生物檢測大腸桿菌的方法

Ⅰ 大腸桿菌與大腸菌群檢測方法

進入無菌室步驟
1． 進入無菌室前應打開紫光燈進行滅菌，時間為0。5—1小時。
2． 關燈後0•5小時後放可進入。
3． 進入更衣間更換衣服，佩帶口罩、帽子、鞋套
實驗步驟
1， 進入無菌室後，先把酒精燈點燃，然後在用酒精棉進行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脫脂棉中製成）
2， 准備雙料管3根，單料管6根，培養皿7個。
3， 直接從原液中吸取10ml放入雙料管，（3根每根各10ml）
4， 再吸取原液1ml放入單料管中（3根每根各1ml）
5， 再吸取原液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
6， 再吸取原液1ml放入鹽水管中製成－1梯度的樣液
7， 更換一根吸管，從－1梯度的樣液吸取1ml樣液放入單料管中（3根每根各1ml）
8， 再吸取－1梯度樣液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
9， 再把每個培養皿中到入營養瓊脂平鋪底部搖允（注另作3個培養皿：空氣空白，把培養皿打開十分鍾倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。瓊脂空白，把培養皿中倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。鹽水空白，吸1ml生理鹽水放入培養皿中，倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。）
10， 把全部作好的放入培養箱中，溫度36C＋－1×C，大腸24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培養皿中的瓊脂凝固後反轉過來放入培養箱中）
11， 梯度：－1梯度為1ml原液加入9ml生理鹽水配成
－2梯度為1ml－1梯度樣液加入9ml生理鹽水配成
－3梯度－4梯度配製方法和－1、－2梯度的配製方法一樣
12， 如果大腸初發酵產生氣泡，用接種筆沾一個產氣的液在伊紅美蘭平板上畫之字形然後放入培養箱中36C，24H＋－2H 。（接種筆在每次使用前必須在酒精燈上消毒。所畫之形不能劃破伊紅美蘭瓊脂表面）
13， 取出後在用接種筆在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放入乳糖復發酵管中 ，然後再培養36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14， 再在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放到載玻片上作鏡檢。（方法見標准）
15， 只有鏡檢成紫紅色和乳糖復發酵管產氣同時成立的情況下，才能斷定這根管是不合格。
16， 清洗消毒這根試管前必須進行消毒黴菌，121C，0。5小時同時不能放氣。

Ⅱ 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法

菌落總數用平皿法,單位是個/ml(每毫升或毫克裡面有多少的完整的菌落),方法是:在無菌操作的前提條件下,吸取1ml的原液加入到9cm的平皿里,在倒入3-5ml(37℃)的營養瓊脂,在37℃的溫箱里培養24小時,取出來計算它的菌落單位總數就行.
大腸桿菌用發酵法,單位是MPN/100ml(每100毫升或毫克的樣品裡面最大可能菌落形成單位)方法是15管法(適合食品)或9管法(適合非食品如游泳池水),用乳糖膽鹽發酵管
致病菌用培養法,只要符合相應的化學，生物試驗就可以判斷為某致病均陽性

Ⅲ 大腸桿菌的檢測方法有哪些

大腸桿菌的檢測方法有以下幾種：一、大便常規化驗加大便潛血化驗，如果化驗結果提示有細菌感染，那麼就需要完善大便培養加葯敏試驗，進一步明確感染細菌的類型和敏感抗生素類型，從而可以作為大腸桿菌的一種監測方法。二、肛門或者直腸內分泌物化驗，也可以作為大腸桿菌這種細菌的一種監測手段。三、大腸桿菌還可以在其他部位出現，比如口腔、胃部、呼吸道等，如果在口腔，進行口腔內分泌物化驗可以化驗出大腸桿菌感染，如果在胃部，進行胃鏡檢查後病例組織活檢可能檢出大腸桿菌。如果是呼吸道，進行痰培養加葯敏試驗，可以化驗出大腸桿菌。總之大腸桿菌的檢測通常都是標本化驗發現的。

Ⅳ 微生物檢測-大腸桿菌

大腸菌群測定的操作細則(***研究所測試中心)
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
1 設備和材料
1.1 溫箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恆溫水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 顯微鏡。
1.6 均質器或乳缽。
1.7 平皿:直徑為90mm。
1.8 試管。
1.9 吸管。
1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。
1.11 玻璃珠:直徑約5mm。
1.12 載玻片。
1.13 酒精燈。
1.14 試管架。
2 培養基和試劑
2.1 乳糖膽鹽發酵管:按GB 4789.28中4.9規定。
2.2 伊紅美藍瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規定。
2.3 乳糖發酵管:按GB 4789.28中4.10規定。
2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規定。
2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規定。
2.6 生理鹽水。
2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規定。
3 操作步驟
3.1 檢樣稀釋
3.1.1 以無菌操作將檢樣25mL(或g)放於有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。
3.1.4 根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2 乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3 分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4 證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5 報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
4 糞大腸菌群(faecal coliform)
4.1 用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於EC肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2 結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。

Ⅳ 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的

大腸桿菌檢測方法分為三種：

1、細菌分離鑒定法

分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌，然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。

37℃孵育18～24小時後，觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。

2、衛生細菌學檢查法

大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，則表示樣品被糞便污染的越嚴重，表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。

大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。

3、全自動微生物定量分析儀（TEMPO）檢測法

全自動微生物定量分析（TEMPO）儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。

TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。

(5)生物檢測大腸桿菌的方法擴展閱讀：

大腸桿菌在生物技術中的應用

這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分，所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出，也不易導致生化危機。

生物工程用的菌株基因組都被優化過，使之帶有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用於分子克隆實驗。

真核基因在大腸桿菌中表達，必須有合適的表達載體(Vector),常用載體：pBV220,pET系統。

目的基因在大腸桿菌中表達的情況：

大腸桿菌更適合原核基因的表達，外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的，外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡，單個細胞的產量又與外源基因拷貝數，基因表達效率，表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。

Ⅵ 生物上的常用的滅菌方法和鑒別大腸桿菌。分離色素的原理

主要有3種 分別是灼燒滅菌 高溫蒸汽滅菌 乾熱滅菌
大腸桿菌測定
伊紅美藍平板上典型大腸桿菌菌落接種到營養瓊脂平板，在(36土1)℃培養18h -24 h 。每個平板至少挑選2個菌落。挑取上述菌落純培養物接種3.6.3生化培養基和乳糖發酵管，(36士1)0C培養24h 後觀察結果。

大腸桿菌與非大腸桿苗鑒別試驗方法

靛基質試驗:
滴加Kovacs氏靛基質試劑0.1 m L於靛基質試驗培養基中混合，靜置，觀察結果。
出現紅色環的為反應陽性;出現黃色環的為反應陰性。

甲基 紅(MR)試驗:
滴加甲基紅指示劑0.2 m 1於MR-VP培養基中混合，觀察結果。
出現紅色為陽性反應;出現黃色為陰性反應。

維 培(VP)試驗:
滴加VP試劑甲液0. 2 mL於MR-VP培養基中混勻，再滴加VP試劑乙液0.1mL混勻，靜置，觀察結果。在15min內出現紅色的為陽性反應;無顏色變化的為陰性反應。陰性結果1h後再觀察一次出現紅 色也為陽性反應。

西蒙氏檸檬酸鹽試驗:觀察培養基顏色變化，出現藍色為陽性反應;不變色為陰性反應。

大腸桿菌鑒定結果
靛基質 MR VP 西蒙氏檸檬酸鹽 鑒定
＋
－ ＋
＋ －
－ —
－ 典型大腸艾希氏桿菌
非典型大腸艾希氏桿菌
＋
－ ＋
＋ －
－ ＋
＋ 典型檸檬酸鹽桿菌
非典型檸檬酸鹽桿菌
－
＋ －
－ －
－ ＋
＋ 典型產氣腸桿菌
非典型產氣腸桿菌

如出現表1以外的生化反應類型，表明培養物可能不純，應重新劃線分離，必要時做重復試驗。

結果報告
1M Vic 試 驗結果為++一一、一+一一和乳糖發酵管產氣者，查其EC肉湯產氣管數及其稀釋倍
數，對照附錄B(資料性附錄)中MPN檢索表報告樣品中大腸埃希氏桿菌MPN /a (mL)值