凝血儀檢測原理和方法包括

『壹』 血凝儀的測定方法

光學法血凝儀是根據血漿凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。根據儀器不同的光學測量原理，又可分為散射比濁法和透射比濁法兩類。
散射比濁法是根據待驗樣品在凝固過程中散射光的變化來確定檢測終點的。在該方法中檢測通道的單色光源與光探測器呈90°直角，當向樣品中加入凝血激活劑後，隨樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程，樣品的散射光強度逐步增加。當樣品完全凝固以後，散射光的強度不再變化，通常是把凝固的起始點作為0%，凝固終點作為100%，把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光學的變化，將其轉化為電信號，經過放大再被傳送到監測器上進行處理，描出凝固曲線。
透射比濁法，是根據待測樣品在凝固過程中吸光度變化來確定凝固終點的、與散射比濁法不同的是該方法的光路同一般的比色法一樣呈直線安排：來自光源的光線經過處理後變成平行光，透過待測樣品後照射到光電管變成電信號，經過放大後監測處理。當向樣品中加入凝血激活劑後，開始的吸光度非常弱，隨著反應管中纖維蛋白凝塊的形成，標本吸光度也逐漸增強，當凝塊完全形成後，吸光度趨於恆定。血凝儀可以自動描繪吸光度的變化曲線並設定其中某一點對應的時間為凝固時間。 磁珠法是根據血漿凝固過程中粘度的變化來測量凝血功能的。根據儀器對磁珠運動測量原理的不同，又可分為光電探測法和電磁珠探測法。
光電探測法，在磁珠法中光電探測器的作用與光學法中不同，它只測量血漿凝固過程中磁珠的運動規律，與血漿的濁度無關。在磁珠法中的一對電磁鐵安放在測試杯的兩端，它們產生恆定的交替磁場使磁珠在測試杯中擺動，在與磁珠擺動的垂直方向安放一對光電接收裝置，當磁珠擺幅衰減到50%時確定凝固終點。
光電探測法中還有一種利用紅外光反射監測器監測磁珠運動的，下面介紹BE系列半自動血凝儀中將另加介紹。
電磁探測法又可稱為雙磁路磁珠法，其中一對磁路用於吸引磁珠擺動，另一對磁路利用磁珠擺動過程中對磁力線的切割所產生的電信號，對磁珠擺動幅讀度進行監控，當磁珠擺動幅度衰減到50%確定凝固終點。 目前市售的半自動血凝儀主要由樣品、試劑預溫槽、加樣器、檢測系統（光學、磁場）及微機組成。有的半自動儀器還配備了發色檢測通道，使該類儀器同時具備了檢測抗凝及纖維蛋白溶解系統活性的功能。針對光學式半自動血凝儀受人為的因素影響多、重復性較差等缺陷，儀器中應有自動計時裝置，以告知預溫時間和最佳試劑添加時間；在測試位添加了試劑感應器，後者感應從移液器針頭滴下的試劑後自動振動，使反應過程中血漿與試劑得以很好地混合；此外，該類儀器在測試杯頂部安裝了移液器導板，在添加試劑時由導板來固定移液器針頭，從而保證了每次均可以在固定的最佳的角度添加試劑並可以防止氣泡產生。這一系列改進，提高了光學式半自動血凝儀檢測的准確性。
一般半自動血凝儀都可進行凝固法測試，而需要用其它測試方法實現的凝血項目則可用生化分析儀、酶標儀等進行。 該類儀器的基本構成包括：樣品傳送及處理裝置、試劑冷藏位、樣品及試劑分配系統、檢測系統、電子計算機、輸出設備及附件等。
1. 樣品傳送及處理裝置：一般血漿樣品由傳送裝置依此向吸樣針位置移動，多數儀器還設置了急診位置，可以使常規標本檢測必要時暫停以服從免疫比濁法將被檢物與其相應抗體混合形成復合物，而產生足夠大的沉澱顆粒，通過透射比法或散射比濁進行測定。此法操作簡便，准確性好，便於自動化。
2. 試劑冷藏位：為避免試劑的變質，儀器往往有試劑冷藏功能，一般同時可以放置幾十種試劑進行冷藏。
3. 樣品及試劑分配系統：樣品臂會自動提起標本盤中的測試杯，將其置於樣品預溫槽中進行預溫。然後試劑臂將試劑注入測試杯中（性能優越的全自動血凝儀為避免凝血酶對其他檢測試劑的污染，有獨立的凝血酶吸樣針），帶有旋渦混合器的裝置將試劑與樣品進行充分混合後將送至測試位，經檢測的測試杯被該裝置自動丟棄於特設的廢物箱中。
4．檢測系統：這是涉及儀器測量原理的關鍵部分。檢測血漿的凝固可以通過凝固反應檢測法檢測，即當纖維蛋白凝塊形成時，檢測散射光在660nm處渾濁液吸光度的變化；或通過凝固點檢測法檢測，即計算達到預先設定好的吸光度值時的凝固時間；而磁珠法則是通過測定在一定磁場強度下小鋼珠的擺動幅度變化來測定血漿凝固點。發色底物法及免疫法是檢測反應液在405nm、575nm及800nm時的吸光度變化來反映被檢測物質的活性。
5. 電子計算機：根據設定的程序計算機指揮血凝儀進行工作並將檢測得到的數據進行分析處理，最終得到測試結果。計算機尚可對患者的檢驗結果進行儲存，記憶操作過程中的各種失誤，及進行質量有關的工作。
6. 輸出設備：通過計算機屏幕或列印機輸出測試結果。
7. 附件：主要有系統附件、穿蓋系統、條碼掃描儀、陽性樣品分析掃描儀等。

『貳』 血液凝固分析儀檢測原理有哪些

不同類型的血凝儀採用的原理也不同，目前主要採用的檢測方法有：凝固法、底物顯色法、免疫法、乳膠凝集法等。由於在血栓/止血檢驗中最常用的參數，均可用凝固法測量，故目前半自動血凝儀基本上以凝固法測量為主，在全自動血凝儀中，也一定包括凝固法測量方式。
凝固法(生物物理法)
凝固法是通過檢測血漿在凝血激活劑作用下的一系列物理量 (光、電、機械運動等)的變化，再由計算機分析所得數據並將之換算成最終結果，所以也可將其稱作生物物理法。
a.電流法
電流法利用纖維蛋白原無導電性而纖維蛋白具有導電性的特點，將待測樣品作為電路的一部分，根據凝血過程中電路電流的變化來判斷纖維蛋白的形成。但由於電流法的不可靠性及單一性，所以很快被更靈敏、更易擴展的光學法所淘汰。
b. 光學法(比濁法)
光學法血凝儀是根據凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。
根據待驗樣品在凝固過程中光的變化來確定檢測終點的。當向樣品中加入凝血激活劑後，隨著樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程，樣品的光強度逐步增加，儀器把這種光學變化描繪成凝固曲線，當樣品完全凝固以後，光的強度不再變化。通常是把凝固的起始點作為 0%，凝固終點作為100%，把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光的變化，將其轉化為電信號，經過放大再被傳送到監測器上進行處理，描出凝固曲線。
光學法凝血測試的優點在於靈敏度高、儀器結構簡單、易於自動化 ; 缺點是樣品的光學異常、測試杯的光潔度、加樣中的氣泡等都會成為測量的干擾因素。
c.磁珠法
早期的磁珠法是在檢測杯中放入一粒磁珠，與杯外一根鐵磁金屬桿緊貼呈直線狀，標本凝固後，由於纖維蛋白的形成，使磁珠移位而偏離金屬桿，儀器據此檢測出凝固終點，這類儀器也可稱為平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光學法中樣品本底干擾問題，但存在靈敏度低等缺點。
現代磁珠法出現在 20世紀80年代末，90年代初進入商品化。現代磁珠法被稱為雙磁路磁珠法。雙磁路磁珠法的測試原理如下: 測試杯的兩側有一組驅動線圈，它們產生恆定的交變電磁場，使測試杯內特製的去磁小鋼珠保持等幅振盪運動。凝血激活劑加入後，隨著纖維蛋白的產生增多，血漿的粘稠度增加，小鋼珠的運動振幅逐漸減弱，儀器根據另一組測量線圈感應到小鋼珠運動的變化，當運動幅度衰減到50%時確定凝固終點。
底物顯色法(生物化學法)
底物顯色法是通過測定產色底物的吸光度變化來推測所測物質的含量和活性的，該方法又可稱為生物化學法。檢測通道由一個鹵素燈為檢測光源，波長一般為 405nm。探測器與光源呈直線，與比色計相仿。
血凝儀使用產色底物檢測血栓與止血指標的原理是 : 通過人工合成與天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列順序、並還有特定作用位點的小肽，並將可水解產色的化學基因與作用位點的氨基酸相連。測定時由於凝血因子具有蛋白水解酶的活性，它不僅能作用於天然蛋白質肽鏈，也能作用於人工合成的肽鏈底物，從而釋放出產色基因，使溶液呈色。產生顏色的深淺與凝血因子活性成比例關系，故可進行精確的定量。目前人工合成的多肽底物有幾十種，而最常用的是對硝基苯胺(PNA)，呈黃色，可用405mm波長進行測定。
免疫學方法
在免疫學方法中以純化的被檢物質為抗原，制備相應的抗體，然後用抗原抗體反應對被檢物進行定性和定量測定。常用方法有 :
a.免疫擴散法。將被檢物與相應抗體在一定介質中結合，測定其沉澱環大小，與標准進行比較，計算待測物濃度。此法操作簡單，不需特殊設備，但耗時過長，靈敏度不高，僅適於含量較高凝血因子檢測。
b.箭電泳。在一定電場中，凝膠支持物內的被檢物與其相應抗體結合形成的一個個「火箭峰」，火箭峰的高度與其含量成正比，通過測定峰高並與標准比較進行定量測定。此法操作復雜，臨床應用較少。
c.雙向免疫電泳。 通過水平與垂直兩個方向進行電泳可將某些分子結構異常的凝血因子進行分離。
d.酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)。用酶標抗原或抗體和被檢物進行抗原結合反應，經過洗滌除去未結合的抗原或抗體及標本中的干擾物質，留下固定在管壁的抗原抗體復合物，然後加入酶的底物和色原性物質，反應產生有色物質，用酶標儀進行測定，顏色深淺與被檢物濃度呈比例關系。該法靈敏度高，特異強，目前已用於許多止血、血栓成分檢測。
e.免疫比濁法。 將被檢物與其相應抗體混合形成復合物，從而產生足夠大的沉澱顆粒，通過透射比濁或散射比濁進行測定。此法操作簡便，准確性好，便於自動化。

『叄』 簡述血凝儀檢測的原理

1.凝固法
也稱為生物學法，將凝血因子或激活劑加入到血漿中，使血漿發生凝固，凝血儀記錄血漿凝固過程中一系列的變化（如光、電、機械運動等），並將這些變化的信號轉變成數據，計算機處理分析後得出檢測結果。目前在凝血儀上使用的凝固法大致分為三類：光學法、黏度法和電流法。
（1）光學法：待測血漿在凝固過程中，纖維蛋白原逐漸轉變為纖維蛋白，其理學性質也發生改變，透射光和散射光強度發生改變，凝血儀根據這種光學性質的改變來判斷凝固終點。光學法可分為透射比濁法和散射比濁法。
（2）黏度法：在待測血漿中加入小磁珠，利用變化的磁場使小磁珠產生運動，隨血漿的凝固，血液黏度增加，小磁珠的運動逐漸減弱，儀器根據小磁珠運動強度的變化來確定凝固終點。
（3）電流法：該法將待測血漿作為電路的一部分，由於纖維蛋白具有導電性，可利用電流的斷與否來判斷纖維蛋白的形成與否，即判斷凝固終點。

『肆』 ACL9000全自動凝血分析儀的工作原理

1、光路系統
容納反應盤的區域是檢測組件，其內包含一個凝固法通道和一個發色底物法或免疫比濁法通道：
散射比濁法：所有ACL系統均有。使用660nm波長光散射檢測凝固形成。
發色底物法/免疫比濁法：405nm，檢測光吸收。

2、檢測原理
1）散射比濁法（凝固法）檢測

散射比濁法（凝固法）檢測是指檢測和記錄血漿樣本凝固的時間。該技術通過檢測光散射的變化來確定凝固終點。

散射比濁法/凝固法，樣本和試劑反應時，纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，光通過該反應介質，從而發生光散射。660nm光通過血漿，並在900角配備光感測器進行檢測光信號。

纖維蛋白原凝固過程伴隨著光散射信號的增強。隨著所檢測到的光信號的變化，光電探測器所檢測到的電信號也隨之變化。變化的電信號通過軟體一系列的數學演算法判定凝固終點。

2）發色底物法（圖示：間接發色底物法）

發色底物法可分為直接和間接發色底物法。
直接法：分析物直接結合在特異性的發色底物上。比如：蛋白C、纖溶酶原PLG。
間接法：通過改進的測試體系，加入過量的具有反應活性的酶和能與待測物結合的物質，最後利用特異性合成底物結合剩餘的酶，檢測其活性，達到檢測目的。比如：肝素、AT-III。

大多數情況下，在405nm處，通過檢測合成底物中的對硝基苯胺（pNA）的吸光度值。

發色底物法通道利用比色原理檢測反應杯中的吸光度變化值。405nm光源，穿過反應杯，並通過光學感應器進行接收。反應杯中的吸光度值與pNA的濃度成正比。光路檢測器上接收到的光信號轉換為電信號，此電信號與酶的活性成正比。

3）免疫比濁法

免疫比濁法是指直接檢測和記錄分析物的濃度。該方法通過檢測光密度值的變化來檢測分析物的物理濃度，而並非其活性。與透射比濁法一樣，免疫比濁法依賴抗原抗體復合物的形成，從而檢測透光度值的變化。

ACLTM 8/9/10000系統通過檢測405nm通道的光密度值，與參比乳膠液對照得出結果。

使用405nm波長，通過檢測反應杯中的吸光度值（ΔA）。透過反應杯的光通過光感測器進行檢測。反應杯中液體吸收光信號的多少，直接與抗原抗體復合物的濃度成正比。光路檢測器上接收到的光信號轉換為電信號，此電信號與酶的活性成正比。