㈠ 臨床免疫檢驗常用的分析技術
一、免疫標記技術:2種分類
1.(1) 免疫組化技術(immunohistochemical technique): 用於組織切片或其他標本中抗原抗體的定位(2)免疫測定(immunoassay): 用於液體標本中抗原或抗體的測定.
2.(1) 免疫熒光技術 (2) 酶免疫技術 (3) 放射免疫技術(4) 金標技術(5)化學發光技術
酶免疫技術—固相酶免疫技術―酶聯免疫吸附測定(ELISA)
ELISA方法類型與操作步驟
雙抗體夾心法:檢測抗原最常用的方法
原理(操作步驟): (1) 特異性抗體包被載體形成固相抗體. (2) 洗去未結合的抗體和雜質. (3) 加入待測樣品,使其中相應抗原和固相抗體呈特異性結合成復合物. (4) 再洗滌除去未結合的物質.(5) 加酶標抗體,使之與固相上的抗原呈特異性結合.(6) 經充分洗滌後除去未結合的游離酶標記抗體.(7) 加入相應酶的底物,固相化的酶催化底物變成有色產物,顏色反應的程
度與固相上抗原的量有關.
適用范圍:檢測抗原的最常用方法 ,用此方法檢測的抗原,應至少有2個以上結合位點,故不能用以測定半抗原物質。
2、競爭法:(可用於測定抗原或抗體)
原理(操作步驟):以測定抗原為例(1) 將特異性抗體包被載體,使形成固相抗體,(2) 洗去雜質,待測孔中同時加待測標本和酶標記抗原,使之與固相抗體反應。如待測標本中含有抗原,則與酶標記抗原共同競爭結合固相抗體。待測標本中抗原量越多,酶標記抗原結合量越少(3) 洗滌除去游離酶標記物後,加底物顯色(4) 結果是不含受檢抗原的對照孔,其結合的酶標記抗原最多,顯色最深。對照孔與待測孔顏色深度之差代表受檢標本中的抗原量。待測孔越淡, 標本中抗原量越多。
3、間接法:(可檢測各種相應抗體)
原理(操作步驟):(1) 將特異性抗原包被載體,使形成固相抗原; (2) 洗去未結合的物質,加入待測樣品,使其中待測的特異性抗體與固相抗原相結合形成固相抗原抗原復合物;(4)再經洗滌後,固相上僅留下特異性抗體; (5) 加酶標抗人球蛋白(酶標抗抗體),使與固相復合物中抗體結合,從而使待測抗體間接標記上酶;(6) 洗滌除去多餘的酶標抗體,固相結合酶量就代表待測抗體的`量; (7) 最後加入底物顯色,其顏色深淺可代表待測抗體量。
免疫熒光法---抗核抗體的檢測
二、沉澱反應
可溶性抗原與相應抗體特異性結合所出現的反應。反應分為兩個階段:(1) 抗原抗體特異性結合;(2) 形成可見的免疫復合物。
三、凝集反應
細菌和紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合後,出現肉眼可見的凝集(agglutination)現象。
凝集反應的發生分為兩個階段:(1)抗原抗體的特異結合;(2)出現可見的顆粒凝聚。