魚粉組胺檢測方法

① 組胺的組胺檢測

大量食物易殘留組胺類葯物，對人體有一定危害。目前對於普通政府質檢機構、獸葯監察所、商檢局等，以及食品企業：農畜產品加工出口企業、水產企業、蜂蜜企業等大眾基層實驗室，應用最多的是酶連免疫吸附試劑盒方法，即ELISA方法。
ELISA方法相比較於儀器檢測具有靈敏度高、檢測成本低、快速方便，可同時大批量篩選，操作簡單等優點，因此舉例： 1.1 儀器
(a)色譜管——200×7mm（內徑）聚丙烯管，配有Kontes No.K-422,372Kel-F卡套和約45cm聚四氟乙烯管，以調節與柱相連的出口管高度，控制流速大於3ml/min。或用二通閥 （生物實驗室產品）代替管子。
(b)熒光計——Perkin-Elmer型203或204,帶中壓汞燈。或帶有在350nm激發光和在444nm測量發射光的儀器。
(c)重換移液管——1和5ml。
1.2 試劑
(a)離子交換樹脂——Bio-Rad AG/-X8 50—100目。或Dowex 1-X8 50—100目，以約15ml 2M NaOH/g樹脂加入燒杯，使其轉變為—OH形式，旋搖混合，靜置30min。倒出液體並加鹼重復操作。用水洗透樹脂，糊狀物倒進折疊濾紙，再用水洗。每周制備新樹脂並浸在水中保存。
在管(a)底塞上玻璃棉，填入足以形成8cm樹脂床層的糊狀物，無論何時，都須使樹脂層上保留水層。再生樹脂，不在填充柱內進行，需要時，可在燒杯里分批再生，每次提取前，用約10ml水洗柱。
(b)磷酸——1.19M。稀釋121.8ml、85%的H3PO4至1L。如用其他濃度磷酸，配1L 1.19M的H3PO4所需體積V=17493/（密度H3PO4×%H3PO4)。標定；吸取5ml H3PO4,以酚酞為指示劑用1.00M NaOH滴定至終點。如需要，可調整濃度。
(c)鄰苯二甲酸二碳基乙醛(OPT)溶液——0.1%。100mg OPT溶於100ml、經玻璃容器蒸餾過的甲醇中，裝在棕色瓶中，於冰箱內貯存，每周新配。
(d)組胺標准溶液——冰箱里貯存。
⑴ 貯備液——1mg/ml。無鹼性。准確稱取約169.1mg組胺·2HCl(98%）於100ml容量瓶中，用0.1M HCl溶解並稀釋到刻度，每周新配。
⑵ 中間溶液——10μg/ml。吸取1ml貯備液放進100ml容量瓶，用0.1M HCl稀釋到刻度，每周新配。
⑶ 工作溶液——0.5,1.0和1.5μg/5m1。吸取1,2和3ml中間溶液，分別於100ml容量瓶中，各用0.1M HCl稀釋至刻度，每天新配。 （使用前，以HCl(1 3)和水洗滌全部塑料及玻璃容器）
2.1.標准曲線的繪制
吸取平行的各標准工作液5ml於50ml的玻璃或聚丙烯錐形瓶中，各瓶加10ml 0.1M的HCl並混勻。加入3ml 1M NaOH並混勻；在5min內，加入1ml OPT溶液並立即混合；准確於4min後，加入3ml 1.19M H3PO4並立即混勻。每次加液後，至少在OPT反應期間（順序加入試劑到一組錐型瓶里，可同時進行6—10個OPT反應），充分混勻是很重要。用5ml 0.1M HCl代替組胺溶液作為空白，在1.5h內，以水為參比記錄工作標准液的熒光強度(I)，用350nm吸收波長，和444nm發射波長，以(I)（經空白校正）對μg組胺/5ml試樣作圖。
2.2.測定
用甲醇萃取按17-28C,第一節中製得的樣品。用4—5ml水洗柱，(a)，棄流出液。吸1ml萃取液加進柱內並加4—5ml水。立即使柱流出液進入50ml、內含5.00ml 1.00M HCl的容量瓶中，當液面在樹脂上方約2mm處時，加入約5ml水洗脫，接著用大量水洗脫，直到約有35ml洗脫液為止。停止柱流，用水稀釋到瓶的刻度，塞上瓶蓋混勻，冷藏洗脫液。
吸5ml洗脫液於50ml錐型瓶中，吸取10ml 0.1M HC1加入，按C,自吸加3ml 1M NaOH開始進行。
如樣品含量大於15mg組胺/100g魚，吸取1ml樣品-OPT混合液於10ml、盛有準確2ml空白-OPT混合液的燒杯中，充分混勻。讀出新溶液的熒光強度，如想得到可測的讀數，就用空白-OPT的混合液稀釋試樣。這個近似值表明，為准確地定量樣品，進行第二次OPT反應前，要將洗脫液作適當稀釋。此外，調節熒光計的靈敏度范圍（如儀器有此裝置）來估計稀釋倍數。利用這些近似值，用0.1M HCl制備洗脫液的適當稀釋試樣。按C進行。
2.3.計算
繪制I對μg組胺/5ml溶液（用繞度（偏轉）計或記錄儀響應測量並經空白校正過的圖應是一條過原點的直線，斜率=m=[(Ia/1.5)十Ib十2Ic]/3mg組胺/100g魚=⑽(F)(1/m)(Is)
式中：Is、Ia、Ib、Ic分別為樣品、1.5、1.0和0.5mg組胺標準的熒光強度。F=稀釋倍數=ml洗脫液十ml 0.1M HCl/ml洗脫液，未稀釋的洗脫液F=1
如果校正圖形呈非線性，直接用標准曲線定量。橫坐標上每一分度應≤0.1μg組胺/5ml溶液，從曲線最靠近0.05μg組胺/5ml溶液處，讀出所有值。
mg組胺/100g魚=⑽(F)(W)
式中：W=μg組胺/100e魚（用標准曲線測得）

② 求魚粉中組胺的檢測方法

組胺檢測方法原理本測試盒的原理是是競爭性直接酶聯免疫吸附劑測定法(CD-ELISA), 可准確檢測出樣品中ppm級的組胺。樣品和標准對照液中游離的組胺與酶結合物中的組胺競爭抗體結合位置。清洗後，加入底物，底物與酶結合物反應出現蘭色，蘭色越深表明組胺越少。將其置於微型孔閱讀器中可讀出透光度，以對照標准液的透光度作標准曲線，將樣品的透光度與標准曲線比較計算出樣品中組胺的准確濃度。 已提供的材料1. 48個包被了抗體的孔。2. 48個紅色標記的混合孔。3. 6瓶黃色標記的組胺標准對照溶液：0、2.5、5、10、20、50ppm六個濃度，每瓶1 ml。4. 1瓶蘭色標志的組胺—HRP酶結合物溶液。5. 1包內含10mM PBS（丁苯橡膠）乾粉的稀釋試樣提取液的濃縮緩沖液。6. 1瓶 40ml沖洗緩沖濃縮液，內含10mM丁苯橡膠—Tween。7. 1瓶綠色標志的K—蘭色底物溶液。8. 1瓶紅色標志的終止液。未提供的必需材料1. 提取材料（Neogen公司的產品號為9510）a. 去離子水或蒸餾水b. 125ml的瓶子c. 1號Whatman濾紙，Neogen公司過濾注射器或其他相當品d. 樣品收集試管2. 100ml量筒。