諾如病毒檢測方法有乳膠

⑴ 乳膠法和膠體金法的區別

二者在原理、應用和載體方面有所不同，具體如下：

1、原理不同：

普通聚苯乙烯乳膠和抗體的結合是無選擇性的物理靜電吸附，抗體很難結合到乳膠表面，即使致敏上的抗體也容易從乳膠微球上脫落或者變性失活，而使用多肽縮合劑或交聯劑則操作過程繁瑣、耗時。

膠體金法是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，由於靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。

2、應用不同：

膠體金也是免疫電鏡技術中較為理想的免疫標記物。膠體金技術具有方便快捷、特異敏感、穩定性強、不需要特殊設備和試劑、結果判斷直觀等優點, 因而特別適合於廣大基層檢驗人員以及大批量檢測和大面積普查等, 具有巨大的發展潛力和廣闊的應用前景。

乳膠凝集法具有獨特優點: 不需要特殊儀器、肉眼判斷、操作簡便、不需要專門培訓；檢測時間短，一般為 2 min；價格低廉，檢測單份血清樣品的成本比其它血清學和病原學方法低得多；適於現場檢測等，在臨床檢驗中被廣泛應用。

3、載體不同：

乳膠凝集法是以乳膠顆粒作為載體的一種間接凝集試驗。即吸附可溶性抗原於其表面，特異性抗體與之結合後，可產生凝集反應。

膠體金在弱鹼環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由於這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。

參考資料來源：網路-膠體金法

參考資料來源：網路-乳膠凝集法

⑵ 禽流感病毒和抗體的實驗室檢測方法分別有哪些各種方法用途分別是什麼

病毒檢測方法有：
（1）病毒（雞胚、細胞）分離培養與鑒定，用途為直接分離病毒；
（2）免疫熒光法，用途為檢測組織、細胞培養物中病毒抗原；
（3）免疫酶法（包括免疫酶組織化學染色法和免疫過氧化物酶細胞單層試驗），用途為檢測組織、細胞培養物中病毒抗原；
（4）中和試驗，用已知陽性血清檢測病毒，金標准方法
（5）血凝/血凝抑制試驗，用已知陽性血清檢測病毒
（6）乳膠凝集試驗，用已知陽性血清檢測病毒抗原
（7）膠體金試紙，用已知陽性血清檢測病毒抗原
（8）ELISA方法，用已知陽性血清檢測病毒抗原
（9）RT-PCR（含熒光RT-PCR），用途為檢測病毒核酸
（10）NASBA，用途為檢測病毒核酸
（11）核酸探針，用途為檢測病毒核酸
（12）基因晶元，檢測病毒核酸
（13）核酸序列測定，解析病毒核酸
抗體檢測方法
（1）瓊脂擴散試驗，檢測病毒NP和M蛋白抗體
（2）血凝抑制試驗，檢測病毒HA蛋白抗體，可用於免疫效果評估
（3）神經氨酸酶抑制試驗，檢測病毒NA蛋白抗體
（4）中和試驗，用已知病毒檢測血清，金標准方法
（5）ELISA方法，用已知病毒抗原檢測特異抗體
（6）膠體金試紙，用已知病毒抗原檢測特異抗體
（7）乳膠凝集試驗，用已知病毒抗原檢測特異抗體

⑶ 涔欒倽鐥呮瘨琛ㄩ潰鎶楀師(涔寵兌娉)闃存т粈涔堟剰鎬濓紵

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⑷ 諾如病毒的實驗診斷

電鏡法
直接電鏡法(EM)和免疫電鏡法(IEM)，EM 法觀察的靈敏度較低，要求每毫升糞便樣品中至少有大約 106個病毒粒子，因此只能用於患病早期病毒大量排出時採集的樣本檢測。IEM 法比 EM 法的敏感性可提高 100 倍，主要應用患者恢復期血清捕捉同型抗原，從而增加檢出率。電鏡法的缺陷在於設備昂貴，不能廣泛普及；檢測結果與操作者的技能和經驗有直接關系；靈敏度相對較低；不適於大規模流行病學調查。
免疫法
包括放射免疫法(RIA)、生物素-親和素免疫法(Biotin-Avidin Immunoassy)和酶聯免疫法(ELISA)。RIA法的靈敏度比IEM 法可 提高10～100倍，可以檢測出抗體升高的水平，為流行病學提供更有參考價值的資料。RIA 法的不足之處在於它需要 6 d，且需要放射性同位素標記。為了簡化方法，美國疾病預防控制中心建立了生物素-親和素免疫法，其靈敏度與 RIA 法相當，該方法已成為美國疾病預防控制中心檢測NLV抗原和抗體的標准實驗方法之一。1992年Jiang 等重組桿狀病毒表達NV衣殼蛋白成功後，建立起的 NV 酶聯免疫檢測方法快速、靈敏、經濟，其不足之處是免疫反應的株型特異性太強，所以應用范圍還比較窄。酶鏈免疫法特異性強，靈敏度高，診斷迅速，且較經濟，是可廣泛應用的檢測方法。由於NLV培養還未成功，原來用作試劑的病毒抗原數量受到限制，用分子生物學技術已經可以人工重組NV的衣殼蛋白，從而解決了上述問題。
分子生物學檢測方法
雜交技術和逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)除了能更准確、靈敏地檢測標本中的NV，尤其是低濃度的NV感染外，最大的優點在於可以進一步對病毒進行基因型的研究，不會受到獲得分型單克隆抗體的限制，對流行病學研究具有重要意義。
等溫核酸擴增法 (NASBA)直接擴增RNA 來檢測 NV，樣品中病原RNA得到指數級擴增，產物通過瓊脂糖凝膠電泳或斑點印跡雜交鑒定結果。該方法的靈敏度略低於 RT-PCR 法；整個過程只有一步RNA擴增，避免了RT-PCR存在的RNA交叉污染；縮短了操作時間；假陽性率低。 RT-PCR檢測食物中NV存在樣品病毒量含量低，樣品量大且成分復雜等問題，因此病毒富集濃縮、樣品處理是檢測的關鍵，其中有兩個重要方面影響檢測結果，一是樣品中病毒濃縮後的回收率，二是抽提核酸的完整程度和純度。
病毒濃縮
病毒濃縮 NV 濃縮方法一般分為兩大類，一類為有機絮凝沉澱法，主要使用聚乙二醇（PEG）沉澱，PEG 是具有強烈吸水性以及凝聚和沉澱蛋白作用的高分子聚合物，先改變樣品 pH 值，使毒粒與樣品微粒分開，PEG 把病毒沉澱下來，達到濃縮的目的。目前對於固體樣品 PEG 沉澱法是最有效的濃縮方法。
膜過濾法是另一類有效濃縮病毒的方法，通過改變膜的pH值使之與帶有電荷的毒粒結合捕捉病毒，這種方法通常用在濃縮大體積的黏度小、內容顆粒小的液體食品或水中。檢測海水、生活污水中的NV曾用過這種方法，為瓶裝水和其他飲料濃縮NV提供了參考。
核酸提取
食品樣品成分復雜，所含有的脂肪、蛋白質、金屬離子等物質都是 RT-PCR 反應抑制因子。NV是單鏈RNA病毒，核酸提取方法的優劣取決於兩個方面：核酸的質量和去除抑制因子的能力。應用較成熟廣泛的是胍法 RNA 提取法，即（異）硫氰酸胍-苯酚-氯仿聯合裂解抽提法，該方法改進後製成市售的TRIzol、RNAzol、Ultraspec 等產品，與石英砂、磁珠等多孔顆粒相結合，已結合了poly(dT) 或特異探針的磁珠能較高程度的提純mRNA，去除反應抑制因子。石英砂或磁珠純化 RNA與傳統的有機試劑（異丙醇、乙醇）沉澱 RNA 相比起來，效果較好，只是成本偏高。