⑴ 哪些技術可以檢測DNA的單鹼基的突變
DNA 序列最微小的變異也可能會造成深遠的影響。這些小的改變可能是疾病的根源或是一些傳染病耐受某些抗生素的原因。現代基因組學研究曾證實,成功治療一種疾病以及讓其迅速蔓延至整個身體,兩者之間有可能就僅是一個突變的差異。
現在,來自華盛頓大學和萊斯大學的研究人員開發出了一種新方法,可以檢測 DNA 的特定片段,並精確找到單個突變,這有可能幫助醫生診斷及治療諸如癌症和結核病等疾病。相關研究論文刊登在了近期出版的《歲斗自然-化學》(Nature Chemistry)雜志上薯高。
研究人員改進了從前的方法,新方案無需任何復雜的反應或是添加酶,它只需要利用 DNA 。這一方法能夠有力地檢測溫度變化及其他的環境改變,這意味著它非常適用於資源缺乏環境下的診斷應用。
DNA 是一類核酸生物分子,它賦予了所有生物獨特的遺傳特徵。在 DNA 雙螺旋鏈中,一連串的鹼基對編碼著我們的遺傳信息。隨著基因組學研究的進展,人們清楚地了解到,僅一個鹼基對的改變(突變、插入或刪除)都足以引發嚴重的生物學後果。可以此來解釋部分疾病發作,或是一些疾病對於常規抗生素治療不產生反應的原因。
例如,眾所周知耐葯結核病是嚴重威脅人類健康和生存的危險因素之一。它對抗生素耐葯通常是由於某一特異基因上的少數突變所導致。Seelig說乎手磨,如果一名結核患者對治療不產生反應,很有可能存在有突變。
現在,研究人員已具備了檢測這種突變的能力。
研究人員設計出了一些探針,它們可以辨認出靶 DNA 片段上的單鹼基對突變。藉助這些探針,研究人員能夠更詳細地尋找長達 200 個鹼基對的序列中的變異,而當前的方法只能檢測 20 個鹼基對 DNA 片段中的突變。
這項研究表明,研究人員可以更好地提高特異性。無論最好的特異性水平是什麼,他們最佳能夠獲得這一數值的平方。
針對一段懷疑帶有突變的 DNA 序列,研究人員設計出一些測試探針。為此,他們生成了與問題雙螺旋鏈互補的 DNA 序列。隨後,他們將探針和 DNA 序列放置到有鹽水的試管中混合,在那裡如果鹼基對完整它們會自然地彼此相互匹配。不同於以往的技術,探針分子檢測的是靶 DNA 雙螺旋鏈的突變,而非單鏈的突變,從而提高了特異性。
如果探針與靶 DNA 序列之間能夠完美的匹配,探針就會發射熒光。如果不發熒光,則表明兩者不匹配,靶 DNA 鏈中存在有突變。
研究人員已將該技術申請專利,並推動其商業化。他們希望能夠把它轉化為紙質診斷測試,使其能夠應用於世界上部分缺少醫療資源的地區。
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⑵ 6,dna點突變常用的檢測方法有哪些
1.限制性片段長度多態性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP):由DNA 的多態性,致使DNA 分子的限制酶切位點及數目發生改變,用限制酶切割基因組時,所產生的片段數目和每個片段的長度就不同,即所謂的限制性片段長度多態性,導致限製片段長度發生改變的酶切位點,又稱為多態性位點.最早是用Southern Blot/RFLP方法檢測,後來採用聚合酶鏈反應(PCR)與限制酶酶切相結合的方法.現在多採用PCR-RFLP法進行研究基因的限制性片段長度多態性.\x0d2.單鏈構象多態性(SSCP):是一種基於單鏈DNA構象差別的點突變檢測方法.相同長度的單鏈DNA如果順序不同,甚至單個鹼基不同,就會形成不同的構象.在電泳時泳動的速度不同.將PCR產物經變性後,進行單鏈DNA凝膠電泳時,靶DNA中若發生單個鹼基替換等改變時,就會出現泳動變位(mobility shift),多用於鑒定是否存在突變及診斷未知突變.
⑶ dna鑒定方法有哪些方法有哪些
DNA鑒定方法主要包括以下幾種:
1. 聚合酶鏈式反應(PCR)
解釋:PCR是一種在實驗室中快速擴增特定DNA片段的方法。通過特定的引物與DNA模板結合,利用酶的作用,進行鏈式反應,將特定的DNA片段大量復制。這種方法廣泛應用於DNA鑒定中,如親子鑒定、個體識別等。
2. 限制性片段長度多態性(RFLP)分析
解釋:RFLP是通過特定的限制性內切酶對DNA進行切割,產生特定的片段長度。不同的個體,由於DNA序列的差異,切割產生的片段長度和數量會有所不同,從而形成獨特的DNA圖譜。這種方法常用於遺傳病分析、種群遺傳學研究和法醫學中的個體識別。
3. 單核苷酸多態性(SNP)檢測
解釋:SNP是指DNA序列中單個核苷酸的變異。通過對特定位置的SNP進行檢測,可以確定個體的基因型。這種方法在基因組關聯研究中廣泛應用,也用於法醫學中的DNA鑒定,特別是復雜混合樣本的鑒定。
4. 序列分析
解釋:序列分析是通過測定DNA的鹼基序列來確定其特定的基因序列。這種方法可以用於鑒定特定的基因變異、基因突變等,對於遺傳病的診斷和法醫學中的個體識別具有重要意義。隨著測序技術的不斷進步,序列分析在DNA鑒定中的應用越來越廣泛。
以上四種方法是目前DNA鑒定中常用的技術手段,每種方法都有其特點和適用范圍,根據具體的需求和樣本情況選擇合適的鑒定方法。
⑷ 基因突變檢測方法
基因突變檢測方法:
1.
PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯醯胺凝膠上,短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象,一個鹼基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構,這種二級結構依賴於其鹼基組成,即使一個鹼基的不同,也會形成不同的二級結構而出刺同的遷移率。由於該法簡單快速,因而被廣泛用於未知基因突變的檢測。
2.
異源雙鏈分析法(HA)
HA法直接在變性凝膠上分離雜交的突變型一野生型DNA雙鏈。由於突變和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈DNA在其錯配處會形成一突起,在非變性凝膠中電泳時,會產生與相應的同源雙DNA不同的遷移率。該法與SSCP相似,所不同的是SSCP分離的是單鏈DNA,HA法分離的是雙鏈DNA,也只適合於小片段的分析。
3.
突變體富集PCR法(mutant-enriched
PCR)本法的基本原理是利用ras基因家族某個密碼子部位存在已知的限制性內切酶位點,如K-ras基因第12密碼子的BstNI位點,第13密古巴子有BgⅠⅡ位點。用鏈續二次的巢式PCR來擴增包括K-ras第12、13密碼子的DNA片段,在兩次擴增反應之間用相應的內切酶消化擴增的DNA片段,野生型因被酶切而不能進入第二次PCR擴增,而突變型則能完整進入第二次PCR擴增並得到產物的富集。