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乙酸檢測方法

發布時間:2024-09-03 10:24:05

『壹』 乳酸、丙酮酸和乙酸如何鑒定

丙酮酸檢測試劑盒可測各種動物血清(漿)、組織以及培養細胞、細胞培養上清液等樣本中丙酮酸含量。丙酮酸與顯色劑反應,反應產物在鹼性溶液中顯紅棕色,顏色深淺與丙酮酸含量成正比,通過比色可以測定出丙酮酸的含量。

原理:丙酮酸鹽檢測試劑盒提供了一種簡單、直接和可自動化操作的程序來測量不同生物學標本中丙酮酸的含量。適用標本類型包括:食物、細胞、培養基和發酵培養基。丙酮酸鹽檢測試劑盒基本原理如下:丙酮酸鹽被丙酮酸酶氧化,在酶反應過程中產生顏色(λ=570 nm)或者熒光(Ex/Em=535/587 nm),可使用酶標儀或熒光計檢測到。光的強度與丙酮酸含量是成正比的,因此通過檢測光的強度即可精確的得到丙酮酸的含量。試劑盒檢測范圍為1-10 uM丙酮酸。

丙酮酸檢測試劑盒

丙酮酸分子式CH3COCOOH,原稱焦性葡萄酸(德Brenztr-aubensure),是參與整個生物體基本代謝的中間產物之一。丙酮酸可通過乙醯CoA和三羧酸循環實現體內糖、脂肪和氨基酸間的互相轉化,因此,丙酮酸在三大營養物質的代謝聯系中起著重要的樞紐作用。

丙酮酸是糖無氧代謝的產物,研究工作者將丙酮酸和乳酸一同測定,並用二者的比值推測循環衰竭的嚴重程度;此外,它還對維生素B1缺乏有一定的研究意義,同時作為一種重要的精細化工中間體,廣泛應用於醫葯、農葯、食品等領域,尤其是作為醫葯中間體,具有良好的發展前景。

應用[4][5]

用於大腸桿菌丙酮酸代謝途徑改造及丙酮酸高產菌株培育

丙酮酸作為最重要有機酸之一,在醫葯、食品、化工等領域以及科學研究中都具有廣泛的用途。目前高質量的丙酮酸在國內市場缺口較大,丙酮酸工業化生產的前景十分廣闊。

從野生型大腸桿菌K-12 MG1655菌株出發,利用CRISPR/Cas9技術敲除了乳酸脫氫酶基因(ldh A),截斷了乳酸合成途徑;敲除了丙酮酸氧化酶基因(pox B)、磷酸轉乙醯基酶基因(pta)和乙酸激酶基因(ack A),截斷了乙酸合成途徑;敲除了丙酮酸-甲酸裂解酶基因(pfl B),截斷了甲酸合成途徑;敲除了磷酸烯醇丙酮酸合成酶基因(pps A),減少了丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸;敲除了磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(ppc),減少了磷酸烯醇式丙酮酸的消耗;通過敲除延胡索酸還原酶復合體基因(frd BC),削弱了三羧酸循環途徑。最後得到了一株可以初步積累丙酮酸的基因工程改造菌株MG1655-GP7(E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps A),這株菌在使用5 L發酵罐發酵68小時後丙酮酸產量達到32.07 g/L。

這表明只利用基因工程的手段是可以使大腸桿菌積累丙酮酸的。大腸桿菌利用葡萄糖作為碳源時,葡萄糖經糖酵解途徑會產生過量的ATP與NADH從而抑制丙酮酸的積累,使用氧化程度較高的葡萄糖酸作為碳源可解決此問題;當葡萄糖進入細胞後不經EMP途徑而是進入Entner-Doudoroff(ED)途徑,產生的ATP與NADH的量只有前者的一半,會相應的促進丙酮酸的積累。為了進一步提高產量,作者又敲除磷酸葡萄糖異構酶基因(pgi)以抑製糖酵解途徑;同時敲除6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶基因(gnd)以抑制磷酸戊糖途徑,並減少6-磷酸-葡萄糖酸的消耗;還在敲除磷酸葡萄糖轉移酶基因(pts G)和磷酸烯醇丙酮酸葡萄糖轉移酶基因(pts I)的基礎上敲入運動發酵單胞菌中葡萄糖轉運蛋白基因(glf)來改良葡萄糖轉運系統,減少大腸桿菌細胞轉運葡萄糖時磷酸烯醇式丙酮酸的消耗。

並計劃上調葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因(zwf)、葡萄糖酸-6-磷酸脫水酶基因(edd)和2-酮-3-脫氧葡萄糖酸-6-磷酸醛縮酶基因(eda)的表達以強化ED途徑,平衡ATP和NADH的水平,引導碳流更多的流向丙酮酸合成方向。

目前通過基因編輯的方法得到了一株生產丙酮酸能力理論上較MG1655-GP7菌株有所提高的MG1655-GP12(E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps AΔgndΔpgiΔpts GΔpts I::glf)菌株,該菌株的生產能力正在評估中。但經多次基因改造後,基因工程菌株MG1655-GP12出現了較野生型菌株生長緩慢的現象,本實驗對該菌株進行了實驗室適應性進化,經多次傳代後篩選到一株生長速度恢復到野生型菌株75%的MG1655-GP12-1菌株。

『貳』 醋酸的檢測應該選用什麼氣相色譜條件

試試這個條件怎麼樣:
毛細管柱DM-WAX色譜柱(30m×0.53×2um)

進樣口溫度200℃,檢測器溫度260℃,載氣:氮氣(10mL/min) ,分流比10:1

色譜柱升溫程序:35℃保溫3min,10℃/min升溫至90℃,保溫1min,30℃/min升到220℃。

還有換別的極性柱試試

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