A. 儀器分析——薄層色譜法
薄層色譜法,系將供試品溶液點樣於薄層板上,經展開、檢視後所得的色譜圖,與適宜的塌亮對照物按同法所得的色譜對比,用於葯品的鑒別或雜質檢查的方法。
1.儀器與材料
(1)薄層板
自製薄層板玻板要求光滑、平整,洗凈後不附水珠,晾乾。最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H和硅膠HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小,一般要求直徑為5~40μm.
薄層塗布,一般可分為無黏合劑和含黏合劑兩種;前者系將固定相直接塗布於玻板上,後者系在固定相中加入一定量的黏合劑,一般常用10%~15%煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃加熱4小時),混勻後加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.2%~0.5%)適量調成糊狀,均勻塗布於玻板上。使用塗布器塗布應能使固定相在玻板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板,如硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚醯胺薄膜和鋁基片薄層板等。
(2)點樣器同紙色譜法項下。
(3)展開容器應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,並有嚴密的蓋子,底部應平整光滑,或有雙槽。
(4)顯色劑見各品種項下規定。可採用噴霧顯色、浸漬顯色或置碘蒸氣中顯色,檢出斑點。
(5)顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細霧狀噴出;浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的玻璃缸代用;蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的乾燥器代替。
(6)檢視裝置為裝有可見光、短波紫外光(254nm)、長波紫外光(365nm)光源及相應濾片的暗箱,可附加攝像設備供拍攝圖像用,暗箱內光源應有足夠的光照度。
2.操作方法
(1)薄層板制備
自製薄層板除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡後,倒入塗布器中,在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布(厚度為0.2~0.3mm),取下塗好薄層的玻板,置水平台上於室溫下晾乾後,在110℃活化30分鍾,即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
市售薄層板臨用前一般應在110℃活化30分鍾。聚醯胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據需要剪裁,但須注意剪裁後的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在貯放期間被空氣中雜質污染,使用前可用適宜的溶劑在展開容器中上行展開預洗,110℃活化後,放乾燥器中備用。
(2)點樣除另有規定外,用點樣器點樣於薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑為2~4mm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜,一般為1.0~2.0cm。點樣時必須注意勿損傷薄層板表面。
(3)展開展開缸如需預先用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,並在壁上貼兩條與缸團戚寬一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封頂蓋,使系統平衡或按各品種正文規定操作。[醫學教育 網搜集整理]
將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封頂蓋,待展開至規定距離(一般為10~15cm),取出薄層板,晾乾,按各品種項下的規定檢測。
展開可以向一個方向進行,即單向展開;也可以進行雙向展開,即先向一個方向展開,取出,待展開劑完全揮發後,將薄層板轉動90°,再用原展開劑或另一種展開劑進行展開;亦可多次展開。
(4)顯色與檢視熒光薄層板可用熒光猝滅法;普通薄層板,如有色物質可直接檢視;無色物質可用物理或化學方法檢視。物理方法是檢出斑點的熒光顏色及強度;化學方法一般用化學試劑顯色後,立即覆蓋同樣大小的玻板,檢視。
3.系統適用仔輪性試驗來源:www.examda.com
按各品種項下要求對檢測方法進行系統適用性試驗,檢測斑點的檢測靈敏度、比移值(Rf)和分離效能應符合規定。
(1)檢測靈敏度系指雜質檢查時,採用對照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對照溶液在規定的色譜條件下,在同一塊薄層板上點樣、展開、檢視,前者應顯示清晰的斑點。
(2)比移值(Rf)系指從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比率。
可用計算供試品溶液主斑點與對照品溶液主斑點的比移值進行比較,或用比移值來說明主斑點或雜質斑點的位置。
(3)分離效能鑒別時,對照品與結構相似的葯物對照品製成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點。雜質檢查時,雜質對照品用供試品自身稀釋對照溶液或同品種對照品溶液溶解製成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點,或待測成分與相鄰的雜質斑點應清晰分離。
4.測定法來源:考試大
(1)鑒別可採用與同濃度的對照品溶液,在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視,供試品溶液所顯主斑點的顏色(或熒光)與位置(Rf)應與對照品溶液的主斑點一致,而且主斑點的大小與顏色的深淺也應大致相同。或採用供試品溶液與對照品溶液等體積混合,醫學 教育 網搜集整理 應顯示單一、緊密的斑點;或選用與供試品化學結構相似的葯物對照品與供試品溶液的主斑點比較,兩者Rf應不同;或將上述兩種溶液等體積混合,應顯示兩個清晰分離的斑點。
(2)雜質檢查可採用雜質對照品法、供試品溶液的自身稀釋對照法或雜質對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法並用。供試品溶液除主斑點外的其他斑點應與相應的對照品溶液或系列對照品溶液的主斑點比較,或與供試品溶液的自身稀釋對照溶液或系列自身稀釋對照溶液的主斑點比較,不得更深。
通常應規定雜質的斑點數和單一雜質量,當採用系列自身稀釋對照溶液時,也可規定估計的雜質總量。
B. 如何用化學方法鑒別麥芽糖,澱粉和纖維素
允許的話只需要品嘗鑒別出麥芽糖,只有它微甜,澱粉有黏稠感。
化學方法的話分別用碘酒和斐林試劑,澱粉遇碘變藍。麥芽糖和斐林試劑反應生成氫氧化亞銅磚紅色沉澱、注意不是樓上所說的銅單質。
希望能對你有所幫助。
C. 用什麼方法鑒別直鏈澱粉、支鏈澱粉、纖維素和麥芽糖
加入銀氨溶液,發生銀鏡逗桐反應的是麥芽糖,直鏈澱粉、支鏈澱粉、纖維素無變化;加入碘,直連澱粉友陵遇碘山告坦顯藍色,支鏈澱粉遇碘顯紫色,纖維素無變化。
D. 急~~各位大神幫幫忙,關於醫學葯物結構分析...在線等的
中葯化學成分的預試驗
系統預試法——應用一些簡單的定性試驗,對中葯中所含各類化學成分作全面檢查。
單項預試法——根據需要,有重點的檢查某類成分或某葯效成分。
方法:試管反應+薄層層析檢查
中草葯主要來源於植物。植物的化學成分較復雜,有些成分是植物所共有的,如纖維素、蛋白質、油脂、澱粉、糖類、色素等。有些成分僅是某些植物所特有的,如生物鹼類、甙類、揮發油、有機酸、鞣質等。
各類化學成分均具有一定的特性,一般可由葯材的外觀、色、嗅、味等作為初步檢查判斷的手段之一。如葯材樣品折斷後,斷面不油點或擠壓後有油跡者,多含油脂或揮發油;有粉層的多含澱粉、糖類;嗅之有特殊氣味者,大多含有揮發油、香豆精、內酯;有甜奈者多含糖類;味若者大多含生物鹼、甙類、苦味質;味酸者含有有機酸;味澀者多含有鞣質等等。
中草葯所含化學成分均為多類的混合物,分析時常常互相干擾,不易得到正確結果。因此需根據中草葯所含各種化學成分的溶解度、酸鹼度、極性等理化性質,再用各類成分的鑒別反應加以鑒別。
一、 預試溶液的制備
1、 水提取液——糖、多糖、有機酸、皂苷、酚類、鞣質、氨基酸、多肽、蛋白質……
2、 乙醇提取液——酚類、鞣質、有機酸、香豆素、強心苷、黃酮、蒽醌、甾體……
3、 5%HCl-乙醇提取液——生物鹼
4、 石油醚提取液——甾體、萜類、脂肪油……
(一)鑒別注意事項
1.根據各灰成分不同性質,選用適宜的溶劑提取,以保證等成分能被提取出來。
2.檢品提取液的濃度應足以達到各該反應的靈敏度。
3.檢品提取液的酸鹼度(pH)值應不致影響鑒別反應中所需要的pH值。相差甚大時應事先調節。
4.提取液較深時,常易影響觀察鑒別反應的效果,此時可適當稀釋,或進一步提純。
5.鑒別反應時應注意防止多類成分的相互干擾,以免出現假陽性,或顏色不正等情況。最好在化學鑒別的同時,做空白試驗和對照試驗(用已知含某類成分的中草葯或純品做陽性對照)。
6.在鑒別試驗中,如果某一類成分的幾個鑒別反應結果不一致時(即有的呈陽性反應,有的呈陰性)則應進行全面分析。首先應注意呈陽性反應的試驗是否屬於該類成分的專一反應,否則應檢查其他類成分能否產生該反應,從多方面加以判斷。但也應注意,某些反應只能對某一類成分中的某個化學基團呈性反應,如檢查黃酮類的鹽酸――鎂粉試驗,它只對黃酮類中的羥基黃酮類(黃酮醇類)反應明顯,其餘類的黃酮類則不甚明顯,但也不能輕易否定不是黃酮類,為了避免孤立和片面的下結論,一定要全面考慮綜合分析。
中草葯化學成分一般鑒別試驗屯只是一個初步判斷,最後確證尚需進一步提純,以鑒定後才能予以肯定。
(二)鑒別方法
1、 氨基酸、多肽、蛋白質
(1)加熱沉澱試驗:加熱煮沸 →混濁或沉澱 (蛋白質)
+5%H2SO4(不加熱)→混濁或沉澱
(2)雙縮脲反應:+40%NaOH,1%CuSO4 →紫色、紅色或紫紅色(多肽、蛋白質)
(3)茚三酮反應:+0.2%茚三酮試液 →藍或藍紫色(氨基酸、多肽、蛋白質)
(4)吲哚醌反應:+吲哚醌試液 →各種顏色(氨基酸)
(5)Millon反應:+Hg,H2NO2 →紅色(蛋白質分子中有酪氨酸組成)
(6)Hopkins-Cole反應:+乙醛酸,濃硫酸 →各色(蛋白質分子中有色氨酸組成)
(7)氨基酸的薄層層析檢查:吸附劑——硅膠G
展開劑—— n-BuOH,n-BuOH:HAc:H2O
顯色劑——0.25%茚三酮試液 →紫紅色斑點
(1)加熱或礦酸試驗:取檢品的水溶液1ml於試管中,加熱至沸或加5%鹽酸,如發生混濁或有沉澱示含有水溶性蛋白質。
(2)縮二脲試驗:取檢品的水溶液1ml,加10%氧化鈉溶液2滴,充分搖勻,逐漸加入硫酸銅試液,隨加搖勻,注意觀察,如呈現紫色或紫紅色示可能含有蛋白質和氨基酸。
凡蛋白質結構中含有兩個或兩個以上肽鍵(-CONH-)者均有此反應,能在鹼性溶液中與Cu2+生成仙絡合物,呈現一系列的顏色反應,二肽呈藍色,三肽呈紫色,加肽以上呈紅色,肽鍵越多顏色越紅。
(3)茚三酮試驗,取檢品的水溶液1ml,加入茚三酮試液2-3滴,加熱煮沸4-5分鍾,待其冷卻,呈現紅色棕色或藍紫色(蛋白質、腖類、肽類及氨基酸)。
氨基酸與茚三酮的水合作物作用,氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被還原成仲醇,與所後成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍紫色的化合物。
【注】①茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑,反應在1小時內穩定。試劑溶液pH值以5-7為宜,必要時可加吡啶數滴或醋酸鈉調整。 ②此反應非常靈敏,但有個別氨基酸不能呈紫色,而呈黃色,如脯氨酸。
(4)氨基酸薄層層析檢出反應:
①吸附劑:硅膠G。
②展開劑:(1)正丁醇:水(1:1)(2)正丁醇:醋酸:水(4:1:5)
③顯色劑:0.5%茚三酮丙酮溶液,噴霧後於1100烘箱放置5分鍾,顯藍紫允或紫色。
2、 皂苷
(1)泡末試驗:振搖 →大量持續性泡末
+0.1M HCl 二管泡末高度相同(三萜皂苷)
+0.1M NaOH 鹼管高於酸管(甾體皂苷)
(2)溶血試驗:+2%紅血球懸浮液 →溶血
(3)Lieberman—Burchard反應:+醋酐-濃硫酸—— 紫紅色(三萜皂苷)
黃-紅-紫-污綠(甾體皂苷)
(1)泡沫試驗:取檢品的水溶液2ml於帶塞試管中,用力振搖3分鍾,即產生持久性蜂窩狀泡沫(維持10分鍾以上),且泡沫量不少於液體體積的1/3。
【注】常用的增溶劑吐溫、司盤,振搖時均能產生持久性泡沫,要注意區別。
(2)溶血試驗:取試管4支,分別加入濾液0.25、0.5、0.75 ml,然後依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5 ml,使每一個試管中的溶液都成為2.5ml, 再將各試管加入2%的血細胞懸液2.5ml,振搖均勻後,同置於370水浴或25-270的室溫中注意觀察溶血情況,一般觀察3小時即可,或先滴紅細胞於顯微鏡下,然後滴加檢液看血細胞是否消失。如有溶血現象示正反應。
【注】①鞣質對血紅細胞有凝集作用,干擾溶血試驗的觀察,應事先除去(可用取勝醯胺粉吸附或用明膠沉澱)。 ②檢液應為中性溶液。
(3)醋酐濃硫酸試驗(Liebrmann Burchard反應)取檢品的水溶液置蒸發皿中,於水浴上蒸干,殘渣加入少量冰醋酸使溶解,再加入醋酐濃硫酸(19:1)試液,呈現紅紫色並變成污色綠色(甾類、三萜類成分或皂甙)
(4)區別甾體皂甙和三萜皂甙:取帶塞試管兩支,各盛檢品的水溶解1 ml,1支加0.1N鹽酸溶液2ml,另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鍾(需左右手交替振搖各半分鍾),觀察兩管泡沫的多少,若兩管泡沫體積相同或酸管多,示含三萜式皂甙;若加鹼管泡沫多於加酸管示含甾示含甾體皂甙。
三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩定的泡沫;甾體皂甙為中性皂甙在鹼笥溶液中能形成較穩定的泡沫。
濃硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、濃硫酸-香草醛等的顯色原理主要是使羧基脫水,增加雙鍵結構,再經雙鍵位移,雙分子縮合等反應生成共軛雙鍵系統,又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色
3、 糖和苷
(1)斐林試劑:+硫酸銅、酒石酸鉀鈉 —— 磚紅色沉澱(還原糖)
(—)+1%HCl +NaOH 沉澱(苷元)
△30min 上清液(+)(多糖、苷)
(2)Molish反應:+α-萘酚-濃硫酸 →紫紅色環
(3)銀鏡反應:+0.1N硝酸銀、5N氨水 →銀褐色(還原糖)
(4)薄層層析檢查::吸附劑——硅膠G或纖維素
展開劑—— n-BuOH:Pd:H2O;15%HAc
顯色劑—— 苯胺-鄰苯二甲酸
(1)鹼性酒石酸銅試液:取檢品的水溶液1-2ml(如為醇溶液須將醇蒸發除去),加入鹼笥酒石酸銅試液1ml,於沸水浴上加熱5分鍾,產生棕紅色或磚紅色氧化亞銅沉澱,示有還原糖。
還原糖能使二價銅鹽(藍色)還原成氧化亞銅,醛糖的醛基氧化成羧基:
【注】①如檢液呈酸性,應先鹼化。 ②此反應所產生的沉澱由於條件不同,其顏色也不同,質點上的呈黃色,質點大的呈紅色。有保持性膠體存在時,也常產生黃色沉澱。 ③職樣品中含有其他醛、酮及還原較強的其他成分,或中劃葯制劑中附加的抗氧劑、;葡萄糖等均可顯陽性反應。
(2)α萘酚試驗(Molisch紫環反應):取檢品的水溶液1ml,加5%萘酚試液數滴振搖後,沿管壁滴入5-6滴濃硫酸,使成兩液層,待2-3分鍾後,兩層液面出現紫紅色環(糖、多糖或甙類)。
多糖類遇濃硫酸被水解成單糖,單糖被濃硫酸脫水閉環,形成糠醛類化合物,在濃硫酸存在下與α萘酚發生酚醛縮合反應,生成紫紅色縮合物。
【注】①甙的分子結構中含有糖基,一般屬於單糖類,如葡萄糖,鼠李糖、半乳糖,但也有含二分子糖(雙糖)或多分子糖(多糖)。在上述反應條件下,甙被水解成單糖,因此甙萘酚試驗,系分子中糖部分的反應。 ②由於此反應較為靈敏,如有微量濾紙纖維或中草葯粉末存在於溶液中,都能產生上述反應。故濾過時應加註意。
(3)多糖的確證試驗:取檢品的水溶液5ml於水蒸發至干,加入1ml蒸餾水,再加入乙醇5ml,如出現沉澱,濾過收集後用少量熱乙醇洗滌,再將沉澱物溶於3ml蒸餾水中,做下例試驗。
①碘試驗:取檢品的不溶液1ml,加碘試液1滴,觀察顏色變化,如呈藍黑色為地衣糖;紫黑色為糊精;藍色加熱消失,冷後藍色再現為澱粉。
②多糖水解:取檢品的水溶液1ml,加入稀鹽酸5滴,置沸水浴中加熱10-15分鍾,然後用10%氫氧化鈉液中和至中性,再加新配製的鹼性酒石酸銅試淮4滴,另取檢液1ml,不加酸水解直接加入上述試液4滴,兩管同置水浴上煮沸5-6分鍾。如果水解後生成棕紅色常常物的量比未經水解的多,則示有多糖。
多糖水解後產生單糖,利用單糖的還原性,使銅離子還原成氧化亞銅。
4、 酚類和鞣質
(1)FeCl3試劑:+1%FeCl3試液 →藍、暗綠或藍紫色
(2)三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑:噴灑→藍色斑點
(3)香草醛-鹽酸試劑:噴灑 →紅色(間苯二酚、間苯三酚)
(4)重氮鹽試劑:+對硝基苯胺、亞硝酸鈉 →紅色
(5)薄層層析檢查:吸附劑——硅膠G或纖維素
展開劑—— n-BuOH:HAc:H2O;15%HAc
顯色劑——1% FeCl3試液
1%三氯化鐵-1%鐵氰化鉀試液 →藍、綠或黑色
鞣質與酚類的區別:+明膠 —— 沉澱
上清液 +1%FeCl3試液 →藍、暗綠或藍紫色
(1)三氯化鐵試驗:取檢品的水溶液1ml,加三氯化鐵試液1-2滴,呈現綠色、污綠色、藍黑色或暗紫色(可水解鞣質顯藍一藍黑色,縮合鞣顯綠色一污綠色)。
鞣質均是多羥基酚的衍生物,即多元酚,能和三價鐵離子發生顏色反應生成復雜的絡鹽。
【注】此反應如遇有礦酸或有機酸、醋酸鹽等存在,能阻礙顏色的生成。硝基酚類對三氯化鐵試劑無明顯反應。
(2)明膠試驗:取檢品的水溶液1ml,加氯化鈉明溶液2-3滴,即生成白色沉澱物。
鞣質有凝固蛋白的性能。
(3)溴試驗:取檢品的水溶液1ml,加溴試液1-2滴,生成白色或沉澱物,示可能含有酚或兒茶酚鞣質。
【注】過多的溴會阻礙鞣質的沉澱,因此溴水不宜多加。
(4)香草醛一酸試驗:取檢品的水溶液點於濾紙片上,干後,噴霧或滴加香草醛一鹽酸試液,呈現紅色斑點(多元酚類物質)。
(5)鞣質、酚類薄層層析檢出反應:
①吸附劑:聚醯胺;硅膠;硅膠;石膏:水(5:1:7)調成狀,塗成薄板,1050烘乾45分鍾。
②展開劑:乙醇:醋酸(100:2);正丁醇:乙酸乙酯:水(5:4:1);苯:甲醇(95:5)。
③顯色劑:10%三氯化鐵溶液;1%三氯化鐵乙醇溶液與1%鐵氰化鉀水溶液(1:1)顯藍一紫色斑點。
5.黃酮及其甙類
(1)鹽酸-鎂粉反應:+HCl-Mg →紅色
(2)三氯化鋁反應:+AlCl3 →黃色
(3)濃氨水反應:+NH3 →亮黃或橙色
(4)薄層層析檢查:吸附劑——聚醯胺或硅膠G
(1)鹽酸一鎂(或鋅)粉試驗:取檢品的乙醇溶液1ml,加放少量鎂粉(或鋅粉),然後加濃鹽酸4-5滴,置沸水浴中加熱2-3分鍾,如出現紅色示有游離黃酮類或黃酮甙(以同法不加鎂或粉做一對照,如兩管都顯紅色則有花色素存在。如繼續加碳酸試液使成鹼笥即變成紫色雙轉變為藍色,即證明含花色素)。
黃酮類的乙醇溶液,在鹽酸存在的情況下,能被鎂粉還原,生成花色甙元而呈現紅色或紫色反應(個別為淡黃色、橙色、紫色或藍色)。這是由於酮類化合物分子中含有一個鹼性氧原子,致能溶於稀酸中被還原成帶四價的氧原子即鋅鹽。本法是鑒別黃酮類的一個反應。但花色素本身在酸性下(不需加鎂粉)呈紅色,應加以區別。
【注】①此反慶僅在化學結構中,第三位上帶羥基的酮醇類顯色較明顯,而其它黃酮烷酮類均不甚明顯。因此試驗呈陰性反慶是不能做出否定的結論,尚需結合其他實驗再做結論。 ②試驗應在醇中進行,水分多會影響顏色的生成。此反慶較慢,有時需置水浴上加熱,以促使反應的進行。
(2)熒光試驗:
①三氯化鋁試驗:取檢品的乙醇溶液點於濾紙片上(干後再點1次,使其濃度庥中),干後,噴霧1%三氯化鋁乙醇試液,在紫外光燈下觀察,呈現黃色、綠色、橙色等熒光為黃酮類;呈現天藍色或黃綠色;熒光,則為二氫黃酮類。這是區別二氫黃酮類化合物的一種鑒別反應。
②硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗:取檢品的乙醇溶液1ml,在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10%枸櫞酸丙酮溶液各0.5ml,蒸去丙酮後,在紫外光燈下觀察,管內呈現強烈的綠色熒光(黃酮或其甙類)。
(3)鹼液試驗:取檢品的乙醇溶液點於濾紙片上(干後,再點一次,使其溶液集中),干後,噴1%碳酸鈉溶液或在氨蒸氣中熏幾分鍾,呈現亮黃、綠或橙黃色。如將氨氣熏過的濾紙露置空氣中,顏色逐漸裉去而變為原有的顏色(黃酮或其甙類)。
5、 生物鹼
(1)沉澱反應——碘化汞鉀試劑 →白色或淺黃色沉澱
碘化鉍鉀試劑 →橘紅色沉澱
碘—碘化鉀試劑 →淺棕或暗棕色沉澱
硅鎢酸試劑 →淺黃或黃棕色沉澱
磷鎢酸試劑 →淺黃色沉澱
磷鉬酸試劑 →白色或淡黃色沉澱
苦味酸試劑 →黃色結晶或非結晶形沉澱
鞣酸試劑 →棕黃色沉澱
氯化金試劑 →黃色結晶
氯化鉑試劑 →白色結晶
雷氏銨鹽 →紅色無定形沉澱
(2)薄層層析檢查:吸附劑——鹼性氧化鋁(Ⅲ級,干法鋪板)
硅膠G(稀鹼濕法鋪板)
展開劑——氯仿:甲醇
顯色——UV;碘化鉍鉀
6、 有機酸
(1)PH試紙檢查
(2)溴酚蘭試液:噴灑→藍色背景黃色斑點
(3)薄層層析檢查:吸附劑——硅膠G或酸性氧化鋁
展開劑—— C6H6:EtOH
顯色劑——0.1%溴酚蘭試液→黃色
7、甾體
(1)Lieberman—Burchard反應:+醋酐-濃硫酸 →黃-紅-紫-污綠
(2)氯仿-濃硫酸反應:+氯仿-濃硫酸 氯仿層→紅或青色
硫酸層→綠色熒光
(3)五氯化銻或三氯化銻反應:+SbCl3或SbCl5 →紅色
(4)薄層層析檢查:吸附劑——中性氧化鋁或硅膠G
展開劑—— C6H6-MeOH;CHCl3-MeOH
顯色劑—— 10%磷鉬酸 →藍-藍紫色
5%三氯化銻試液 →紅、棕紅或綠色
9、香豆素、內酯
(1)開閉環反應:+1%NaOH→澄清 +2%HCl→混濁
(2)異羥污酸鐵反應:+7%鹽酸羥胺、10%KOH △ +稀HCl、1%FeCl3 →紅色
(3)重氮鹽試劑:+對硝基苯胺、亞硝酸鈉 →紅色
(4)薄層層析檢查:吸附劑——酸性硅膠G或硅膠G 或酸性氧化鋁
展開劑—— 甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)
顯色劑—— UV→藍色熒光
異羥污酸鐵試液 →紅色
10、強心苷
(1)Kedde試劑:+3,5-二硝基苯甲酸試液 →紫紅色
(2)Baljet試劑:+鹼性苦味酸試液 →橙或橙紅色
(3)Legal試劑:+亞硝醯鐵氰化鈉試液 →紫紅色
(4)K-K反應:+FeCl3/冰HAc、濃H2SO4→ 上層綠~藍色 (2-去氧糖)
界面紅棕色
(5)薄層層析檢查:吸附劑——硅膠G 或中性氧化鋁
展開劑—— n-BuOH:HAc:H2O(4:1:5)
顯色劑—— 鹼性3,5-二硝基苯甲酸試液→紫紅色
鹼性苦味酸試液 →橙紅色
11、蒽醌
(1)鹼液反應:+10%NaOH →紅色 +H2O2 →紅色不褪 +H+ →紅色褪去
(2)醋酸鎂反應:+1%MgAc2 →紅色
(3)薄層層析檢查:吸附劑——硅膠G
展開劑——Pet:EtOAc
顯色劑—— UV→黃色熒光
5%NaOH →紅色
12、揮發油、油脂
(1)油斑檢查:油斑揮發 →揮發油; 油斑不消失→油脂或類脂
(2)磷鉬酸反應:噴灑5%磷鉬酸試液 →藍色(油脂、三萜、甾醇)
最後重點提醒:以上各試劑的配製方法最好參照葯典來配製,原因一是上面寫得很詳細,二是葯典中有個規定,葯典上配製的溶液要是要用到乙醇的,如果沒有指定用無水乙醇,一般是要用95%的乙醇的。
另外附一個試劑的配法:
氯化鈉明膠試劑:(兩者都是固體,剛開始我還真不知道怎樣配,後來在葯典才發現配方)2g氯化鈉和1g明膠,再加上100g水,要求是現配的!