中葯生物活性檢測方法的思考

① 急需一篇關於葯品質量檢測的論文

葯品生物測定的發展趨勢 作者:呂會成 【關鍵詞】 生物測定；葯理；葯品 ［摘要］ 生物測定是經典的葯品檢測專業之一，現代儀器分析的廣泛應用，給其帶來了極大的挑戰和機遇，面對目前的基本狀況，闡明了生物測定專業在中葯開發、新葯研製、葯物安全性評價及微生物限度檢查方面的應用和發展趨勢。 ［關鍵詞］ 生物測定；葯理；葯品 葯品是特殊商品，葯品質量直接關繫到用葯者的安全和療效。葯品檢測方法和檢測水平隨著制葯工業的發展不斷改進提高。由於現代科學技術的發展，相鄰學科之間的相互滲透，分析化學的發展經歷了三次巨大的變革，使分析化學發展成為以儀器分析為主的現代分析化學。面對生命科學中復雜的分離分析任務，發展了色譜分析方法。結構分析、價態分析、晶體分析等方面的研究又促進了光譜分析的發展。以計算機應用為主要標志的信息時代的來臨，儀器分析迅速發展，為葯物檢測提供各種非常靈敏、准確而快速的分析方法［1］。生物測定受到了極大的挑戰，其發展前景令我們從事葯品生物測定工作者所關注。 1 葯品生物的特點與業務范圍 1.1 葯品生物測定的定義與特點 葯品生物測定（簡稱生測）是利用葯品（或葯品中的有害雜質）對生物（或離體器官及組織）所引起的反應來測定葯品的含量或安全性的一種方法。 生測法的優點是測定的結果與醫療要求基本一致，能直接反映葯品的效果或毒副作用，這是其他物理學方法或化學方法所不能達到的。因此，目前各國葯典仍大都採用這一方法。 生測法的缺點是檢驗周期長，微生物有生長繁殖過程，動物有生理代謝過程，觀察分析時間一般在2~7天，有些試驗會更長。影響因素多，有生物差異性，也有系統操作誤差和環境條件等造成的影響。用品用具、動物質量、儀器設備都會對結果產生影響［2］。所以，以生測主檢的品種在中國葯典中逐版減少。 1.2 葯品生物測定的業務范圍 中國葯典是法定的葯品標准，它將葯品質量控制項目歸為四類：性狀、鑒別、檢查和含量。生測的業務主要涉及到中西葯品的檢查類和含量類。 其中作為葯品安全性檢查項目最多，包括：無菌、熱原、細菌內毒素、異常毒性、安全試驗、急性全身毒性、過敏物質、刺激性、溶血、降壓物質、微生物限度等。含量（或效價）測定包括：抗生素微生物檢定法，胰島素、硫酸魚精蛋白、縮宮素、卵泡刺激素、黃體生成素、升壓素等生物檢定法。 2 葯品生物測定的現狀 由於現代化檢測儀器的廣泛應用，葯品生物測定的品種和范圍，方法和要求，也發生了很大變化。 2.1 品種和范圍的變化 抗生素的含量測定，最初大部分抗生素用微生物法測定含量。隨著制葯工業發展，提純方法不斷改進，有效組分更加明確，許多品種檢測方法不斷改為儀器測定和化學測定。例如：2000年版中國葯典收載約219個抗生素品種，其中有15個原料葯及其制劑從1995年版的化學法和微生物法改為高效液相色譜法（簡稱HPLC），使該法達到97種，微生物法僅有24個，其中9個品種是新增加的。有人預計本世紀初，HPLC法會發展成為中國葯典使用頻率最高的一種儀器分析法［3］。規定取消抗生素過期檢驗，抗生素微生物效價測定的業務工作量更是明顯減少。 葯品注射劑的熱源檢查。1942年美國首先將家兔法收入葯典，相繼世界各國葯典均規定用該法。中國葯典從1953年開始收載。自1973年以來，鱟試劑被證明是一種檢測細菌內毒素（熱原）存在的靈敏試劑。用鱟試劑要比家兔試驗迅速、經濟，所需樣品量少，操作過程工作量小，每天可進行許多樣品檢測。1980年美國葯典20版首載「細菌內毒素檢查法」，1985年USP21版收載5種注射用水及40種放射性葯品。1991年11月執行的USP22版第五增補版公布了185種葯品刪除家兔法，用細菌內毒素檢查法代替。1995年USP23版注射劑的熱源項幾乎都被細菌內毒素檢查法代替［4］。 我國從20世紀70年代開始研究制備鱟試劑，1988年衛生部頒布細菌內毒素檢查法，1993年中國葯典第二增補本收載該法，但未涉及任何品種，1995年中國葯典二部正式收載，並規定了注射用水、氯化鈉注射液和二十多種放射性葯品並刪除熱源檢查，以內毒素代替。2000年版中國葯典進一步擴大到68種。預計2005年版中國葯典還要繼續增加品種，熱源項都將被內毒素代替。動物試驗改為生化試驗。 2.2 實驗動物 生測離不開實驗動物，在實驗中，為了減少生物差異，提高動物反應敏感性，以最少的動物達到最滿意的結果。國家非常重視實驗動物，1988年國務院頒布了《實驗動物管理條件》，對實驗動物的飼管、管理、使用等做出了明確規定，實行達標認證制度，嚴格管理。按微生物控製程度把實驗動物分為四級：普通動物、清潔動物、無特殊病原體動物和無菌動物［5］。一般動物實驗必須達到清潔動物標准，種系清楚，不雜亂，無規定指出的疾病。動物級別越高，飼養管理條件越嚴，設施投資越大。實驗動物是實驗研究的活試劑，既要有純度，也要有數量，背景明確，來源清楚，符合要求才能使用。（隨著葯品純度的提高，凡是有準確的化學和物理方法或細胞學方法能取代動物實驗，進行葯品和生物製品質量檢測，應盡量採用，以減少動物的使用。） 2.3 葯品生物測定在方法上的改進與變化 為了縮短操作時間，減少實驗誤差，近年來生測方面也研製並投入使用了部分儀器設備，如：抗生素抑菌圈測定儀、微機熱原測溫儀、集菌儀、細菌數測定儀等，減輕了工作強度，提高了工作效率，檢測結果更加准確可靠。 3 葯品生物測定的發展趨勢 生測作為經典方法沿用至今，表明它有其他方法不能替代的特點，在葯品檢驗中發揮了重要作用。不少老產品改為其他方法控制質量，也會不斷有新產品離不開生測法，我們應當充分發揮它的優點，盡量克服它的不足，開拓新的業務范圍。 3.1 微生物限度檢查工作量大 為了控制葯品染菌限度，1975年美國葯典19版首載微生物限度檢查，1980年英國葯典收載，我國在1990年由衛生部頒布了葯品衛生標准及檢驗方法，1995年版中國葯典正式收載［6］。2000年版中國葯典按劑型規定了微生物限度標准，執行范圍除注射劑和中葯飲片外幾乎包括中西葯的所有制劑和原料。該項檢查成為葯典品種適用最多的檢查項目，占當前地市級葯品檢驗所生測室業務工作量的80%以上。在這項檢查中，有大量的業務技術需要我們進一步研究，改進試驗條件，使數據准確，探討快速檢測的新方法。葯包材的檢查，國家葯監局已經發布試行標准，業務范圍將更加擴大，這是我們進一步做好工作，努力探討研究的新領域。 3.2 葯品生物測定在中葯開發中的作用 我國是中葯王國，2000年版中國葯典一部共收載920種，其中中成葯398種。有含量測定的157種，僅占總數的17%，中葯成分多，雜質和干擾物質很多。復方制劑，尤其大復方制劑專屬性的檢出處方中所含葯材很困難，有大量的研究工作需要做。中成葯中的雜質如重金屬、殘留農葯等達到一定水平會產生毒副作用，影響葯物安全性［7］。要讓中葯制劑打進國際市場，我們在檢查類的控制項目和含量類的方法探討方面有大量工作要做，生物測定可以在毒理、葯理方面進行研究、探討，逐步完善質量控制標准，提高制劑質量發揮更大的作用。 3.3 新葯研製開發與安全性評價 新葯研製開發是多學科合作的系統工程。在獲得一個具有生物活性的化合物後，研究開發組織者要在生物醫學領域進行葯物評價研究，首先必須組織葯理學、毒理學、病理學、獸醫學、遺傳學、生物化學、葯代動力學方面的專家進行合作研究，按葯物非臨床研究管理規范GLP進行管理。組織葯理、毒理（包括一般毒理和特殊毒理）、病理、葯代動力學和毒代動力學、葯物分析、臨床化學、實驗動物、生物統計、質量保證等部門有關人員進行討論，分階段做出評價［8］。生測在這方面可以參加開發研究或進行技術指導。 綜上所述，葯品生物測定是葯物分析的重要組成部分，是不可缺的檢測專業，現代儀器的大量使用，不僅不會影響其發展，而是如虎添翼，讓葯品生物測定展示出新的前景。 ［參考文獻］ 1 倪坤義，田頌九，丁麗霞.21世紀葯物分析學的發展趨勢.中國葯學雜志，2000，35（12）：798

② 葯品領域的微生物檢測及標准

中國葯典微生物限度檢查法，為《中國葯典》附錄收載的關於葯品微生物檢查的法定方法。葯品的不同劑型的微生物檢測標准不同，具體如下：

1、制劑通則品種

制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑應符合無菌檢查法規定。

2、口服給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每lg或lml不得過100cfu。

大腸埃希菌每1g或lml不得檢出。

3、耳、鼻及呼吸道吸入給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²，不得過10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

大腸埃希菌鼻及呼吸道給葯的制劑，每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

4、陰道、尿道給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌數和酵母菌數每1g、lml或l0cm²應小於10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

5、直腸給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g或lml不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每lg或lml不得檢出。

6、其他局部給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

7、含動物組織

含動物組織（包括提取物）的口服給葯制劑每10g或10ml還不得檢出沙門菌。

8、兼用途徑制劑

應符合各給葯途徑的標准。

(2)中葯生物活性檢測方法的思考擴展閱讀

微生物限度檢查法的注意事項：

1、當建立產品的微生物限度檢查法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所採用的方法適合於該產品的控制菌檢查。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，檢查方法應重新驗證。

2、檢查項目應當包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控制菌檢查。

3、微生物限度檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區域內進行。

4、檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作檯面及環境應定期按《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標准進行潔凈度驗證。

5、除另有規定外，本檢查法中細菌及控制菌培養溫度為30℃～35℃；黴菌、酵母菌培養溫度為23℃～28℃。

6、檢驗結果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 為單位報告，特殊品種可以最小包裝單位報告。