⑴ 流式細胞術檢測：細胞凋亡、細胞自噬、細胞因子、外泌體
流式細胞術(flow cytometry，FCM) 是一種高級細胞定量分析技術，以其快速、高精度、多參數和高通量的特點，廣泛應用於生物學和醫學研究中。以下是流式細胞術在細胞凋亡、細胞自噬、細胞因子檢測以及外泌體檢測中的應用。
在檢測細胞凋亡中，流式細胞術主要通過線粒體膜電位檢測和Caspase-3活性檢測來實現。線粒體膜電位檢測原理是利用熒光探針 JC-1 的聚集特性，正常細胞線粒體膜電位較高，JC-1形成聚合物並產生紅色熒光，而凋亡細胞線粒體膜電位降低，JC-1為單體，產生綠色熒光。通過檢測綠色和紅色熒光，可以定量分析線粒體膜電位的變化。Caspase-3活性檢測則是基於細胞內蛋白酶的級聯活化，通過檢測活化狀態的Caspase酶使底物發出熒光，以此量化凋亡細胞。
對於細胞因子的檢測，Cytometric Bead Array (CBA)技術被廣泛應用。CBA技術基於流式細胞檢測系統，能同時對單個樣品中的多個指標進行多重定量分析，實現樣本中細胞因子的精確檢測。
在細胞自噬檢測中，LC3-II作為自噬的生物學標記，其在自噬發生時位於自噬小體內。通過對比同型對照，分析平均熒光強度，可確定自噬的發生。
外泌體檢測則主要關注其特有的四次跨膜蛋白，如CD9、CD63和TSG101，外泌體表達的定性定量分析通過包被了抗體的珠子進行流式檢測實現。
最後，流式細胞術在科研和醫學研究中的廣泛應用，包括對照設置、儀器優化、陽性確定、實驗流程、標准化操作指南以及科研工具推薦等。這些內容涵蓋了流式細胞術的基本原理、應用技巧以及支持工具，是科研工作者不可或缺的知識庫。
⑵ 如何使用JC-1檢測線粒體膜電位
博凌科為生物科技-為你解答：線粒體膜電位的降低是凋亡的一個早期事件，5,5,6,6-tetrachloro-1,1,3,3- iodide (JC-1)可用於流式細胞術檢測線粒體膜電位的變化。正常細胞的線粒體膜電位電壓較高，可形成JC-1的聚集體，發出紅色熒光，而線粒體膜電位降低的細胞，則會形成JC-1單體，發出綠色熒光。材料： 細胞懸液 完全細胞培養基 去極化葯物：如0.1mM valinomycin或0.25mM carbonyl cyanide m-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) in DMSO 1mg/ml JC-1儲存液（溶於DMSO），分裝成小包裝，在－20℃可保存1年。 PBS 具有488nm激發光源的流式細胞儀，配備525－590nm帶寬的濾鏡。JC-1染色： 收集2105的細胞，用預溫到37℃的新鮮完全培養基調整至1ml。制備陽性對照（以去極化葯物處理過的細胞）。標本和陽性對照的染色步驟相同。 融化1管JC-1儲存液，每1ml細胞懸液中通過邊振盪邊加的方式加入2.5L（終濃度：2.5ug/ml）。振盪細胞懸液直至標本形成均一的紅紫色。 JC-1在水相容易形成聚集體，所以需要邊振盪邊加。未用完的JC-1不要再保存至－20℃。 37℃避光保存10分鍾。 加入2ml PBS至細胞懸液中，500g室溫離心5分鍾，去上清。 以0.3ml PBS重懸細胞。上機取樣，注意獲取細胞的速度不要250至300細胞/秒。Fig1 HL-60 cells, (A) control and (B) depolarized (treated with 100 nM valinomycin), stained with 2.5 g/ml JC-1. Note the shift to the bottom and to the right by cells with depolarized mitochondria.Fig2 After incubation with 2.5 g/ml JC-1 at 37C, peripheral blood mononulear cells usually show a single population of monocytes, while here lymphocytes give rise to two separate peaks. This could indicate the presence of a functional heterogeneity within lymphocytes (A). Such a phenomenon, however, is not always present. Treating cells with valinomycin results in a loss of orange signal either from lymphocytes or from monocytes (B).
⑶ 流式細胞儀檢測線粒體膜電位如何分析
一般是使用JC-1或者rhodamin123來測量的，前者是看紅綠的比值，而後者是看綠色的強度。