⑴ 細胞生物學實驗中細胞增殖的檢測方法
細胞生物學實驗中，細胞增殖的檢測方法多種多樣，主要可以分為四類：檢測細胞代謝活性、檢測ATP含量、活細胞熒游標記、增強標記檢測。
首先，檢測細胞代謝活性是反映細胞增殖的重要指標。乳酸脫氫酶在細胞增殖過程中活性增加，活性脫氫酶能將外源性四唑鹽或者阿爾瑪藍還原，形成帶有顏色的還原產物。通過分光光度計或酶標儀讀取含染料培養基的吸光度，以衡量細胞的代謝活性。四種常用的四唑鹽包括MTT、XTT、MTS和WST1，其還原產物為甲瓚。MTT商品名為噻唑藍，是黃色染料，具有廣泛的細胞類型適用性，但其生成的甲瓚晶體需要溶解在DMSO中，MTT主要作為終點檢測方法。XTT是MTT類似物，具有快速、簡便、敏感的優點，但其水溶液不穩定，需要低溫保存。MTS是一種新型的MTT類似物，具有無放射性、快速、安全、方便、靈活及特異性強的特點，克服了MTT、XTT的缺點。WST-1是水溶性四唑鹽試劑，與MTT或其他MTT類似產品相比具有更明顯的優點，如更穩定的甲瓚產物、更寬的線性范圍、更高的靈敏度和更強的溶解性，以及更靈活的檢測時間。CCK-8試劑則含有WST-8，更穩定、靈敏度更高、溶解性更強，更適合懸浮細胞和高通量葯物篩選。
其次，檢測ATP含量也是反映細胞增殖的有效方法。ATP是細胞能量的直接來源，其含量受到嚴格的調控。在細胞溶解物或提取物中測得的ATP濃度與細胞數之間存在嚴格的線性關系。ATP檢測方法包括成色反應、熒光、化學發光或同位素等，目前最廣泛使用的是基於螢火蟲熒光素酶的方法，熒光素酶催化熒光素氧化，消耗ATP，如果有ATP存在，則熒光素就會發光，發光效率極高，發光量與ATP含量呈良好的線性關系。
此外，活細胞熒游標記可以准確追蹤細胞增殖過程。羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺酯(CFSE)是一種可穿透細胞膜的熒光染料，能夠在活細胞內聚積並與胞內蛋白共價結合，水解後的CFSE釋放出熒光物質。當細胞分裂時，CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度降低。利用流式細胞儀分析熒光強度，可以追蹤細胞群體的增殖動態。
最後，增強標記檢測是利用特異性單抗來識別細胞增殖標志。例如，在人體細胞中，Ki-67、PCNA等蛋白可以作為細胞增殖的標志，但這種方法需要組織切片，適用於高通量分析的限制性較大。然而，這一方法在癌症研究領域受到青睞，因為它能夠檢測體內腫瘤細胞的增殖。