口蹄疫疫苗含量的檢測方法

⑴ 如何診斷與預防牛口蹄疫

口蹄疫俗稱「口瘡」、「蹄癀」，是由口蹄疫病毒引起的一種人和偶蹄動物的急性、發熱性、高度接觸性傳染病。主要臨床症狀表現為口腔黏膜、唇、蹄部和乳房皮膚發生水皰和潰爛。

【病因】

該病由口蹄疫病毒引起。口蹄疫病毒是動物RNA病毒，呈圓形，直徑20～25納米，該病毒具有多型性、變異性等特點，目前全世界有7個主型：A、O、C、南非1、南非2、南非3和亞洲Ⅰ型。各型之間不能互相免疫，即感染了此型病毒的動物，仍可感染其他型病毒。各型的臨床表現相同。該病毒對動物致病力特強，1克新鮮的牛舌皮毒，搗碎成糊狀，稀釋10⁷～10⁸倍後，取1毫升舌面接種牛，還能使牛發病。病毒存在於病牛的水皰、唾液、血液、糞、尿及乳汁中。病毒對外界抵抗力很強，不怕乾燥，但對日光、熱、酸、鹼則均敏感。

【流行病學】

不同地區可表現為不同的季節性，牧區一般從秋末開始，冬季加劇，春季減輕，夏季平息，在農區，這種季節性不明顯。病牛是傳染源，傳播途徑是通過直接接觸和間接接觸，經消化道、損傷的黏膜、皮膚和呼吸道傳染。口蹄疫病毒傳染性很強，一旦發生，呈流行性，且每隔1～2年或3～5年就流行1次。有一定的周期性。

【症狀】

潛伏期平均為2～4天，長者可達1周左右。病牛體溫升高至40～41℃，精神不振，食慾減退，流涎。1～2天後，唇內面、齒齦、舌面和頰部黏膜出現1～3厘米見方的白色水皰，大量流涎，水皰破裂形成糜爛，病牛因口腔疼痛採食困難，進食減少或不進食。水皰破裂後，體溫下降至正常，糜爛部位逐漸癒合。與水皰出現的同時或稍後，蹄部的趾間、蹄冠的皮膚也出現水皰，並很快破裂，病畜不願意行走，嚴重者蹄匣脫落。在牛的鼻部和乳頭上也出現水皰，之後破裂，形成粗糙的、有出血的顆粒狀糜爛面。感染的懷孕母牛經常出現流產。病程為1周左右，病變部位恢復很快，全身症狀也逐漸好轉，如果發生在蹄部，病程較長，一般為2～3周，死亡率低，不超過1%～3%。但是如果病毒侵害心肌時，可使病情惡化，導致心臟出現麻痹而突然死亡。

【病理變化】

主要在口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚出現水皰及糜爛面。病毒毒素侵害心肌而死亡的牛心肌變性和出血，而且在心肌上可看到許多大小不等、形態不整齊的灰白色或灰黃色混濁、無光澤的條紋樣病灶，稱為「虎斑心」。

【實驗室檢查】

作病毒分離，採用雞胚和細胞，培養分離病毒。血清學檢查主要應用反向間接血凝試驗、酶聯免疫吸附試驗等檢測病毒抗原。

【預防】

口蹄疫由於發病率高、傳播快和易造成大流行等特點，因此在防治上應本著「早、快、嚴、小」的原則，充分發動群眾，嚴格執行各項獸醫衛生防疫制度，採用綜合性防疫措施。

（1）發生疫情時的措施

①發生疫情時應立即向上級和有關部門報告，並迅速採取病料（水皰和水皰液）送有關單位確診、定型。

②劃定疫區，嚴格封鎖。疫點要求封死，人、畜、畜產品及用具等都不能出入，查明傳染來源。

③對疫區內所有易感家畜進行普查，將病畜和可疑病畜立即隔離。同時對被病畜的分泌物、排泄物污染的場所、用具等用2%燒鹼或2%甲醛溶液進行認真消毒。

④建成免疫帶。為防止疫情繼續蔓延擴大，對疫區和疫區外的受威脅區的易感家畜，立即用與當地流行的相同病毒型的、亞型的減毒活苗和滅活苗進行接種。以建立免疫帶，這是綜合性防疫措施中的一個重要環節。

⑤撲殺病畜，死畜應焚燒或深埋。

⑥疫區解除封鎖的時間，經過全面消毒，報有關部門同意後，才可解除封鎖。實踐證明，凡疫情報告及時、隔離早、封鎖嚴、消毒徹底的畜牧場，都能取得迅速控制和撲滅疫情的效果。

（2）平時的措施

①平時對家畜要嚴格檢疫，每年夏秋季節用口蹄疫疫苗對牛、羊進行預防注射。

②加強飼養管理，搞好環境衛生和消毒工作。

此外，本病發生和流行時，人可因與病畜接觸或飲乳偶爾感染。應注意人身防護。

⑵ 口蹄疫的檢測

1.蹄疫反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR），用於檢測疑似感染動物水皰皮或水皰液中所有血清型口蹄疫病毒，適用於口蹄疫病毒的檢測、診斷和流行病學調查。
原理：利用異硫氰酸胍方法提取RNA，在反轉錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點合成與RNA模板互補的cDNA鏈。利用西安天隆科技有限公司生產的DTC型基因擴增儀，在TaqDNA聚合酶的作用下，經高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環，使特異性DNA片段的基因拷貝數放大一倍。經過35個循環，最終使基因放大數百萬倍。將擴增產物進行電泳，經溴化乙錠染色後，在紫外燈照射下，肉眼可見DNA片段的擴增帶。該方法可以檢測所有亞型的口蹄疫病毒，檢測結果為陽性，需進一步採用分型診斷試劑盒進行進一步檢測。
2.血清學試驗 ，ELISA是目前檢測FMDV感染較為常用的診斷方法，其與補結試驗、中和試驗及間接血凝抑制、免疫擴散沉澱試驗相比較、具有靈敏、快速、價廉等優點。

⑶ 口蹄疫實驗室檢查方法有哪些

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口蹄疫病毒具有多型性，而其流行特點和臨床症狀一樣，其病毒屬於哪一型，需經實驗室檢查才能確定。另外，豬口蹄疫與豬水皰病的臨床症狀幾乎無差別，也有賴於實驗室檢查予以鑒別。首先將病豬蹄部用清水洗凈，用干凈剪子剪取水皰皮，裝人青黴素（或鏈黴素）空瓶，最好採取3-5頭病豬的水皰皮，冷藏保管，一並迅速送到有關檢驗部門檢查。

傳統的方法是補體結合試驗和乳鼠血清保護試驗。以後又採用反向間接血凝試驗和瓊脂擴散試驗，近來常用酶聯免疫吸附試驗。據報道，酶聯免疫吸附試驗比反向間接血凝試驗更靈敏可靠，阻斷夾心酶聯免疫吸附試驗已用於進出口動物血清的檢測。

⑷ 常用的診斷口蹄疫的方法有哪些

（1）根據流行特點：本病呈急性經過，流行性傳播，主要侵害偶蹄獸，一般為良性轉歸。
（2）根據臨床症狀：一般表現在口腔黏膜、蹄部皮膚、乳房、乳頭、鼻端、鼻孔形成水皰和潰瘍。
（3）實驗室診斷：由於口蹄疫的臨診特徵與水皰性口炎、水皰病、水皰疹極為相似，為此不能作為確診的依據，必須採取水皰液或水皰皮進行以下幾方面的實驗室診斷。
小鼠接種試驗：將病料用青、鏈黴素處理後分別接種成年、2日齡和7～9日齡小鼠，如2日齡和7～9日齡乳鼠都發病死亡，可診斷為口蹄疫，如僅2日齡乳鼠發病死亡則為豬水皰病。
血清保護試驗：通常採用乳鼠作血清保護試驗。可用已知血清鑒定未知病毒，也可用已知病毒鑒定未知血清。
血清中和試驗：可用於鑒定康復豬的抗體和病毒。採用乳鼠中和試驗或細胞中和試驗均可。此外，也可應用對流免疫電泳、反向間接血凝抵制試驗、補體結合試驗檢測病毒或抗體，從而作出診斷。
抗酸性（pH5.0）試驗：依據口蹄疫病毒對pH5.0敏感，而豬水皰病病能抗pH5.0的特性，可以鑒別這兩種病毒。