① 沉澱蛋白質的方法五種
蛋白質從溶液中析出的現象,稱為蛋白質的沉澱。蛋白質沉澱常用的方法有鹽析法、等電點沉澱法伏碧輪、有機溶劑沉澱法、重金屬鹽沉澱法、生物鹼試劑與某些酸(如三氯醋酸)沉澱等。
在蛋白質溶液中加入大量的硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽,破壞蛋白質的水化膜和中和電荷,使蛋白質顆粒相互聚集,發生沉澱。
等電點沉慧旁淀法是利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。
有機溶劑能降低溶液的電解常數,從而增加蛋白缺信質分子上不同電荷的引力,導致溶解度的降低;另外,有機溶劑與水的作用,能破壞蛋白質的水化膜,故蛋白質在一定濃度的有機溶劑中的溶解度差異而分離的方法稱有機溶劑分段沉澱法。常用於蛋白質或酶的提純。使用的有機溶劑多為乙醇和丙酮。
其原理是重金屬鹽可與蛋白質形成不溶於水的蛋白鹽沉澱,從達到沉澱蛋白質的目的。
蛋白質又可與生物鹼試劑以及某些酸結合成不溶性的鹽沉澱,沉澱的條件應當是pH小於等電點,這樣蛋白質帶正電荷易於與酸根負離子結合成鹽。
② 使蛋白質沉澱的方法
(1)鹽析法,此方法並未破壞蛋白質天然狀態,沉澱出的蛋白質可不變性,所以鹽析法是分離制備蛋白質或蛋白類生物制劑的常用方法.
(2)有機溶劑沉澱法,通過破壞蛋白質的水化膜而使蛋白質沉澱,此方法在常溫下可使蛋白質變性,低溫下可使變性速度減慢.
(3)重金屬鹽沉澱法,可與蛋白質結合形成不溶於水的蛋白質鹽沉澱,引起蛋白質變性.臨床用於救重金屬鹽中毒.
鹽析法可以使蛋白質沉澱。
鹽析法的原理
蛋白質在水溶液中的溶解度取決於蛋白質分子表面離子周圍的水分子數目,亦即主要是由蛋白質分子外周親水基團與水形成水化膜的程度以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。蛋白質溶液中加入中性鹽後,由於中性鹽與水分子的親和力大於蛋白質,致使蛋白質分子周圍的水化層減弱乃至消失。同時,中性鹽加入蛋白質溶液後由於離子強度發生改變,蛋白質表面的電荷大量被中和,更加導致蛋白質溶解度降低,之蛋白質分子之間聚集而沉澱。由於各種蛋白質在不同鹽濃度中的溶解度不同,不同飽和度的鹽溶液沉澱的蛋白質不同,從而使之從其他蛋白中分離出來。簡單的說就是將硫酸銨、硫化鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液,使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞,導致蛋白質在水溶液中的穩定性因素去除而沉澱。
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④ 蛋白沉澱的方法和原理
蛋白質通過鹽析的辦法沉澱的原理是降低蛋白質的溶解度,使蛋白質凝聚而從溶液中析出。
蛋白質的沉澱是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。蛋白質從溶液中析出的現象,稱為蛋白質的沉澱。蛋白質沉澱常用的方法有鹽析、等電點沉澱、有機溶劑沉澱、生物鹼試劑與某些酸(如三氯醋酸)沉澱等。
⑤ 常用的沉澱法
常用的有下列幾種方法:
等電點沉澱法不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉澱法使它們相互分離。
2. 鹽析法不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質,並能再度溶解而不變性。
3. 有機溶劑沉澱法中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉澱出來,因此可用來沉澱蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度。