細胞焦亡的檢測方法

1. 如何測定細胞死亡率，方法有哪些

取決於癌細胞是哪種類型，一般來說在葯理學實驗中，實體瘤死亡率的測定通常採用瘤重的稱量，分別稱量給葯前和給葯後的瘤重，直接換算成癌細胞的死亡比例。非實體瘤，如血癌，可以用白細胞計數器計數，換算成每立方毫米的癌細胞數，分別測定給葯前和該葯後的癌細胞數，它們之間比例的減小就是癌細胞的死亡率。根據每個細胞有一定的重量而設計的。它可以用於單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來，經洗滌，再離心後直接稱重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過濾後用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱重求出濕重。不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內，於105℃烘乾至恆重，取出放入乾燥器內冷卻，再稱量，求出微生物乾重。

2. 溶酶體Rag-Ragulator復合物調控RIPK1，你了解嗎

在感染期間，耶爾森氏菌對蛋白激酶 TAK1 的抑制觸發了成孔蛋白 Gasdermin D (GSDMD) 的裂解，這會導致一種稱為細胞焦亡的炎性細胞死亡。確定溶酶體系留的調節超級復合物是耶爾森氏菌誘導的細胞焦亡的關鍵驅動因素。需要 GTPase Rag 的活性和 Rag-Ragulator 的溶酶體束縛來募集和激活激酶 RIPK1 和蛋白酶 caspase-8 以切割 GSDMD，從而導致細胞死亡並限制感染。相比之下，炎症小體介導的細胞焦亡不需要 Rag-Ragulator。 因此，溶酶體上的代謝信號可以調節病原細菌感染期間的細胞死亡。

為了確定耶爾森氏菌激活 RIPK1–caspase-8 依賴性細胞焦亡的分子機制，我們使用表達 Cas9 的永生化小鼠骨髓衍生巨噬細胞進行了全基因組 CRISPR 篩選，這些巨噬細胞感染了單向導 RNA 的全基因組文庫–編碼慢病毒。對抗 caspase-8 或 caspase-11 依賴性細胞焦亡的細胞基因組進行測序，以確定細胞焦亡所需的敲除基因。