛋白質9.6~12kg。

人體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸（Amino acid）按不同比例組合而成的，並在體內不斷進行代謝與更新。

⑶ 三種常用的蛋白質濃度測定方法

檢測蛋白質濃度，盡管看似簡單，但其中的機理卻頗為復雜。為了幫助大家正確選擇並輕松操作，以下是三種常用蛋白質濃度測定方法的原理及注意事項。

BCA（Bicinchoninic Acid）法

BCA法是近年來的熱門蛋白質定量方法。其原理是，在鹼性環境下，蛋白質與二價銅離子結合，還原為二價銅離子，隨後BCA與一價銅離子結合形成穩定的藍紫色復合物。該方法在562 nm處有較高的吸光值，與蛋白質濃度呈正比。不過，操作前需製作標准曲線。BCA法靈敏度高、操作簡單，適用於表面活性劑存在下的蛋白質濃度檢測，但若溶液中含有與銅離子反應的螯合劑或還原性試劑，結果將受影響。此外，檢測結果還會受到蛋白質內半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸含量的影響。

Bradford法

Bradford法由Bradford於1976年建立，其原理是帶負電的考馬斯亮藍染料與蛋白質中鹼性氨基酸相互作用。該方法在595 nm處有吸收峰，與蛋白質濃度呈正比。在使用Bradford法時，需注意以下事項：

1. 製作的標准曲線並非直線，需將待測蛋白質濃度稀釋或濃縮至線形部分方可計算。

2. 高濃度去垢劑會影響Bradford法的准確性。可從BioEngX分享的protocol中了解干擾試劑及其濃度。

3. 可利用除595 nm以外的波長進行檢測，但需注意斜率和最低檢測限的變化。

紫外分光光度法

紫外分光光度法是一種簡單但不可靠的方法。通過測量蛋白質中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸在280 nm處的吸光值來估測蛋白質含量。該方法根據Beer-Lambert定律計算，但存在兩個問題：不同蛋白質的酪氨酸和色氨酸含量不同，且會受到核酸等物質的影響。盡管如此，該方法操作簡單迅速，多用於純化蛋白質的微量測定。