液體菌種雜菌檢測方法

① 液體菌種的質量標准

根據楊慶堯教授提出的液體菌種的質量標准，結合筆者的研究及生產實踐，認為生產出的液體菌種應達到如下要求：
①純度。經顯微鏡檢查和平板培養無雜菌。目測方法是無法保證純度的。
②菌絲量。經3000轉離心10分鍾，菌泥達20～25克/毫升以上。
③菌球數（片）有一定要求，宜在700～800個/毫升。菌球數多，萌發點多，才能在栽培後發菌快。
④菌齡。必須處在增殖生長期，鏡檢菌絲著色深，內含物多，泡囊較少，鎖狀聯合清晰。這個時期的菌絲生命力旺盛，否則菌種活力差。
⑤菌液在使用前不分層（菌球不下沉）、不產氣。
不經檢測的液體菌種，無法保證其菌種質量，使用時應慎重。

② 液體香菇菌種怎麼製作

液體菌種的製作及使用方法液體菌種的製作及使用方法隨著食用菌生產的發展,食用菌制種方法在傳統固體製作的基礎上在不斷的改進和提高,其中液體菌種的製作便是其中之一。 液體發酵技術是現代生物技術之一，起源於美國。它是指在生化反應器中，模仿自然界將食葯用菌在生育過程中所必需的糖類、有機和無機含有氮素的化合物、無機鹽等一些微量元素以及其它營養物質溶解在水中作為培養基，滅菌後接入菌種，通入無菌空氣並加以攪拌，提供食用菌菌體呼吸代謝所需要的氧氣，並控制適宜的外界條件，進行菌絲大量培養繁殖的過程。工業化大規模的發酵培養即為發酵生產，亦稱深層培養或沉沒培養。液體菌種由於具有生產規模化、控制自動化、生長無菌化、發菌高速化的生產應用優勢,為食用菌產業化的發展提供了良好的種源條件,是食用菌產業化發展的必然方向,已被業內人士所看好。液體菌種是用液體培養基培養而成的菌種。近年來，國內外正積極研究液體菌種的培養與利用。與固體菌種相比，它具有菌種生產周期短、菌齡整齊一致、接種方便、接於固體菌料發酵快、適宜於工廠化生產等優點，因而受到了廣大栽培者的歡迎。目前我國已能進行深層發酵的食用菌有：香菇、平菇、鳳尾菇、美味側耳、鮑魚菇、金針菇、黑木耳、猴頭、草菇、蜜環菌、茯苓、滑菇和冬蟲夏草等。一、液體菌種的培養方法常見的有採用搖床來生產的搖瓶培養法和採用發酵罐來生產的深層培養法。若少量生產，可以用搖瓶培養法。深層培養需要一整套工業發酵設備，如鍋爐、空氣壓縮機、空氣凈化系統、發酵罐等，故投資大，只適用於工廠化的大規模生產。而搖瓶培養投資少，設備技術簡單，適合一般菌種廠生產使用。本節主要介紹搖瓶培養的技術方法。1、食用菌液體發酵的培養基根據培養基中組成的不同，可分為天然培養基和合成培養基。天然培養基的組成均為天然有機物。合成培養基則是採用—些已知化學成分的營養物質作培養基。在生產上，還根據工藝將培養基分為孢子培養基、種子培養基及發酵培養基。游肢但無論如何劃分，廳磨凱每一種培養基的組成中都離不開碳、氮、無機鹽、微量元素、維生素和生長素等。 1.1、碳、氮比(C/N)碳、氮比指碳源及氮源在培養基中的含量比。構成菌絲細胞的碳、氮比通常是：8~12:1。由於菌絲生長過程中，一般需50%的碳源作為能量供給菌絲呼吸，另50%的碳源組成菌體細胞。因此培養基中理想碳、氮比的理論值為16~24:1。在液體培養中以菌絲增殖為目的的培養，通常碳、氮比以20:1為宜。雖然食用真菌的液體培養一般要求較高的碳與氮比，即C:N＝20:1左右生長較好，但許多菌種也能在較寬的碳、氮比范圍內生長。不同的菌種所要求合適的碳、氮比，可通過實驗求得。 1.2、無機鹽與微量元素許多無機鹽及微量元素對菌種的生理過程的影響與其濃度有關。不同的菌種，對無機鹽及微量元素要求的最適濃度也不同。 1.2.1．磷 磷是細胞中核酸、核蛋白等重要物質的組成部分，又是許多輔酶(或輔基)高能磷酸鍵的組成部分。磷是食用菌液體發酵不可缺少的物質，常加入磷酸二氫鉀以提供磷，加入量大約為0.1%~0.15%。1.2.2．鎂 鎂在細胞中起著穩定核蛋白、細胞膜和核酸的作用，而且是—些重要酶的活化劑，是食用真菌液體培養中不可缺少的營養成分。一般通過加入硫酸鎂以提供鎂，濃度通常是0.05%~0.075%。1.2.3．鉀、鈣、鈉 鉀不參與細胞結構物質的構成，但控制原生質的膠態和細腦膜的透性。鈣離子與細胞透性有關。鈉離子能維持細胞滲透壓，鈉離子可以部分代替鉀離子的作用。三種物質需求量甚微，若採用天然培養基，可不必另加。1.2.4．硫、鐵 硫是菌體細胞蛋白質的組成部分(胱氨酸、半胱氨酸及蛋氨酸中皆含硫)，鐵是細胞色素、細胞色素氧化酶和過氧化氫酶的組成部分，亦是菌體有氧代謝扮喚中不可缺少的元素。1.2.5．鋅、錳、鈷、銅 鋅、錳、鈷等離子是某些酶的輔基或激活劑。銅是多元酚氧化酶的活性基。在配製培養基時應注意，鎂和磷的添加不宜過多，否則會帶來危害。菌體對鋅、錳、鈷、銅等微量元素的需求量甚少，一般天然有機原料中均有，不必另加。碳酸鈣本身不溶於水，但可以調節培養其中的酸鹼度。磷酸鹽與碳酸鈣不宜混合滅菌，否則會形成不溶於水的磷酸鹽，使可溶性的磷酸鹽濃度大大降低。 1.3、維生素維生素在細胞中作為輔酶的成分，具有催化功能。大多數食用真菌的培養都與B族維生素有關，維生素B1是目前已知對絕大多數食用真菌生長有利的維生素。其適宜濃度在50~1000μg/L之間。 2、搖瓶振盪培養技術培養液配製好後，裝入500mL容量的三角燒瓶中，每瓶裝量為100mL，並加入0～15粒小玻璃珠，加棉塞後再包紮牛皮紙封口，在1.5kg/cm2壓力下滅菌30分鍾，取出冷卻到30℃以下時，接入一塊約2平方厘米的斜面菌種，於23℃～25℃下靜置培養48小時，再置往復式搖床上振盪培養，振盪頻率為80～100次/分，振幅6cm～10cm。如果用旋轉式搖床，振盪頻率為200～220轉／分。搖床室溫控制在24℃～25℃，培養時間因菌類不同而異，一般是在7天左右。培養結束的標準是：培養液清澈透明，液中懸浮著大量小菌絲球，並伴有各種菇類特有的香味。二、液體菌種的檢驗方法對液體菌種進行檢驗可採用感官檢查和取樣測驗相結合的方法。2.1. 感官檢查 可採用「看、旋、嗅」的步驟進行檢查。看：將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度，正常發酵醪液呈黃色或黃褐色，清澈透明，菌絲顏色因菌種而異，老化後顏色變深；染雜菌的醪液則混濁不透明。二看菌絲形態和大小，正常的菌絲大小一致，呈球狀、片狀、絮狀或棒狀，菌絲粗壯，線條分明；而染雜菌後，菌絲纖細，輪廓不清。三看上清液與沉澱的比例，菌絲體佔比例越大越好，較好的液體菌種，在瓶中所佔比例可達80%左右。四看pH值指標是否變色，在培養液中加入甲基紅或復合指標劑，經3～5天顏色改變，說明培養液pH值到達4.0左右，為發酵點；如果在24小時內即變色，說明因雜菌快速生長而使培養液酸度劇變。五看有無酵母線，如果在培養液與空氣交界處的瓶壁上有灰色條狀附著物，說明為酵母菌污染所致，此稱為酵母線。旋：手提樣品瓶輕輕旋轉一下，觀其菌絲體的特點。醪液的粘稠度高，說明菌種性能好；稀薄者表明菌球少，不宜使用。菌絲的懸浮力好，放置5分鍾不沉澱，表明菌種生長力強；反之，如果菌絲極易沉澱，說明菌絲已老化或死亡。再次觀其菌絲狀態，大小不一，毛刺明顯，表明是供氧不足；如果菌球縮小且光滑，或菌絲纖細並有自溶現象，說明污染了雜菌。嗅：在旋轉樣品後，打開瓶蓋嗅氣味。培養好的優質液體菌種，均具有芳香氣味；而染雜菌的培養液則散發出酸、甜、霉、臭等各種異味。2.2. 取樣測驗 可取液體菌種進行稱重檢查和粘度檢查；生長力測定和出菇試驗；化學檢查，包括測pH值、糖含量和氧含量等；顯微檢查，包括細胞分裂狀態觀察、普通染色和特殊染色等。三、液體菌種的使用方法液體菌種可作原種使用，也可作栽培使用。3.1. 作原種 取一支100ml。獸用注射器，去掉針尖，換一根內徑1mm～2mm，長100mm～120mm的不銹鋼鋼管，製成一個菌種接種器。使用前，洗凈接種器並用紗布包好，經高壓蒸汽滅菌，冷卻後抽取液體菌種即可進行接種。經滅菌待接入菌種的原種瓶，先要在無菌條件下去掉棉塞，並改換無菌薄膜包紮瓶口。接種時，將針管插入瓶口上的薄膜，每瓶接種量為10mL～１5ml，要注意使液體菌種均勻分布在培養基表面，拔出針管後要立即用膠布貼封針孔，豎放在培養室的床架上進行培養。3.2. 作栽培種或直接進行栽培 液體菌種在作栽培使用時，瓶栽的每瓶接種量為10mL～15mL；熟料袋栽的每袋接種量為，小袋10mL～15mL，大袋的20mL～30mL；開放式床栽的，每平方米接種量為500mL～1000mL，不需要接種針筒，可直接均勻灑在培養料面，或進行穴播。

③ 液體菌種如何培養製作

液體菌種是用液體培養基培養而成的菌種。近年來，國內外正積極研究液體菌種的培養與利用。與固體菌種相比，它具有菌種生產周期短、菌齡整齊一致、接種方便、接於固體菌料發酵快、適宜於工廠化生產等優點，因而受到了廣大栽培者的歡迎。目前我國已能進行深層發酵的食用菌有：香菇、平菇、鳳尾菇、美味側耳、鮑魚菇、金針菇、銀耳、黑木耳、猴頭、草菇、蜜環菌、茯苓、滑菇和冬蟲夏草等，其中應用多的是香菇和平菇。

(一)液體菌種的培養方法

常見的有採用搖床來生產的搖瓶培養法和採用發酵罐來生產的深層培養法。若少量生產，可以用搖瓶培養法。深層培養需要一整套工業發酵設備，如鍋爐、空氣壓縮機、空氣凈化系統、發酵罐等，故投資大，只適用於工廠化的大規模生產。而搖瓶培養投資少，設備技術簡單，適合一般菌種廠生產使用。本節主要介紹搖瓶培養的技術方法。

1.液體菌種培養基配方

(1)葡萄糖 3% 豆 粉 2%玉米粉 1% 硫酸鎂 0.05%磷酸二氫鉀 0.1% 酵母粉 0.5% 其餘為水 pH值 自然 本配方適用於多種食用菌的液體培養。

(2)可溶性澱粉 3～6% 蔗糖 1%硫酸鎂 0.15% 酵母膏 0.1% 其餘為水 pH值調至6 本配方適用於平菇、香菇、草菇、猴頭和黑木耳等的液體培養。

(3)玉米澱粉 3% 磷酸二氫鉀 0.1%玉米漿 1.2% 硫酸鎂 0.07% 其餘為水 pH值調至5 本配方適用於香菇。

(4)玉米粉 50g 麥芽汁 100ml瓊脂 0.5g 維生素B1 100ug水 850ml pH值自然 本配方適用於平菇。

2.搖瓶振盪培養技術

培養液配製好後，裝入500mL容量的三角燒瓶中，每瓶裝量為100mL，並加工0～15粒小玻璃珠，加棉塞後再包紮牛皮紙封口，在1.5kg/cm2壓力下滅菌30分鍾，取出冷卻到30℃以下時，接入一塊約2平方厘米的斜面菌種，於23℃～25℃下靜置培養48小時，再置往復式搖床上振盪培養，振盪頻率為80～100次/分，振幅150px～250px。如果用旋轉式搖床，振盪頻率為200～220轉／分。搖床室溫控制在24℃～25℃，培養時間因菌類不同而異，一般是在7天左右。培養結束的標準是：培養液清澈透明，液中懸浮著大量小菌絲球，並伴有各種菇類特有的香味。

④ 香菇菌種怎樣培養出來的

自然界里，食用菌都不是單獨存在的，而是和許多細菌、放射菌、黴菌等生活在一起的。所謂菌種分離，就是把這些和食用菌一起生活的雜菌分離出來，通過培養，獲得純的優良菌種。菌種分母種、原種、栽培種。
(一)母種的分離培養
食用菌母種的分離，可分為孢子分離法、組織分離法以及基內菌絲分離等。
1.孢子分離法
孢子分離法，是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發成菌絲，培養成菌種的方法。這種菌種生活力較強，但孢子個體之間有差異，且自然分化現象較嚴重，變異大，需經出菇試驗才能在生產上應用。
(l)單孢分離法：是每次或每支試管只取一個擔孢子，
讓它萌發成菌絲體來獲得純菌種的方法。蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲，有結實能力，可採用此法分離生產純菌種。單孢分離生產上較少採用，而且技術復雜，一般採用多孢分離法。
(2)多孢分離法：就是把許多孢子接種在同一培養基上，讓它們萌發、自由交配來獲得食用菌純菌種的一種方法。具體操作方法，有以下幾種：
①種菇孢子彈射法：選擇個體健壯、朵形圓正，無病蟲害、出菇均勻、高產穩產，適應性強的八九分成熟的種菇，切去大部分，菌柄用無菌水沖洗數遍後再用已滅菌的紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分。在接種箱或無菌室內，把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面，漏鬥倒蓋在培養皿上面;上端小孔用棉花塞住。培養皿放在一個鋪有紗布的搪瓷盤上，靜置12～20小時，菌褶上的孢子就會散落在培養皿內。形成一層粉末狀孢子印(平菇極淡紫色，蘑菇、草菇
為褐色，香菇、金針菇孢子印白色)。用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養皿上劃線接種。待孢子萌發，生成菌落時，選孢子萌發早、長勢好的菌落進行試管培養。
還可用孢子採集器收集孢子。方法是選好種菇後，按上述程序，輕輕掀開玻璃鍾罩，將種菇柄朝下插在孢子採收器的鋼絲架上，放在培養皿正中央。隨即蓋好玻璃罩，用紗布將鍾掌周圍塞好。並在紗布上倒少許升汞或無菌水。移入
20℃左右恆溫箱培養。
②褶上塗抹法：按無菌操作分離時;應選擇成熟的種菇，用接種針直接插入褶片之間，輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子，再在培養基上劃線接種。
③鉤懸法：取成熟菌蓋的幾片菌褶或一小塊耳片(黑木耳、毛木耳、白木耳〕，用無菌不銹鋼絲(或鐵絲、棉線等其他懸掛材料)懸掛於三角瓶內的培養基的上方，勿使接觸到培養基或四周瓶壁。置適宜溫度下培養、轉接即可。
④貼附法：按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊，
用溶化的瓊脂培養基或阿拉伯膠、漿糊等貼附在配管斜面培養基正上方的試管壁上。經6～12小時的培養，待孢子落在斜面上，立即把孢子連同部分瓊脂培養基移植到新的試管中培養即可。
孢子分離得到的母種、必須進一步提純復壯，當母種定植一星期左右，菌絲布滿斜面時，選擇菌絲健壯、生長旺盛無老化、無感染雜茵的母種試管，進而轉管擴大，一般到栽培種，轉管不宜超過5次。
孢子分離得到的母種，必須通過出菇試驗，鑒定為優質菌種後，才可供生產使用。
一般菌類如蘑菇、平菇、鳳尾菇、香菇、冬菇和草菇等，都可用多孢分離法獲得母種。
現就銀耳孢子分離略述於下：
按無菌操作獲取種耳後，懸掛種耳的三角瓶經12小時培養後，瓶底培養基表面就有"孢子印"。取出種耳，置
20℃—25℃溫箱培養2～3天，培養基表面會出現乳白色透明的糊狀小菌落，就是銀耳的酵母狀分生孢子形成的少量銀耳菌絲。此時移接入試管斜面培養基上，待長滿斜面後，再移接入營養豐富，且表面比較乾燥的培養基上。經30天左右，菌落長出白色菌絲。
銀耳的酵母狀分生孢子、菌絲只有與羽毛狀菌絲的子囊菌(香灰菌絲)混合培養時，由後者幫助分解木材及其他一些纖維物質，提供營養，才能利於銀耳孢子萌發，菌絲的定植和子實體的形成。
在兩種菌絲交會時，先選出兩種純菌絲。
羽毛狀菌絲要純化選育，一般要選取生長迅速，爬壁力強的試管斜面或種瓶，取先端菌絲，轉管移接，置25℃—28℃上培養，重復轉管幾次即可得到優良純種。
銀耳菌絲的特點，菌絲生長緩慢，擔孢子也不易萌發。在進行兩菌混合時，先取經8～IO天培養的銀耳菌絲斜面，按無菌操作方法在該斜面上距銀耳菌絲約0.5厘米處接入一
小塊羽毛狀菌絲。置25℃下培養1周即得到混合好的銀耳母種。
2.組織分離培養法
利用子實體內部組織，進行無性繁殖而獲得母種的簡便方法，即組織分離。該法操作簡便，菌絲生長發育快，品種特性易保存下來，特別是雜交育種後，優良菌株用組織分離法能使遺傳特性穩定下來。常採用以下分離方法。
(l)子實體分離：種菇要選朵大蓋厚，柄短，八九分成熟的優良品種。切去菇兩基部，在無菌箱內以0.1%的升汞水浸幾分鍾，再用無菌水沖洗並揩乾或用75%酒精棉球擦拭菌蓋與菌柄2次，進行表面消毒。接種時，只要將種菇撕開，在萌蓋和菌柄交界處或菌褶處，挑取一小塊組織;移接
到PDA培養基上。置25℃左右溫度下培養3-5天，就可以看到組織上產生白色絨毛狀菌絲，轉管擴大即得到菌種。如香菇、平菇等可以用此方法。
(2)菌核分離：茯苓、豬苓、雷丸等菌的子實體不易採集。而常見的是它貯藏營養的菌核。用菌核分離，同樣可以獲得菌種。方法是將菌核表面洗凈，用酒精或升汞消毒後，切開菌核，取中間組織一小塊，約黃豆大小，接種在PDA
培養基斜面上，保溫培養。應注意的是，菌核是貯藏器官，大部分是多糖類物質，只含有少量的菌絲，因此挑取的組織塊要大一些，如果組織塊過小，則不易分出菌種。
(3)菌素分離：有一部分子實體不易找到，也沒有菌核，可以用菌素進行分離。如蜜環菌、假蜜環菌。其操作方法是先用酒精或升汞將菌素表面黑色皮層輕輕擦拭2～3次，
然後去掉黑色外皮層(菌鞘)，抽出白色菌髓部分;用無菌剪刀將菌髓剪一小段，接種在培養基上，保溫培養，即得該菌菌種。
菌素分離要注意：因菌素比較細小，分離素也比較細小，分離時極易污染雜菌，所以要嚴格操作。
3.基內菌絲分離培養法
利用食用菌生育的基質作為分離材料，來得到純菌種的一種方法，叫基內菌絲分離法。
此種分離方法是適宜只有在特定的季節才出現，而且是朝生暮死，不易採得的子實體。基內分離法與組織分離法不同之點是，乾燥的菇木或耳木中的菌絲常呈休眠狀態。接種後有時並不立刻恢復生長。因此，有必要保留較長的時間(約1個月)，以斷定菌絲是否能成活。基內菌絲分離法又可分為，材中菌絲分離(即菇木或耳木分離法)及土中菌絲分離法等。
(1)材中菌絲分離法：就是菇木或耳木分離法，為了減少雜菌的感染，菇(耳)木在分離之前，必須進行無菌處理。可以把菇(耳)水表面用酒精燈火焰輕輕燒過，以燒死黴菌的孢子，或再用0.1%的升汞水浸孢幾分鍾，然後用無菌水沖洗後用無菌濾紙吸干。接種塊切取時應注意。接種塊必須在該菌菌絲分布的范圍內切取。所以，菌絲生長緩慢的種類應淺取;菌種生長快的種類可以深取。同時。還應根據菇菌的種類、木材質地、菇(耳)木粗細、發育時間的長短來確定菌絲分布的范圍。然後用一把利刀進行切取。接種塊應盡量小些，以減少雜菌感染機會，提離菌種的純度。接種塊移到培養基上，就應該放到適合菌絲生長的22℃～26℃
的溫室或溫箱中培養，使菌絲恢復生長。
(2)土中菌絲分離：食用菌種類很多，許多土生的食用菌;孢子不易萌發。組織分離也不易成功，用土中菌絲分離獲得純種的方法，叫土中菌絲分離。
土中菌絲分離時要注意，由於土中菌絲體的周圍生活著多種多樣的土壤微生物，因此分離時必須盡可能避開這些微生物的干擾，盡可能批取清潔菌絲素的尖端、不帶雜物的菌絲接種，反復用無菌水沖洗，在培養基中加入一些抑制細菌
生長的葯物，如
40微克/升的鏈黴素或金黴素。如發現感染細菌，可以把菌落邊緣的菌絲挑出來，接種到木屑培養基中。因細菌沒有分解木質素的能力，因此在木屑培養基中不易擴展;只局限於接種處。待菌絲長出感染區後，就可以再進行擴大提純了。
(3)子實體基部分離：從瓶栽、袋栽或大床栽培的子實體基部分離出新菌絲的方法，叫子實體基部分離，現以袋栽銀耳為例說明：
從出耳早、出耳率離、無病蟲害的栽培室中;選擇生活力最強的幼耳5袋，移到氣候溫和，有散射光的野外場所進行後期培養，以增強菌絲體的生活力。經培養7～10天後，待子實體直徑達4～5厘米時便可取回，作為分離的母體。再從中篩選最理想的一朵，用利刀割掉銀耳子實體，放置於
0℃的冰箱或有敵敵畏的容器中過夜，以便殺死瓶中的害蟲。然後用75%酒精或升汞擦洗耳基和袋子外邊的雜質，連同接種工具、接種培養基等移進無菌室。經滅菌後，用接種刀把袋口上部約15毫米厚的老菌根挖除，並進行培養。待袋口露出白色菌絲時，用接種針挑取一塊半粒米大的白色菌結體，迅速移入母種試管培養基的中央，輕輕地脫去接種針，
塞上棉塞。
為了能夠獲得較多的母種，一次接種量要有100—200支試管，以便從中選擇。分離後應及時移入22℃—24℃恆溫箱或溫室中培養。由於培養基內水分較多，菌絲恢復要比耳木分離得快。經2-3天後，分離物的邊緣就可看
到白色菌絲。每天要至少觀察兩次，以便提純。觀察、提純方法與耳木分離法擔同。經適溫培養10-15天後，當接種塊扭結團出現紅、黃色水珠時，即可擴大原種。
(二)原種和栽培種的接種培養
母種獲得以後，為了滿足菌種生產的需要。應選出優良、純度高的母種進一步擴大為原種。
原種培養基一般採用棉籽殼、木屑、草類等培養基。
瓶裝或袋裝的原種培養基滅菌後，可送入滅過菌的接種箱內，待瓶中的培養基冷至30℃以下，可按照無菌操作程序進行接種。
菌種瓶(袋)放入培養室時，要經常進行檢查，一經發現雜菌污染，立即取出。培養成的原種，菌絲體必須健壯有力，緊貼瓶壁而不幹縮，顏色純正，具有一定清香味，生活力強，擴製成栽培種時吃料快。
栽培種就是將原種進一步擴大培養成三級種，它和原種的接種及培養相同。一般香菇、平菇、冬菇、猴頭、木耳、銀耳的栽培種多用鋸木、棉皮作培養基。蘑菇多用糞草做培養料。
栽培種要求料塊不脫水干縮。菌絲體健壯有力、顏色純正，有清香味，無老化現象，無雜菌污染，有的種許可有少量原基，接入栽培料後，發菌快，長勢好，生活力強。
原種在接栽培種時，原種瓶口的一層菌絲體應挖去不用。
(三)液體種的簡單培養
目前，用液體深層發酵法生產菌種，具有生產量大、周期短、菌齡整齊、成本低廉、接種方便等特點，是實現食用菌工廠化生產的目標。現將液體種培育過程簡述於後，供參考。
簡言之就是將純正優良的菌種，接入液體培養基(固體培養基不加凝固劑)，使菌絲繁殖形成大量小菌球，然後將這種培養基拌入木屑或棉籽皮料內，製成菌塊、培養其形成子實體。還可用於制原種、栽培種。
培養液體菌種，可將培養液裝入三角瓶中，約占空瓶的五分之一重量。用搖瓶機(也稱搖床)來培養。搖瓶機有旋轉式和往復式兩種，一般多用往復式。液體培養基可用馬鈴薯汁(加糖)，麥芽汁配製，也可用玉米粉、豆餅粉、糖、無機鹽等配製。可以混合培養基，因適用於多種食用菌和葯用菌的培養，均有好效果。組分：豆餅粉2%，玉米粉1%，
葡萄糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣 0.2%， pH自然， 12℃滅菌半小時。然後接種培養。
如果生產量較大，在三角瓶的基礎上，再逐級擴大種子缸，發酵罐中進行液體深層通氣發酵，產生大量菌種。但由於生產中要求設備繁多，技術性強，我們還應創造條件;實現食用菌栽培的現代化。
(四)菌種質量的鑒定
菌種質量鑒定最好的方法是，做出菇試驗。但是時間比較長。在購置菌種時，或在菌種生產中，如何能知菌絲生長情況，快速判斷菌種質量?我們介紹幾種方法：
1.肉眼觀察：優良菌種菌絲濃白，絨狀，粗壯密集，生長整齊，速度快，香味濃厚。
2.優良菌種標准可歸納為："純、香、正、壯、潤"五個字。檢查時，打開瓶塞，從菌種瓶中部取出小塊菌絲體，觀察色澤，聞其氣味，手捏料塊檢查其含水量，看是否符合上述要求標准。
3.顯微鏡檢查：挑取少量菌絲，置顯微鏡上觀察其形態，菌絲分枝，分隔情況，鎖狀聯合，細胞膜的厚薄。
培養觀察：從菌種瓶中挑取小塊菌絲體，接種斜面試管培養基上，置23℃～25℃恆溫中培養，經五周後檢查菌種生活力。如果菌絲生長快，旺盛純一，健壯濃厚，長且整齊，則表示菌種的生活力強。
4.分塊法：在桌上放一張白紙，把菌齡相同的菌種從瓶內取出一大塊，用手分成2塊，再把2塊分成4塊，4塊
分成8塊，依次進行。優良菌種整塊多，碎渣少。劣次菌整塊少，碎渣多。
5.液體菌種鑒別：當三角瓶或發酵缸培養3-7天後，如液面出現氣泡，產生"油皮"、混濁等現象，說明菌種本
身帶有雜菌。如菌塊上浮，或遲遲長出很薄的菌絲層，則說明菌種生活力弱。白塊四周的菌絲生長快、濃白、棉絮狀，表明菌種生命力強。
(五)菌種生產過程中的雜茵防治
在生產菌種時，要時刻注意雜菌污染，以防為主，一旦發生，根治很不容易。所以整個制種過程都必須在無菌條件下進行。接種箱及所有分離、接種的用具、器皿，都要進行嚴格的消毒滅菌。工作人員的雙手要用消毒劑清洗，並穿戴消過毒的工作服、帽和口罩，動作要敏捷、准確，盡量不要講話走動，以防空氣中的雜菌感染。
分離母種時，選擇出菇早、生活力強，第一潮菇是關鍵，因它生活力強，接種後迅速佔領陣地，無雜菌侵入的機會。
被污染的菌種，原因是多方面的，一般是滅菌不徹底所致，或因接種時無菌操作不嚴、瓶蓋不合適造成的。所以滅菌一定要徹底，最好在接種萌將培養基置25℃左右溫箱中做效果檢查，經2天不長雜菌，說明徹底，可以使用，接種過程中一定要嚴格無菌操作。
污染雜菌另一個原因可能是分離母種時感染雜菌，因種菇表面帶菌，消毒不徹底，通過組織塊將雜菌帶入培養基。
總之，污染機會很多，要注意環境消毒，按無菌操作規程徹底滅菌，層層把關，環環抓緊，嚴加註意;提離菌種質量。