大腸桿菌檢測微生物方法

① 食品中大腸桿菌的檢測

用大腸桿菌顯色培養基，檢測原理：蛋白腖和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;十二烷基硫酸鈉抑製革蘭氏陽性菌;混合顯色底物分別與大腸菌群和大腸桿菌所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上大腸菌群產生橙紅色的菌落，大腸桿菌產生藍綠色的菌落。
資料出自環凱官網。

② 菌落總數大腸桿菌和致病菌的檢測方法

菌落總數用平皿法,單位是個/ml(每毫升或毫克裡面有多少的完整的菌落),方法是:在無菌操作的前提條件下,吸取1ml的原液加入到9cm的平皿里,在倒入3-5ml(37℃)的營養瓊脂,在37℃的溫箱里培養24小時,取出來計算它的菌落單位總數就行.
大腸桿菌用發酵法,單位是MPN/100ml(每100毫升或毫克的樣品裡面最大可能菌落形成單位)方法是15管法(適合食品)或9管法(適合非食品如游泳池水),用乳糖膽鹽發酵管
致病菌用培養法,只要符合相應的化學，生物試驗就可以判斷為某致病均陽性

③ 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的

大腸桿菌檢測方法分為三種：

1、細菌分離鑒定法

分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌，然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。

37℃孵育18～24小時後，觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。

2、衛生細菌學檢查法

大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，則表示樣品被糞便污染的越嚴重，表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。

大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。

3、全自動微生物定量分析儀（TEMPO）檢測法

全自動微生物定量分析（TEMPO）儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。

TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。

(3)大腸桿菌檢測微生物方法擴展閱讀：

大腸桿菌在生物技術中的應用

這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分，所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出，也不易導致生化危機。

生物工程用的菌株基因組都被優化過，使之帶有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用於分子克隆實驗。

真核基因在大腸桿菌中表達，必須有合適的表達載體(Vector),常用載體：pBV220,pET系統。

目的基因在大腸桿菌中表達的情況：

大腸桿菌更適合原核基因的表達，外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的，外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡，單個細胞的產量又與外源基因拷貝數，基因表達效率，表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。

④ 食品衛生微生物學檢驗.大腸菌數測定

微生物
一、大腸菌群的檢測GB4789.3-2010
第一法 大腸物寬察菌群MPN計數法 第二法 大腸菌群平板計數法

1.1月桂基硫酸鹽胰蛋白腖（LST）肉湯:稱取35.6g溶於1000ml蒸巧拆餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，121℃高壓滅菌15min後備用。雙料除蒸餾水外其他成分加倍。

1.2煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯：稱取30g溶於1000ml蒸餾水中分裝 ，經115℃15min高壓滅菌備用。

1.3無菌生理鹽水：稱取8.5gNaCl溶於1L蒸餾水中。分裝於250ml的錐形瓶中，121℃高壓滅菌15min後備用
1.4結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）：稱取41.6g溶於1L蒸餾水中，充分搖勻，加熱煮沸2min冷卻至50℃，傾注平板。

無菌 1 mol/L NaOH：稱取40 g氫氧化鈉溶於1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓滅菌15 min。

無菌 1 mol/L HCl：移取濃鹽酸90 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。

二、大腸菌群的檢測GB4789.3-2003 第一法 大腸菌群MPN計數法

2.1稱取乳糖膽鹽發酵培養基35.0g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌15min後備用。雙料除蒸餾水外其他成分加倍。

2.2伊紅美藍瓊脂平板：稱取伊紅美藍瓊脂37.5g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝、115℃高壓滅菌15min後備用。

2.3乳糖發酵管：稱取乳糖發酵培養基35.0g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌15min後備用

2.4無菌生理鹽水：稱取8.5gNaCl溶於1L蒸餾水中。分裝於250ml的錐形瓶中，121℃高壓滅菌15min後備用
2.5革蘭氏染色按GB/T4789-2003中罩茄2規定。

⑤ 雞大腸桿菌病微生物學診斷方法

實驗室診斷
１．２．１
普通營養瓊脂平板，３７℃培養１８～２４ｈ，而後進行純化培養。挑取分離培養的單菌落，進行革蘭氏染色、鏡檢。用滅菌接種環勾取少許純培養物接種於各種生化培養基中，３７℃培養１８～２４ｈ後觀察結果。將細菌純培養物用無菌生理鹽水洗下，稀釋成３×１０１１個／ｍｌ的菌懸液，用無菌棉拭子蘸取稀釋液均勻塗布於普通平板，經室溫乾燥３～５ｍｉｎ後，每塊平板貼葯敏紙片３片，３７℃培養１８～２４
２２．１
ｈ。
結果
剖檢病變
剖檢可見病雞胸腔、腹腔內有大量
黃色乾酪樣滲出物；心包積液，心臟有纖維素性滲出物；肝臟腫大，表面瘀血，有纖維素性滲出物；肺臟瘀血，表面的纖維素性滲出物明顯；氣囊混濁、變厚；腎瘀血、質脆，一觸即爛；脾臟瘀血。
２．２病理組織學變化鏡下觀察，可見肝臟有蛋白質纖維膜，肝細胞變性，竇狀隙內紅細胞增多，肝臟瘀血（圖１）；腎臟病變比較嚴重，腎小管上皮細胞壞死，脫離基底膜，腎小管管腔內混有脫落的上皮細胞和滲出物（圖２）；肺表面肺泡細胞塌陷，外有蛋白質纖維膜，肺血管內有大量紅細胞聚集，肺瘀血
（圖３）。
病理剖檢對送檢的２５隻病死雞進行了病
取病死雞心、肝、脾、肺、
理剖檢及大體病變的觀察。１．２．２組織病理學檢查
腎等器官病健交界處部分組織塊，置於１０％福爾馬林中固定，經乙醇脫水後，二甲苯透明、浸蠟，將組織在ＢＭＪ一１生物組織包埋機下包埋成石蠟塊，用ＡＯ一８２５０型組織切片機切片，厚度為５肛ｍ，ＨＥ染色，顯微鏡觀察並照相。

⑥ 求教 大腸桿菌 和 金黃色葡萄球菌 的一般的實驗室檢測方法

大腸桿菌：
大腸桿菌也是有MPN法的，方法是GB5750.12-2006，見「大腸埃希氏菌多管發酵法」，定性也可以參照。如果你只是要鑒定大腸桿菌，不考慮一定要使用國家標准方法，就用普通的辦法，分離單個菌落然後生化鑒定吧。

金黃色葡萄球菌：
這個檢測標准很多呀，比如GB4789.10-2010（定性定量都有）、GB/T18204.7-2000（定性）、GB15892-2012（定性）