1. 細胞的支原體檢測——PCR 法
PCR 法是20 世紀80 年代中期建立起來的一種體外DNA 擴增實驗，其基本原理是酶促DNA 合成反應，即在DNA
模板、引物和脫氧核糖核酸存在下，經DNA 聚合酶的作用，使DNA
鏈擴增延伸。該實驗具有靈敏度高、特異性強、檢測快速的特點，但其對實驗環境要求嚴格， 實驗成本較高， 有時還會出現假陽性的現象。
（一）材料與設備
支原體PCR 檢測試劑盒、dNTP 、TaqDNA 聚合酶、緩沖溶液、瓊脂糖、礦物油、超凈工作台、PCR 儀、電泳儀、凝膠成像分析系統、台式離心機、旋渦混旋器等。
（二）操作步驟
1 樣品的收集。待測細胞用無雙抗培養液培養7d，用無菌容器取上清液500μl ,4℃ 保存待測。
2 . 模板的製作。在無菌的條件下， 取細胞培養上清1 00μl 於一無菌的0.5ml塑料離心管內，蓋好蓋子， 95 ℃ 水浴加熱5min 。
3. 打開蓋子，向管內加StrataClean Resin 10μl，蓋好蓋子，旋渦混懸器混合，離心5~ 10s, 吸取上清至一新的塑料離心管中，模板製作完畢， 4℃ 保存。
4. PCR 反應。反應體系的最適條件為10mmol/L Tris-HCI (pH 8.38), 50 mmol/L KCI, 1.5~ 2.5 mmol/L MgCl2，200 μmol/L dNTP, 2U Taq DNA 聚合酶，總反應體系為50μl ， 反應用去離子水均需用紫外燈照射。
（1）在0.5ml 塑料離心管中加入35.2μl 去離子水及5μl 10 xTaq 反應緩沖溶液。
（2）依次加入下列成分： 0.4μl dNTP (25mmol/L）、0.4μl Taq 酶(5U/μl ) 、2μl引物。
（3） 加2μl 去離子水， 總體積45μl 。
（4）加5μl 己製成的模板到反應體系中。
（5） 陽性對照，內對照各5μl 加入到各自的反應體系中。
（6） 取1支含有以上反應體系的離心管，加入5μl 去離子水作為陰性對照管。
（7） 在反應體系中加入100μl 礦物油。
（8）PCR 程序見表1 。
5.瓊脂糖凝膠電泳。PCR 反應結束後，進行瓊脂糖凝膠電泳，瓊脂糖凝膠濃度為2%。電泳結束後，凝膠成像分析結果。
6.結果分析。該方法為檢瀏支原體的定性方法，在電泳泳道上， Marker、陽性對照、內對照均會出現不同的電泳條帶， 當被檢樣品泳道出現明亮條帶，且位置在陽性對照和內對照條帶位置之間，即可認為該樣品被支原體污染 。
有時還會發現一條泳道出現多條，可能是該樣品感染2 種以上支原體所致。如果泳道內條帶隱約出現，則可懷疑有支原體污染，重做該樣品。
（三）注意事項
PCR 反應的前期操作應在無菌環境中進行。
注意假陽性、假陰性，有時需多次重復。