鑒別蛋白質的方法及其原理

『壹』 雙縮脲試劑鑒別蛋白質的原理！

蛋白質的肽鍵與雙縮尿類似，可與銅離子在鹼性環境下(雙縮尿試劑)生成紫色絡合物.稀氫氧化銅溶液(斐林試劑)有弱氧化性可與還原性糖中的醛基發生反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉澱。

雙縮脲試劑是一種用於鑒定蛋白質的分析化學試劑。它是一種鹼性的含銅試液，呈藍色，由0.1 g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01 g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製而成。

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雙縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的范圍為1～10mg蛋白質，適於精度要求不太高的蛋白質含量的測定，能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。

雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質包括在性質上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉澱。

參考資料來源：網路-雙縮脲試劑

『貳』 鑒別蛋白質的方法

先用雙向電泳，分離目的蛋白，然後打質譜，通過打出來前面幾個氨基酸序列，到蛋白質資料庫和蛋白組資料庫上比對，就能知道是什麼目的蛋白了。如果是新發現蛋白，可以比對est資料庫，得到該基因序列，然後再克隆出來。

『叄』 雙縮脲試劑鑒定蛋白質的原理

鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發生的是雙縮脲反應。雙縮脲反應實質是在鹼性環境下的銅離子與雙縮脲試劑發生的紫色反應。而蛋白質分子中含有很多與雙縮脲（h2noc－nh－conh2）結構相似的肽鍵，所以蛋白質都能與雙縮脲試劑發生顏色反應，可以用雙縮脲試劑鑒定蛋白質的存在。

『肆』 蛋白質的檢測方法及原理

1
磷酸化檢測可以用二級質譜啊，在正離子模式下，經過collision
cell後中性丟失了98dalton（ser和thr）或216dalton（tyr）的肽段就可能是含一個磷酸化位點的磷酸化肽段。
2
基本原理就是設計個t將目的蛋白留在柱子上或沉澱下來。

『伍』 檢測食品中蛋白質含量的原理和方法是什麼

一、蛋白質的檢測原理：

基於食品中蛋白質含量與食品中氮含量的比例關系換算的。如乳中蛋白質與氮含量的比值為6.38，大豆中蛋白質與氮含量的比值為5.71，普通食品中蛋白質與氮含量的比值為6.25。因此是通過測定食品中氮含量後再根據換算系數得到食品中蛋白質含量。

二、蛋白質的檢測方法：

1、凱氏定氮法：樣品在高溫濃硫酸的消化作用下，將樣品中的有機氮轉化為無機銨，待消化液冷卻後，加入過量的鹼，使無機銨轉化為揮發性的氨，再將氨蒸出後，利用鹽酸標准溶液滴定，最後根據消耗的鹽酸標液體積推算樣品中的氮含量。

2、杜馬斯定氮法：樣品在高純氧中充分燃燒的過程中，將氮元素轉化為氮氣或氮氧化物，再經過高溫銅的還原，使所有的氮轉化為N2，然後利用熱導檢測器檢測N2的含量來推算樣品中氮含量。因此杜馬斯定氮法也稱為杜馬斯燃燒法或燃燒定氮法。

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凱氏定氮法通過硫酸高溫消化，只能將有機氮轉化為無機銨，而對於硝態氮（如硝酸鹽、亞硝酸鹽）則不能轉化。因此凱氏定氮法適用於不含硝態氮的食品、農產品、化妝品、醫葯等。凱氏定氮法是由丹麥化學家凱道爾於1883年率先提出，由於設備要求簡單，自提出後便成為蛋白質測定的經典方法，廣泛運用於蛋白質檢測中。

杜馬斯燃燒法既能將有機氮轉化為N2,又能將無機的硝態氮轉化為N2。因此，杜馬斯的應用更為廣泛。杜馬斯定氮法是由法國化學家杜馬斯在1831年提出，雖然該法比凱氏定氮法早半個世紀提出，但由於當時設備條件難以滿足杜馬斯定氮法的要求，限制了其發展。

『陸』 測定蛋白質含量的方法有哪些,其原理各是什麼.

Bradford法測定蛋白質濃度
（一）實驗原理
雙縮脲法（Biuret法）和Folin—酚試劑法（Lowry法）的明顯缺點和許多限制,促使科學家們去尋找更好的蛋
白質溶液測定的方法.
1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Bradford法）,是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的.這種蛋白
質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點,因而正在得到廣泛的應用.這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定
法.
考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置（max）,由465nm變為595n
m,溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色.
在595nm下測定的吸光度值A595,與蛋白質濃度成正比.
Bradford法的突出優點是：
（1）靈敏度高,據估計比Lowry法約高四倍,其最低蛋白質檢測量可達1g.這是因為蛋白質與染料結合後產生
的顏色變化很大,蛋白質－染料復合物有更高的消光系數,因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比Lowry法要大的
多.
（2）測定快速、簡便,只需加一種試劑.完成一個樣品的測定,只需要5分鍾左右.由於染料與蛋白質結合的
大約只要2分鍾即可完成,其顏色可以在1小時內保持穩定,且在5分鍾至20分鍾之間,顏色的穩定性最好.
因而完全不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間.
（3）干擾物質少.如干擾Lowry法的K+、Na+、Mg2+離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不
干擾此測定法.

『柒』 鑒別蛋白質的方法有哪些，簡述其原理

遇鹽凝固，遇酸分解

『捌』 鑒定蛋白質有哪些方法

蛋白質含量的測定：
1 凱氏定氮法
根據氮在蛋白質分子中含量恆定（平均佔16%），因此測定出樣品中氮的含量後，即可求出樣品中蛋白質含量。
2 雙縮脲法
3 福林-酚試劑法
福林-酚試劑包括兩種試劑：鹼性銅試劑，磷鉬酸及磷鎢酸的混合試劑。鹼性銅試劑與蛋白質產生雙縮脲反應。這種被作用的蛋白質中的酚基（酪氨酸），在鹼性條件下易將磷鉬酸和磷鎢酸還原成藍色的鉬藍和鎢藍，所生成藍色的深淺，與蛋白質的含量成正比。在650nm和660nm波長下測定光吸收值，即可測定蛋白質含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸，色氨酸在280nm處左右具有最大吸收。由於在各種蛋白質中這幾種氨基酸含量差別不大，所以280nm的吸收值與濃度呈正相關。可用於蛋白質濃度的測定。