核酸血清檢測方法

A. pcr核酸檢測是什麼意思方法及步驟

核酸檢測是目前全球用來對是否攜帶新冠病毒進行確定的一種有效方式。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗體血清lgm進行參考。但是根據最新的新加坡入境要求是進行pcr核酸檢測，那麼pcr核酸檢測是什麼意思呢？

pcr核酸檢測是什麼意思

PCR的意思是聚合酶鏈式反應，能夠用來擴增DNA，從而將微量的DNA擴增到能夠檢測的程度。有些病毒的核酸是DNA，需要採用這個方法進行檢測。所以PCR並不是進行的檢查，而是檢測DNA的一種方法。比如乙肝病毒DNA定量，用的就是這一種方法。檢查DNA的目的，一方面是可以診斷疾病，如果連病原體的DNA都能檢測到，就說明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復制的多少，從而判斷病情嚴重程度或者治療效果。

pcr核酸檢測方法與步驟

進行核酸檢驗，需要經過取樣、留樣、留存、核酸提取、上機檢測五個步驟。

核酸檢測的第一步就是採集人體分泌物，用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽後壁及雙側咽扁桃體處。

第二步醫務人員進行留樣，將試子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後立即旋緊管蓋。

第三部要將樣本放入密閉袋中，保存好並及時送檢。

第四步將樣本送進實驗室，提取核酸。

第五步，將提取物進行熒光PCR擴增反應。

核酸是什麼

核酸(nucleicacid)，是一類由核苷酸(nucleotide)構成的生物大分子，分為核糖核酸(ribonucleic
acid，宴前者RNA)和脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid，DNA)兩類，其中RNA多為單鏈結構，DNA多為雙鏈結構。除朊病毒(prion)外，核酸是構成生命所必需的生物大分子，其主要作用是構成生命體的遺傳信息載體，除此之外，還有部分核酸可作為及參與構成具有生物活性的酶分子或晌薯其他分子機器
。

核酸檢測是什麼

核酸檢測顧名思義就是針對核酸開展檢測。

核酸檢測有何獨特的優勢呢?為何能作為新冠病毒確診的「金標准」呢?

其實每一種檢測方法都有其擅長的應用場景。以病毒檢測為例，通常的免疫學檢測方法(膠體金、ELISA、化學發光等)的檢測對象是病毒的抗原或抗體，相當於「側面描繪」。由於從感染到可檢測存在一個時間窗口期，因此免疫學檢測方法一般不合適作為早期診斷。

假陽性與假陰性

1、假陽性

假陽性通常比較少。一般實驗室人員操作不當會導致樣本間交叉污染或擴增產物的遺留污染，該種情況下可能會導致假陽性。

不過假陽性可以通過嚴格控制檢測流程、以及執行若干個陰性樣本隨機參與檢測的策略而有效規避。

2、假陰性

在這里需要說明的是，PCR檢測的假陰性與臨床的假陰性實際上不是一個概念。

以網路上激烈討論的新冠病毒的診斷為例，臨床假陰性是指臨床症狀和影像學高度疑似被感染、但PCR檢測卻多次或始終為陰性的情況;而PCR檢測假陰性是指所採集樣本中存在足夠量的新型冠狀病毒但卻沒有檢出悔簡的情況。

避免核酸檢測的假陰性，主要需要解決：(1)被感染者的細胞中有足量的病毒、(2)採集樣本中可以採集到含有病毒的細胞、以及(3)檢測出樣本中的病毒這三個環節。

其中PCR試劑盒的技術參數優劣主要影響第三個檢測環節。

僅針對第三個檢測環節，若樣本中病毒數量低於一個程度(低於最低檢測限)，PCR試劑盒就無法檢出。從這個角度看，PCR檢測的假陰性是無法完全避免的。這也是為何需要補充開發病毒的特異抗體檢測的原因所在。

沈陽PCR核酸檢測實驗室

實驗室建設堅持高標准、嚴要求，嚴格按照國家《醫學生物安全二級實驗室建築技術標准》進行建設，建設面積100餘平方米，分為試劑貯存和准備區、標本制備與提取區、擴增和產物分析區三個區域。實驗室內配置全自動核酸提取儀、實時熒光定量PCR儀、擴增儀、高壓滅菌器、B2型生物安全櫃、超凈工作台、超低溫冰箱等儀器，消毒和防護設施齊全，符合相關生物實驗室安全標准。為防止實驗室外的區域被污染，實驗室的氣壓均為負壓，有效降低感染風險。此外，實驗室配備了污水處理系統，達到了廢液的合理排放和處理。

*目前我國多地區建設了PCR核酸檢測實驗室用以進行新冠病毒核酸檢測

B. 核酸檢測是怎麼檢測是抽血嗎

有些病毒的檢查需要抽血進行的，那麼像核酸檢測是怎麼檢測，是抽血嗎？

核酸檢測可通過抽血檢查，這也是診斷新冠狀病毒性感染的主要依據，一般連續兩次核酸檢測陽性即可診斷新冠狀病毒性感染。新冠狀病毒的核酸檢測也可以採用咽拭子或抽血的方法來檢測，如果均為陽性，則可診斷為新冠狀病毒。此外還可對新型冠狀病毒肺炎患者進行肺部ct及血常規、c反應蛋白、凝血等檢查。如有發熱、乾咳、乏力等症狀，應及時到醫院化驗血常規及核酸檢查，以明確是否有新的冠狀病毒感染。

不過目前核酸檢測的主要流程是採集咽拭子，目前新冠肺炎核酸檢測主要是採取咽拭子的方法，也可以用吸痰的方法吸取氣管內的分泌物。常用的咽拭子方法是通過一種長的棉棍從鼻孔或者口腔進入到咽後壁，刮取咽喉壁黏膜的分泌物做檢測，所以一般會有相關的痰熱淤積與喉嚨部。

C. 核酸檢驗方法

核酸檢測具體流程如下：
1. 核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
2. 逆轉錄合成cDNA
逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
3. PCR擴增反應（使用二次擴增的套式PCR擴增方法）
PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
4. 擴增產物定性分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
5.結果判定和完成報告單
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後5個工作日內發出檢測報告。

D. 核酸幾種方法

1.定磷法。簡單快捷，靈敏度高，但易受蛋白質和核苷酸影響。
2.定糖法。靈敏度高，但特異性差，戊糖也會產生反應，容易產生干擾。
3.紫外線吸收法。適用於濃度大的核酸溶液，而人體感染新冠病毒後，咽部所含的病毒量極少，無法通過此種方法被檢測。
4.熒光法。目前廣泛被使用的是熒光定量RT-PCR檢測法，通過對標本進行逆轉錄擴增、使病毒片段達到一定數量，可以被檢測到，但是由於受采樣標本、運輸等多種因素影響，也有假陰性的可能。

E. 做核酸檢測的正確方法

5月11日，武漢市新冠肺炎疫情防控指揮部涉疫大數據與流行病學調查組印發緊急通知，決定以10天為期，在武漢市范圍內開展全員新冠病毒核酸篩查。而在全國各地也有一些朋友好奇，核酸檢測到底檢測哪個部位？鼻咽拭子和口咽拭子有何不同？做核酸檢測時有哪些注意事項？
首都醫科大學附屬北京地壇醫院感染中核酸檢測標本可以採集深部痰液、鼻咽拭子和口咽拭子。其中口咽拭子和鼻咽拭子統稱為咽拭子，經口的為口咽拭子，經鼻的就是鼻咽拭子。

口咽拭子

鼻咽拭子
做核酸檢測時，我們需要注意什麼呢？
在做核酸檢測前2小時盡量避免進食，以免引起嘔吐；
采樣前30分鍾不應吸煙、喝酒、咀嚼口香糖等；
檢測者需要正確佩戴口罩，檢測前取下口罩，檢測後立即戴好，可准備一個備用口罩，污染後方便及時更換；
在採集鼻咽拭子前檢測者應告知採集人員是否鼻中隔彎曲及鼻腔手術史，過程中可能出現鼻部酸癢感，刺激打噴嚏，可立即用紙巾或手肘遮擋；
鼻咽拭子採集後可能出現少量鼻腔出血，一般不需要特殊處理，如出血量較多請及時到醫院進行處理；
在採集口咽拭子時檢測者頭後仰，張口發出「啊」音，有助於暴露咽喉，但過程中會出現刺激性乾咳、惡心、嘔吐等症狀，檢測者可配合採集人員盡量放鬆、深呼吸；
核酸檢測前後都需要注意手部衛生，可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭雙手。

血清抗體檢測不受飲食影響 無需空腹
一般感染新冠病毒7-10天後，人體會產生針對病毒的特異性抗體。最先出現的是IgM抗體，隨後會出現IgG抗體，所以檢測這些特異性抗體，可以判斷人體是否感染過病毒，而檢測方法就是血清抗體檢測。
血清抗體需要抽取檢測者2-4mL的靜脈血液進行檢測，檢測結果不受飲食和葯物影響，因此檢測前不需要空腹。
為落實好新冠肺炎疫情常態化防控，全國各地陸續公布「核酸檢測機構名單」，推動重點人群「應檢盡檢」、其他人群「願檢盡檢」。目前國家衛生健康委推出「核酸檢測機構查詢」服務，在國務院客戶端上線，目前已有北京、天津、河北、遼寧、黑龍江、上海、江蘇、安徽、福建、山東、河南、湖北、湖南、廣東、廣西、海南、四川、貴州、雲南、寧夏、新疆生產建設兵團上傳的1226家檢測機構。

F. 核酸檢測方法

對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

(6)核酸血清檢測方法擴展閱讀

核酸檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現後，我國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析。

並通過與其它物種的基因組序列對比，發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗檢測過程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染

G. 核酸檢測的方式都有什麼

核酸檢測主要有酸檢測試劑、抗體檢測兩種方法，第一種方法通常是通過咽拭子進行PCR檢測，基因擴增，然後再進行核酸檢測。 而抗體檢測是選擇抽血，抽血的方法得出結果看，觀察其抗體滴度是否升高，這種情況常常是指在抽血前常出現不能產生抗體的情況。

核酸檢測是一種「進行時」檢測，通過聚合酶鏈反應等方法檢測病毒基因組中特定的核酸序列，從而判斷被檢測者此刻是否感染了病毒。

與核酸檢測不同，新冠病毒抗體檢測顯示的是哪些人曾經被感染。抗體檢測又被稱為血清學檢測，目的是檢測血液樣本中的抗體。人體感染病毒後，會產生IgM或IgG抗體。

被感染初期，人體會迅速產生IgM抗體，以抗感染；相比之下，產生IgG抗體的速度更慢，但IgG抗體保留時間更長。抗體檢測就是檢測血清中是否有這些特異性抗體，以確定被測試者是否曾被感染。

(7)核酸血清檢測方法擴展閱讀：

六種人不宜做核酸檢測

一、釆樣前30分鍾，對於有吸煙、喝酒、嚼口香糖等人群不宜做核酸檢測，以免影響檢測的准確度。

二、進食太飽的人不宜做核酸檢測，否則容易發生惡心嘔吐，影響採用結果的准確性。

三、核酸檢測前有口服抗病毒和抗感染的葯物的，應推遲做核酸檢測，避免影響檢測結果。

四、若是進行鼻拭子采樣的話，對於鼻咽部有病症的急性期，如出血、水腫等人群可以暫不予檢測。

五、剛進行核酸檢測時出現惡心嘔吐的人，應暫緩做核酸檢測，需等檢測者緩解後再予以進行。

六、被采樣者用手或其他物品觸及拭子采樣冠、棉簽的前端的不宜進行，否則容易造成污染，影響檢測結果，需更換進行重做。