⑴ 內毒素實驗一定要做鱟試劑復核實驗和干擾實驗嗎
您好，中國葯典二部附錄中的細菌內毒素檢查法中對這些有明確規定到，當使用新批次的鱟試劑時需要對其靈敏度進行復核，偏差范圍在50-200%，以廠家標識的靈敏度為准。復核後可以使用了，以後使用同批次鱟試劑就不要進行復核了。
當檢測的樣品是新樣品或樣品的生產工藝，原料等有改變的話，檢測該樣品前需要先進行干擾實驗，在確定樣品沒有干擾或經過一定的處理後對鱟試劑檢測內毒素的實驗沒有干擾了，才可以進行樣品的常規檢測，這樣檢測出來的結果才是准確。之後檢測同一樣品就不要在做干擾試驗。
⑵ 內毒素測定內毒素測定方法
內毒素測定方法主要包括凝膠法和多種定量檢測方法。
首先，凝膠法是基於鱟試劑與內毒素之間的凝集反應。通常，鱟試劑的規格為0.1ml/支或0.5ml/支，使用時需用除熱原水溶解。操作時，通過觀察是否有凝膠形成來判斷反應終點。這種方法簡便易行，經濟實惠，無需專用設備，適用於定性或半定量檢測。
其次，動態濁度法和終點濁度法是通過測量內毒素對光或光線的散射程度，隨時間變化的濁度變化來定量檢測內毒素。這種方法提供了連續的測量過程，精度較高。
動態顯色法與終點顯色法則利用內毒素與特定試劑反應後產生的顏色變化，通過對比標准曲線來確定內毒素的含量，是一種更為精確的定量檢測手段。
總的來說，以上這些方法各有特點，凝膠法適合初步篩查，而動態濁度法和顯色法則適用於需要精確定量的數據分析。
細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的復合物，當細菌死亡或自溶後便會釋放出內毒素。內毒素大量進入血液就會引起發熱反應—「熱原反應」。內毒素與多種感染疾病密切相關，病情惡化往往伴隨著內毒素含量的增加，病情緩解也常伴隨著內毒素含量的減少。因此，快速檢測（1小時）血液、臟器內毒素含量可以為臨床相關疾病的診斷預後提供參考。
⑶ 中國葯典和美國葯典中的細菌內毒素檢測法的不同點是什麼
1、細菌內毒素工作標准品（CSE）
CP： 對CSE的用途及效價進行定義「細菌內毒素工作標准品中每1ng細菌內毒素的效價應不小於2EU，不大於50EU」
USP：未提到CSE
2、細菌內毒素檢查用水
CP ： 與靈敏度為0.03EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑在37±1℃條件下24小時不產生凝集反應的滅菌注射用水；
USP：與鱟試劑在限定的靈敏度下不發生反應的滅菌注射用水或其它水。
3、實驗用具的准備
CP：實驗所用器皿需經處理，除去可能存在的外源性內毒素，常用的方法是250℃下干烤至少1小時，也可用其它確證不幹擾細菌內毒素檢查的適宜方法。
USP：使用經驗證的除熱原程序對所有玻璃器皿和遇熱穩定的材料在熱空氣烘箱中進行除熱原，常用的最低溫度和最少的時間是250℃下30分鍾。
4、內毒素標准品貯備液和標准品溶液的制備
CP： 未提到
USP：RSE的效價定為10,000USP EU/支，用5ml鱟試劑檢查用水復溶1支RSE的全部內容物，用漩渦混合器間歇混合30分鍾，並用此原液作系列稀釋，將原液置於冰櫃中保存不超過14天，作以後的稀釋之用，在使用前用漩渦混合器強力混合不少於3分鍾，在作下一步稀釋前需對前面的稀釋液混合不少於30秒，不要貯存稀釋液，因為沒有數據能證明其不會因為吸附作用而失去活性。
5、供試品溶液的制備
CP：|某些供試品需進行復溶、稀釋或在水性溶液中浸提 用LRW復溶或稀釋葯品或抽提醫療器械，某些物質可能更適於用其它水性溶液來溶解、稀釋或抽提。
對於過酸、過鹼或本身有緩沖能力的供試品需調節被測溶液（或其稀釋液）的pH值，一般要求供試品溶液的pH值在6.0-8.0的范圍內。
USP：用LRW復溶或稀釋葯品或抽提醫療器械，某些物質可能更適於用其它水性溶液來溶解、稀釋或抽提。
6、內毒素限值的建立
CP：葯品、生物製品的細菌內毒素限值（L）一般按以下公式確定：L=K/M
L 為供試品的細菌內毒素限值，一般以 EU /ml、EU / mg 或 EU / U （活性 單位）表示； K 為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以 EU / ( kg · h ）表示，注 射劑 K = 5EU/(kg•h )
放射性葯品注射劑 K=2.5EU / （kg· h ) ， 鞘內用注射劑 K = 0.2EU / （kg· h ) ； M 為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，以 ml / ( kg · h ）、mg / ( kg · h ） 或 U / ( kg · h ）表示，人均體重按 60kg 計算，人體表面積按 1.62m2 計算。
注射時間若不足 1 小時，按 1 小時計算。供試品每平方米體表面積劑量乘以 0.027 即可轉換為 每千克體重劑量（M）。
USP：非經腸道葯品的內毒素限值，以劑量定義，等於K/M
除了鞘內給葯以外的任何給葯途徑，K均為5 USP-EU/kg，鞘內給葯時，K為0.2 USP-EU/kg，對於非鞘內給葯放射性葯品，內毒素限值的計算為175/V，V為以mL為單位的最大推薦劑量
對於鞘內給葯的放射性葯品，其內毒素限值為14/V，對於按以每平方體表面積計算的給葯劑量（通常是抗腫瘤葯品），計算公式為K/M，其中K=5EU/kg，M為（最大劑量/m2/小時×1.80m2)/70kg。
7、靈敏度復核實驗
CP：當最大濃度2.0λ管為陽性，最低濃度0.25λ管均為陰性，陰性對照管為陰性時，實驗方為有效，按下式計算反應終點濃度的幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度的測定值（λc）：λc=lg-1(ΣX/4)
USP：|濃度最低的標准品溶液的所有重復管均為陰性，實驗方為有效。
用下式計算終點濃度的對數值的平均值，然後再計算該平均值的反對數：終點濃度的幾何平均值= antilog(Σe/f)
Σe是稀釋系列的終點濃度的對數值之和，f為重復管數，反應終點濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的測定值。
8、凝膠法限量實驗：
CP：溶液制備以添加了內毒素的溶液為「供試品溶液』。---USP：為「經稀釋的供試品溶液。
CP：使用稀釋倍數為MVD並且已經排除干擾的供試品液來制備溶液A和B。----USP；使用稀釋倍數不超過MVD的稀釋液來制備溶液A和B
CP：在復試中，溶液A需做4支平行管，當所有平行管都為陰性時，供試品溶液符合規定
------------USP：在復試中，如果溶液A的兩支平行管均為陰性，供試品溶液符合規定
USP：如果供試品溶液以不超過MVD的某個稀釋倍數稀釋，檢測結果為陽性時，可進一步稀釋供試品溶液但不能超過MVD，再重新進行試驗。------CP；無規定。