菌落總數是指樣品經過處理，在一定條件下培養後所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數，是最常用的微生物檢測項目。（FilmplateTM Aerobic BB202）是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計數時間和增強計數效果。本產品適合於各類食品及食品原料中菌落總數的測定，也可用於檢測食品加工容器、操作台和其他設備表面的菌落總數。執行標准3方方圓生物：食品安全國家標准 食品微生物學檢驗菌落總數測定（GB 4789.2）。
操作方法:
1、樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質杯內，製成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內，振搖後成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2、接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數測試片（BB202）置於平坦實驗檯面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然後再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
3、培養：將測試片疊在一起放回原自封袋中並封口，透明面朝上水平置於恆溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。一般食品培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h；水產品培養溫度為30℃±1℃，培養48h。
Ⅱ 菌落總數檢測的注意事項與快速檢測技術！
食品安全事件頻發，民眾對食品安全的關注度日益提高，確保食品安全的關鍵在於建立科學的食品安全檢測技術。檢測方法的規范性是保障食品安全的重要環節，它要求檢測數據具有高准確度和可信度。食品中菌落總數反映了食品在生產過程中的衛生狀況，是判斷食品被細菌污染程度的重要指標。本文將分析國標法微生物檢測中菌落總數測定的傳統方法的注意事項，並重點介紹快速檢測技術在菌落總數檢測中的應用。
一、傳統檢測方法
在傳統檢測方法中，菌落總數的檢測流程和注意事項如下：
1. **流程圖**：具體流程圖請參考相關文獻或資料。
2. **注意事項**：
- **器皿及稀釋液**：所有用於檢驗的玻璃器皿必須徹底滅菌，並在滅菌前清洗干凈，避免殘留抑菌物質。每批樣品稀釋液需有空白對照，以檢測平皿、培養基或空氣污染的可能性。
- **樣品稀釋**：
- 樣品應無菌稱取或量取，並與滅菌稀釋液混合，充分振搖，製成1:10的稀釋液。對於固體樣品，最好剪碎後與稀釋液研勻。
- 根據食品衛生標准要求，將1:10稀釋液進行10倍系列稀釋，每一步都應確保菌體均勻分散，特別是在酸度較高的樣品中，需先調節PH值至中性。
- **平板接種與培養**：選擇適宜的稀釋度，將稀釋液加至滅菌平皿內，培養溫度應根據食品種類而定，一般為37℃或30℃，培養時間為48±2小時。
- **菌落計數**：在計數時應區分樣品殘渣與菌落，可向培養基中添加TTC染劑，便於觀測和計數，但濃度不宜過高，以免抑制菌落生長。
- **結果報告**：依據不同情況，報告平均菌落數乘以稀釋倍數，或根據菌落分布情況作相應調整。
二、快速檢測新技術
1. **3M測試片快速分析技術**：
- **概念**：3M測試片是一種便捷可再生的水化干膜，適用於細菌和真菌的計數。
- **檢測步驟**：只需三步即可實現快速准確測定，例如，通過計算紅色菌落的數量來評估菌落數。
- **結果判讀**：測試片上菌落的數量、分布及顏色深淺用於計數，包括無菌落、少量菌落、菌落數在特定范圍內的計數、菌落數超過計數范圍時的處理方法。
- **特點**：
- **工作效率提升**：顯著提高實驗室工作效率，帶來生產力的提升和效益的增加。
- **標准化方法**：品質穩定的快速測試片克服傳統方法的差異性。
- **國際認證**：得到全球權威機構的認可，確保檢測結果的可靠性和廣泛認可。
- **快速響應**：縮短檢測時間，快速提供測試結果。
- **HACCP認證**：適用於食品生產工藝中的關鍵控制點檢測，提供全面的解決方案。
2. **ATP熒光法**：
- **檢測原理**：利用生物發光法檢測總菌落數，基於螢火蟲的發光反應原理。
- **特點**：成本低、操作簡單、響應速度快，已廣泛應用於食品中菌落總數的測定。
3. **MTT法**：
- **檢測原理**：基於活體微生物線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原MTT形成結晶，間接反映活菌細胞數量。
- **應用實例**：用於巴氏消毒奶中活菌素的快速檢測，操作快速、靈敏度高。
- **特點**：檢測快速、靈敏度高。
4. **流式細胞術**：
- **檢測原理**：通過激光照射標記後的細胞產生特異熒光信號，對這些信號進行檢測和定量計算得出菌群總數。
- **特點**：快速、便捷、結果可靠、易於操作。
總結**：菌落總數檢測在食品安全中占據重要地位，傳統方法雖基礎但繁瑣，快速檢測技術提供了更為便捷、高效、經濟的解決方案。不同方法各有優勢，適用於不同場景，應根據實際情況選擇最適合的檢測技術。積極關注新技術的應用，將有助於實現檢測的精確、經濟、便捷和可靠。