1. 菌種鑒定常用的分離方法有哪些
菌種質量檢測的目標包括菌絲形態、菌落特徵以及子實體形態等方面。質量檢測常用方法如下:
(1)建立標準的培養和觀察方法
對於一個栽培品種各菌種的質量檢測,實際上是以該品種典型的生物學特性(包括形態特徵、生理生態特性、栽培習性)為參照標准進行比較,以檢驗菌種是否存在品種退化、菌種老化、病菌侵染、雜菌污染和品種混雜等質量問題。同時,菌種質量檢測不僅要考慮從哪些方面來評價一個菌種的質量優劣,也要考慮用怎樣的標准方法對菌種質量進行評價的問題。因為一定的結果來源於一定的方法和一定的條件。方法和條件不同,結果就失去了可比性,也就無法鑒別,因此,需要建立標准。這些標准包括:培養基、培養條件(溫度、濕度、pH、光照等)、菌種的菌齡等。
(2)連續觀察
在菌種生長過程中,要連續觀察,一切不正常的現象只有在生長過程中才能表現出來。而當菌種長滿培養基表面後,其不正常現象往往會被菌種的過齡而掩蓋。
(3)宏觀檢查
對食用菌母種、原種及栽培種的宏觀檢查要根據其培養特徵來進行(參見前述有關內容),這是菌種生產者及使用者普遍使用的方法,簡單易行,但需要有多年的從業經驗與技術沉澱。如被檢菌種表現出菌落生長速度不一致、氣生菌絲變稀疏或出現扇變菌落、菌落上過早出現色素、或不同特徵的菌落混雜共存、或菌落上出現黑褐色、青灰色、黃褐色或紅色的孢子堆,均可以確定該菌種存在質量問題。優質菌種外觀菌絲潔白、密集粗壯,生長速度一致,齊發並進。
在生產實踐中,廣大菇農和專業工作人員總結出「純、正、壯、潤、香」的質量檢查方法。這種應用感官識別菌種優劣,是經驗的總結,能大致、快速地鑒定出菌種的優劣。具體方法是:
「純」指菌種的純度高,無雜菌感染,無斑塊、無抑制線,無「退菌」、「斷菌」現象等。
「正」指菌絲無異常,具有親本正宗的特徵,如菌絲純白、有光澤,生長整齊,連結成塊,具彈性等。
「壯」指菌絲發育粗壯,長勢旺盛,分枝多而密,在培養基上恢復、定植、蔓延速度快。
「潤」指菌種含水量適中,基質濕潤,與瓶壁緊貼,瓶頸略有水珠,無干縮、鬆散現象。
「香」指具該品種特有的香味,無霉變、腥臭、酸敗氣味。
通過檢測各種食用菌菌絲生長的色澤、速度、均勻度等特徵是否正常,來判斷菌種生長是否正常、是否可用,但辨別不了是否優質高產。
(4)顯微鏡檢查
對菌絲體進行顯微觀察,可以確定菌絲粗細、分枝、隔膜、鎖狀聯合等特性是否均一,是否與該栽培品種的典型特徵一致(參見前述相關內容)。具有不同形態特徵的菌絲體存在於同一菌種體中,表明該菌種存在質量問題;如果出現菌絲體重寄生現象,常表現出不同特徵的菌絲體相互纏繞,或菌絲體中空變細,或在寄生點出現吸器等不正常現象。
鏡檢的方法是:挑取少量菌絲,置載玻片中央的水滴上,用解剖針或接種針撥散,蓋上蓋玻片,也可加碘酒或美藍等染色後進行鏡檢。正常的菌絲一般透明、分枝狀,有橫隔和明顯的鎖狀聯合;異宗結合的食用菌,如僅有單核菌絲,不具結實性,不宜作菌種用;雙核菌絲中,鎖狀聯合多而密,則結菇力強,一般可認為是好菌種。如:
①雙孢菇 觀察雙孢菇單孢子萌發後的菌絲生長形態。凡菌絲潔白、健壯,保存時間較長時菌絲顏色不變,較耐28℃以上氣溫,生長在基質上平貼培養基表面,氣生菌絲不多的,為同化能力較強,產量較高的菌株。相反,菌絲生長初期好,很快變黃變稀,如蜘蛛絲一樣,長出培養基表面菌絲較多的菌株產量較低。
②香菇 觀察香菇的雙核菌絲,在斜面培養基上生長速度達到1.2厘米/天以上的,菌絲不十分粗壯和潔白,鎖狀連合頻繁,鎖狀連合在菌絲間相距較近,且在觀察面上分布均勻,一般均是高產和抗雜能力較強的菌株。香菇出菇的密度與鎖狀連合有一定關系。
③草菇 觀察草菇菌絲,發現菌絲分枝角度大的,出菇率高,產量高。菌絲分枝角度小、平行排列的,產量低。
各種食用菌的菌絲生長是否正常、是否可用,一般都以色澤、速度、均勻度等特徵加以檢測,但這並不能說明其是否優質高產。
(5)拮抗試驗
也稱對峙反應。同一種食用菌,經分離或雜交,將選育出許多不同的菌株,這些菌株的菌絲在形態上很難區別。如不同編號的香菇菌種,都是白色絨毛狀菌絲,鏡檢時均具有鎖狀聯合等。在當前菌種管理工作尚不十分健全的情況下,「同名異種」、「同種異名」的現象普遍發生,要識別異同,可採用「拮抗試驗」加以區別。具體方法是:
用1支20毫米×200毫米的無底試管,中央部位裝入長 5~7厘米的木屑麩糠培養基,兩端壓平並蓋棉塞,滅菌後,兩端各接入兩株受檢的菌種 1小塊,25℃左右條件下培養,當兩端菌絲往中央生長並相互接觸後,把試管移至20℃、約300勒克斯的漫射光下繼續培養,觀察菌絲接觸區有無對峙反應。若無褐色的帶線出現,表示兩個受檢菌株的基因極相似或相同,是相同的菌株,僅編號不同,即同種異名。如果受檢菌株間形成帶線,則表示是不同的菌株。
用平板進行拮抗試驗測試,方法是在無菌的PDA培養基平板上各接入2個或多個被檢菌株的菌種,在上述條件下培養,觀察菌絲相接觸部分有無帶線,以區別相同或不同的菌株。也可用菌種瓶(袋)進行拮抗測試(圖2-11)。
圖2-11 拮抗現象
(6)菌絲長速測定
在適宜的條件下,若菌絲生長迅速、粗壯有力、濃密整齊,一般為優質菌種。若菌絲生長緩慢、中斷或長速極快、稀疏無力、參差不齊和易枯黃萎縮,則為不良菌種。菌絲生長速度測定,可在PDA平板中心接種培養,測量菌落兩個直交直徑,取其平均值。同理,還可在原種、栽培種瓶(袋)壁上劃線測定。
(7)菌絲生長量測定
將等面積的菌苔接入無菌的液體培養基內,在相同的條件下,進行搖床振動培養,經過一定時間後,過濾收集菌絲,反復沖洗干凈後置容器內,80~100℃烘箱中烘乾至恆重後稱重。凡菌絲增殖快、重量重的為優質菌株,而增殖慢、重量輕的為不良菌株。
(8)耐高溫測定
以雙孢菇為例,把菌種置於20~22℃下培養,待菌絲長到1/2試管斜面時,每一菌株取出2~3支試管,置於35℃溫度下,經24小時作抗熱性試驗,然後放到22~23℃下培養,觀察菌絲恢復情況。若菌絲恢復萌發快,仍健壯、旺盛生長,則表明該菌株具有耐較高溫的優良性狀;如果菌絲生長緩慢,出現發黃倒伏,萎縮無力,則為不良菌株。
(9)均一性測定
將母種接種於標准培養基的平板上,並置於標準的環境條件下,每批做30~50個重復,進行長勢和長速的連續觀察記錄。均一性好的品種,每個重復之間長勢和長速幾乎沒有肉眼可見的差異。如果長勢和長速不一,則表明原始的母種的遺傳均一性不良,不宜作生產用種。
(10)純度測定
菌種純度高低是鑒定菌種質量好壞的關鍵環節。優質菌種要求同一管、瓶或袋內只含有所需要的菌種菌絲體,而不能含有其他種類的雜菌。這里所說的雜菌包括細菌、放線菌、酵母菌和各種黴菌,以及含有兩種食用菌菌絲體或同一種食用菌的兩個品種菌絲。凡是被雜菌污染的菌種都是不純菌種,必須予以淘汰。在三角瓶內裝入淺層液體培養基,滅菌後接入經搗散的菌種,25℃條件下培養,約1周觀察,若有氣泡和菌膜發生,並具酸敗味,說明菌種不純,混有雜菌;如果無上述現象則菌種純正無雜。
(11)長勢測定
菌絲長勢包括菌絲生長的狀態和速度。凡是菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力的菌種為優良菌種。如果菌絲生長緩慢,或長速特快、稀疏無力、參差不齊、易於衰老,則表明是劣質菌種。在鑒別菌絲長勢時,必須注意,在不同培養基上、不同培養條件下,同一種食用菌菌絲的長勢不同,因此,判斷食用菌的菌種長勢,應採用相同的培養基,這樣,結果就可靠一些。在外界環境條件相同的情況下,菌絲生長旺盛、生長量多、生長速度快的要好於菌絲生長弱、生長量少、生長速度慢的菌種。還有一種方法是在三角瓶內裝入淺層液體培養基,滅菌後接入經搗散的菌種,25℃條件下培養,約1周觀察浮在液面的菌種。如果菌絲向旁邊迅速生長、健壯有力、邊緣整齊,且不斷增厚,說明該菌株生長勢強;若表面生長慢、稀疏、菌絲層薄,說明長勢弱,不宜用於生產。
(12)抗霉性測定
以木耳為例:制備平板,在平板的一邊分別接入不同的木耳菌株,每一菌株3個重復,在26~28℃下培養。待木耳菌絲長到平板一半左右時,在平板的另一邊接上木黴菌絲,繼續培養。之後注意觀察木黴菌絲與木耳菌絲的交界處,出現拮抗線的表示木耳菌株抗霉能力強,木黴菌絲無法長過去,為抗霉能力強的菌株。如果木黴菌絲很快蓋過木耳菌絲,說明這個木耳菌株的抗霉能力差或沒有抗霉力。
(13)出菇試驗
對引進或分離的同一品種的若干菌株進行出菇對比試驗,必須是在各級菌種的培養基成分、培養溫度、培養時間及栽培條件基本一致的情況下進行。出菇試驗可按菇類的常規栽培方法進行,數量可少些。為使試驗准確,每一菌株設3~4個重復,以避免試驗的偶然性。在位置排放上盡可能按菌名拉丁文排列,以相同的措施管理,在管理過程中對環境因子的變化、管理措施及生長歷程、品種本身性狀等要詳細全面記錄。以香菇為例記載內容如下:
①母種菌絲生長情況,如菌絲濃淡、生長快慢、菌苔韌性等。
②原種、栽培種中菌絲生長情況,如菌絲萌動、吃料、生長快慢;菌種表面有無菌皮或菌皮厚薄,白色顆粒狀物有無或多少;培養基轉色情況等。
③栽培階段應記載:菇木轉色快慢、顏色深淺;出菇快慢、菇生長密度;子實體經濟性狀,包括菇的大小、厚度、色澤、圓整程度、菌柄長度、粗細等;轉潮快慢;對水分的敏感程度;產量及產量分布;出口菇比例等。
通過對記載資料分析,選出綜合性狀符合要求的菌株,供大面積生產或出售。
出菇試驗因季節推遲或其他原因,可採用一種較簡單的方法來彌補,即直接將接有各菌株並已發好菌的瓶(袋)裝菌種,小心地敲破瓶頸或打開塑料袋口,使培養料外露(如果是雙孢菇,則要覆土調好土粒的濕度),置最適宜的溫、濕度條件下進行出菇(耳)管理,觀察記載各項指標,最後進行評比。但這種方法的結果只能提供參考。
(14)栽培指標
採用一定的栽培規模,通過不同地區、不同原料、不同栽培方式,進行多次反復栽培觀察,詳細記錄、評比後,具有優質、高產、高抗、高效和遺傳性、穩定性強的菌株,才是優質和可推廣的品種。其鑒定的內容、方法和指標有:
①吃料能力鑒定 將菌種接入最佳配方的原種培養料中,置適宜的溫、濕度條件下培養,1周後觀察種菇(耳)菌絲的生長情況。如果菌種塊能很快萌發,並迅速向四周和培養料中生長伸展,則說明該品種的吃料能力強;反之,菌種塊萌發後生長緩慢,遲遲不向四周的料層深處伸展,則表明該品種對培養料的適應能力差。對菌種吃料能力的測定,不僅用於對菌種本身的考核,同時還可以作為對培養料選擇的一種手段。
②成活率 將菌種接在適宜的培養基上,若菌絲能很快恢復、定植和蔓延生長,成活率很高,是質量好的菌種;反之,接種後恢復慢,成活率不高是質量差的菌種。
③出菇快慢 一般說,高溫型的出菇快,低溫型的出菇慢,中溫型的介於兩者之間。而以菇的質量來說,高溫型的質量差,低溫型的質量好。但同一溫型食用菌品種的不同菌株,其菌種接種後若菌絲分解培養料能力強,培養前後培養料失重大,出菇快而多,總產高,即是好菌種;否則為劣質菌種。
④菇峰間隔 在一個生產周期中,子實體發生可分數潮次,產菇最多時稱菇峰,最低時稱菇谷,每個菇峰和菇谷構成一潮菇。凡菇潮多,間隔時間短,說明菌絲分解能力強,供子實體發生的養分積累多,因此轉潮快,是好的菌種;反之,菇潮間隔時間長,或不明顯,零星出菇,產量低,即為劣質菌種。
⑤乾燥率 鮮菇經干制後乾燥率高,說明轉化率高,子實體含水分低,為優質菌種。
⑥生物學效率 生物學效率,指每100千克乾料可產多少千克鮮菇。生物學效率高,則菌種質量好,反之為劣質菌種。
(15)經濟指標
高產不一定高效、豐產不等於豐收,要佔領市場,獲得較高利潤,還必須具備商品的要求,如產品的色、香、味、形,檔次,上市時間,貨架期和保質期等。凡是鮮菇上市時間早,產量高、品質好、檔次高、含水量低,不易變色、變質、破碎、失重,無農葯殘毒、殘臭,符合食品衛生標准和得到的利潤高等,均表示經濟指標高,則為優質菌株;而上市有效時間短,易變色、變味、變質,含水量高,失水嚴重,易破碎,利潤低的菌種均為劣質菌種。如香菇以大小適中、肉厚、色深、邊緣內卷,柄短細為優良;雙孢菇以色白、子實體大小適中,菌柄短,不易開傘等為優良;銀耳以色白、開片好、蒂頭小、松泡率高為優良等。
2. 常見食用菌品種母種的培養特徵有哪些
正常的菌種都有一派沒些共同的可供觀察和識別的特徵,根據這些生長特徵,能在較短的時間內識別出你所需要的菌種與生產的菌種是否對應。作為菌種生產者、使用者對菌種的鑒定,一般不是對其品種種性,而是在確定種性的前提下,對大量擴繁後的菌絲體生長狀況的檢查和優劣的鑒別。外觀特徵只有在品種、培養基、培養條件等大致相同的前提下,才有可比性。
(1)雙孢蘑菇
菌絲纖細、稀疏、灰白,優良菌絲上下均勻,沒有生長很快的扇形變異;一般22~24℃,15天以上才能長滿斜面。若超過28℃,菌絲生長就會受抑制而發黃。若菌絲倒伏、發黃或形成黃白色菌被,則不能用於生產。
氣生型:氣生菌絲生長旺盛,白色或灰白色,尖端清晰整齊、挺拔有力,密度均勻,基內菌絲較發達,一般15~25天長滿試管斜面。
半氣生型、匍匐型:菌絲緊貼培養基斜面表面呈索狀生長,挺拔有力,但生長緩慢,排列稀疏、清晰,常呈扇形生長,數日後多出現細細的菌索;菌絲纖細、微黃,氣生菌絲很少,不易形成「菌被」,在適宜的培養基和環境條件下一般22~26天長滿斜面州返。
[鏡檢] 菌絲有隔膜和分枝,節間短,分枝多,節間處膨大,形似臘腸,不產生鎖狀聯合(圖2-9)。
圖2-10 香菇母種的培養特徵
[鏡檢] 菌絲粗壯,粗細比較均勻,具隔膜和分枝,粗2~4微米,有明顯的鎖狀聯合。有的鎖狀突起,頂部寬平;有的呈半圓形,大小不一。
(3)平菇
菌絲潔白、濃密、粗壯、整齊、有光澤、匍匐狀;氣生菌絲發達,多的可布滿試管空間,不產生色素,爬壁能力強。接種塊周圍無菌絲稀疏區。菌冊羨飢絲生長速度快,在適溫20~22℃下,一般6~8天長滿試管斜面,低溫保存能產生珊瑚狀子實體原基。耐高溫,短時間在34℃下正常生長。有些菌株氣生菌絲過多,形成很厚的菌被將管壁布滿,很容易在種塊或管壁上形成原基,因此老化或多次轉管的菌種,不宜使用。有些菌株在高於28℃的溫度下培養或培養時間過長,氣生菌絲頂端往往會變成橘紅色,並產生分泌物,這雖不影響使用,但已不宜擴大培養;氣生菌絲過多的母種也不宜擴大培養。
[鏡檢]菌絲粗細不勻,分枝性強。在顯微鏡視野中,鎖狀聯合比比皆是;鎖狀突起呈半圓形,大小不一;常在菌絲分枝處有兩個鎖狀聯合在上下垂直方向鄰生。
(4)金針菇
菌絲白色或淺灰白色,細絨毛狀,初期較蓬鬆,後期氣生菌絲緊貼培養基表面,稍有爬壁現象。菌絲生長速度較快,黃色品種在適溫20~22℃下,一般10~12天長滿斜面;白色品種稍慢。黃色品種常在培養後期出現黃褐色色素,使菌絲不再潔白,老化時表面出現淡污褐色斑塊;白色品種不如此。時間較長的菌種分泌色素,如菌絲由白色變為灰白或略帶黃色,在管壁出現許多粉狀物(粉孢子),說明菌種開始老化,粉孢子多的菌株,品質一般不理想。低溫貯存時有細水珠出現,斜面上形成少量子實體。
[鏡檢] 菌絲較粗壯,粗細均勻,有鎖狀聯合。菌絲易斷裂成節孢子,有時產生粉孢子成串著生於菌絲上,產生稀薄分布的粉狀物。鎖狀突起一般為半圓形,相當數量的為半抱握形。抱握膨起部分細胞質濃稠,相對部分則現透明。
(5)草菇
菌絲生長初期纖細、無色透明,多分枝,似蠶絲,有金屬光澤,後期呈淡白色、銀灰色,老時呈灰黃色。菌絲生長速度快,在30~32℃條件下,6天即可長滿斜面,再培養2~3天開始出現厚垣孢子,呈鏈狀,初為灰白色、淡黃色,後漸變成褐色至銹紅色(20多天),最後培養基表面出現紫紅色。多為氣生菌絲,氣生菌絲爬壁能力強,在試管內生長蓬亂,布滿整個試管空間,但每根都清晰可見,且不易變黃,斜面上也不產生子實體;若菌絲變為淡黃褐色,則為是老化的表現。不產生厚垣孢子的菌種一般不具結菇能力;若厚垣孢子出現過早過多,則是種性開始老化。若菌絲密集,顏色潔白,可懷疑混有雜菌。
[鏡檢]菌絲粗壯、透明,有分枝(多呈直角形),有明顯的隔膜,形如毛竹,節節分明,但粗細不均勻。厚垣孢子圓形,帶有紅褐色的金屬光澤,無鎖狀聯合。
(6)木耳
初級菌絲纖細、透明,潔白至米黃色;二級菌絲生長均勻一致、短密、潔白,呈棉絮狀,平貼培養基表面,整齊、匐匍生長,生長邊緣整齊有力,不爬壁,生長速度為0.5±0.1厘米/天;有氣生菌絲,但較短而稀疏;後期顏色加深,菌塊分泌褐色色素,出現污黃色斑塊,培養基會因此而變成茶褐色。培養過程中有時會形成淺褐色顆粒狀膠質耳基,這是老化的表現。在綜合PDA培養基上,黑暗恆溫25℃下培養,12~14天長滿斜面。
[鏡檢] 菌絲纖細,粗細不勻,分枝性強,常呈根狀分枝。長相屈曲,有鎖狀聯合,但鎖狀聯合像骨節抱握狀,且數量也沒有香菇那樣多而明顯。初次分出來的菌種,可以看到擔孢子發芽時所產生的鉤狀或馬蹄鐵狀、比細菌略大的分生孢子。
(7)雞腿菇
菌絲淺灰白色,濃密,棉絮狀,生長旺盛,邊緣整齊有力,基內菌絲分泌色素,使斜面培養基顏色加深,部分呈黑褐色。菌絲生長速度較快,適溫25℃,10天左右菌絲即可長滿試管斜面。菌絲隨培養時間延長而變灰色,這是鑒別雞腿菇的重要特徵。
(8)銀耳
有芽孢、銀耳純菌絲、香灰菌絲及銀耳香灰混合菌種等幾種形態。
芽孢:是銀耳的孢子,在PDA培養基上不能萌發成菌絲,而是繁殖成酵母狀物。幼齡芽孢菌落稀糊狀,乳白色,表面光滑,半透明,邊緣整齊,平鋪於培養基表面;隨著培養時間的延長,表面出現皺紋,變為淡棕色。在PDA培養基上菌落黏稠度小,能在培養基表面上流動;在合成培養基上,菌落較乾燥,有時表面有疣點;在營養豐富的培養基上,黏度適中,邊緣能形成放射狀暗花紋。生長速度快,適溫培養4~5天就可長滿培養基斜面。
銀耳純菌絲:白色、淡黃至鵝黃色,直立或平貼,短而細密,生長緩慢,呈白毛團狀,菌絲前端整齊,生長速度極慢,在適溫22℃下日生長速度為1毫米左右,不分泌色素。後期在白毛團周圍有一圈緊貼培養基的暈環,不易膠質化的適於做段木種,易膠質化的適於做袋料種;有無色或淡黃色水珠,在特殊培養基上由芽孢萌發得到,單一菌絲無生產價值。鏡檢時菌絲纖細,有鎖狀聯合。
香灰菌絲:初為無色,大量生長時白色,有特別細長的主幹和對稱的側生分枝,似羽毛狀,且均勻,故又名羽毛狀菌絲。生長快,爬壁能力強,在適溫26~28℃下,一般5~6天長滿斜面。老齡菌絲淡黃或棕色,基內有時帶暗綠色。氣生菌絲灰白色,細絨狀,表面有碳質黑疤,並間有黃綠色分生孢子,菌絲能分泌黑色色素,培養時間長的會使培養基變成黑褐色。鏡檢時菌絲纖細,粗細均勻,有鎖狀聯合,鎖狀突起小而少。
混合菌種:菌種中同時存在銀耳和香灰菌絲。從種木中分離出來的母種,香灰菌絲生長占滿斜面,接種塊處為一簇濃白、密集的菌絲團,稱之為「白毛團」,其他部位均為生長均勻的菌絲體。香灰菌絲深入基內,使培養基變黑,白毛團分泌淡黃色至淡褐色水珠,很快膠質化成為銀耳原基。
(9)靈芝
菌絲纖細、平坦、緻密、潔白、均勻、整齊,匍匐生長,幾乎不見氣生菌絲。隨著菌絲的生長,菌落的擴展,近接種塊處的菌絲逐漸老化而形成堅韌的菌皮,並隨菌皮的老化,色澤逐漸為淡黃色。菌絲不分泌色素,易形成有菌管的子實體原基。在綜合PDA培養基上,28~30℃黑暗培養,一般8~11天長滿斜面。
[鏡檢] 菌絲較纖細,粗細不均勻,有鎖狀聯合。菌絲表面覆有白色結晶物(草酸鈣),旺盛時,充滿菌絲之間的間隙。鎖狀突起中等大小,數量較多。
(10)猴頭
菌絲生長不均勻,白色至灰白色、微黃色,線絨狀,短而稀疏,緊貼在培養基表面,不爬壁,氣生菌絲粗、短、少,基內菌絲多;常不規則地形成索狀物,並在其上形成小子實體原基,外觀上似小疙瘩,較老的菌絲形成節孢子,後期會分泌棕褐色色素,使斜面培養基呈茶色。顏色過深的基內菌絲活力下降而不宜使用。多次轉管後生活力明顯下降,當菌絲呈線粒狀時,很難繼續生長;轉接後菌絲恢復慢,萌發後菌絲呈線絨狀,向四周作放射狀延伸。在綜合PDA培養基上,黑暗恆溫25℃下培養,一般14~20天長滿斜面。在酸性培養基上生長快、旺盛;若使用有麥芽糖的猴頭專用培養基,菌絲生長會大大改善,菌絲長速大大加快且濃密潔白,不再形成菌索和原基。
[鏡檢] 菌絲粗壯,粗細較均勻,分枝性強,長相屈曲,鎖狀聯合多而大。
(11)滑子菇
菌絲較細,氣生菌絲短而少,白色至淡黃色,棉絨狀。菌絲平鋪於培養基表面生長,菌絲生長整齊舒展、緻密,菌落較薄、微黃色,不形成菌皮,菌絲管壁常有網狀菌絲束,分泌黃褐色色素。在綜合PDA培養基上,黑暗恆溫23℃下培養,14天左右長滿斜面。鏡檢有鎖狀聯合。
(12)阿魏菇
該種不同品種間差異顯著,有的品種菌落緻密、微黃,生長緩慢,在綜合PDA培養基上要3周左右長滿斜面;有的品種菌落舒展、潔白,菌絲也較稀疏,生長較快,在綜合PDA培養基上2周左右即可長滿斜面。
(13)灰樹花
菌絲半絮狀、緻密潔白,氣生菌絲多寡不同,菌落生長不甚整齊,培養後期菌絲不甚潔白,稍有污白色,氣生菌絲交織而形成不堅韌的疏鬆的菌皮。在綜合PDA培養基上,黑暗恆溫25℃下培養,一般14~16天長滿斜面。不同品種菌落形態和長速不盡相同。
(14)竹蓀
菌絲體生長初期白色,粗壯、濃密,尖端呈扇形、束狀。氣生菌絲濃密、純白,爬壁力強,見光或損傷後呈粉紅色、紫色或淡褐色。後期出現菌絲束,並產生色素。長裙竹蓀呈粉紅色,間有紫色;短裙竹蓀多為紫色或紫藍色;紅托竹蓀為粉紅色;棘托竹蓀菌絲束為粉紅色、淡紫色或黃褐色。棘托竹蓀菌絲生長速度快於其他品種。老化的菌種氣生菌絲消失,菌絲呈暗紅色,自溶並產生黃水。
(15)榆黃蘑
菌絲絨毛狀,不舒展,具濃密而短的氣生菌絲,生長不甚均勻,易形成有韌性的菌苔。在綜合PDA培養基上,黑暗恆溫25℃下培養,10天左右長滿斜面。
(16)鮑魚菇
菌絲均勻纖細,氣生菌絲較少,表面有棒狀分生孢子梗和黑色分生孢子團。在綜合PDA培養基上生長緩慢,在黑暗且27℃條件下培養,20天左右長滿斜面。
(17)姬松茸
菌絲微黃而纖細,有細細的菌索於表面,氣生菌絲較少,生長整齊。在雙孢蘑菇專用培養基上,黑暗恆溫25℃下培養,16~20天長滿斜面。
(18)真姬菇
菌絲濃密潔白,氣生菌絲旺盛,表面呈絨毛狀,生長不甚均勻,在加入有兩種碳源的培養基上生長較好。在馬鈴薯酵母粉綜合培養基上,黑暗恆溫24℃下培養,14~17天長滿斜面(不同品種間長速有異)。
(19)蜜環菌
在瓊脂培養基上菌絲棉絮狀,灰白色,後期淡紅棕色,生長較慢,具輪廓分明的邊緣。接種後48小時左右開始萌發,並隨培養基表面菌絲的生長,7~9天後,在絮狀菌絲中心出現褐色色素,且顏色逐漸加深,向四周擴散。13~15天後,形成菌索,呈樹根狀,並向培養基中生長,初期白色,後變為深褐或黑色。產生色素,並溶於培養基,使其變紅褐色。菌絲和幼嫩核輻射束產生熒光。在木屑浸出汁綜合培養基上,黑暗恆溫25℃下培養,2周左右根狀菌索蔓延至整個培養基。鏡檢無明顯鎖狀聯合。
3. 如何鑒定菌種
在杏鮑菇、白靈菇生產中,只有具備優良的菌種,通過科學的培育管理,才能實現優質、高產、高效。因此菌種的優劣是事關千家萬戶的切身利益和菌種生產廠家信譽的大事。在現實生產中,也常發現有的菌種廠以贏利為目的,粗製濫造。加之有些菇農對菌種質量缺乏識別能力,致使在生產中減產、絕收,造成巨大的經濟損失。因此嚴格菌種質量,加強對菌種的鑒定和識別是當前食用菌發展中的首要任務,也是最主要的技術環節和要求。
菌種質量的鑒定,嚴格地講,應從形態、生理、栽培和經濟效益等方面進行綜合檢測和評價。但要完成各種指標,除了需掌握一定的基礎知識和基本技術外,還需具備一定的儀器設備及人力物力和時間。因此,一般生產者是很難完成的。這里僅將幾種常用、簡便、易行的方法予以介紹,供生產者參考。
(1)直接觀察。
對引進的母種,首先要用肉眼觀察包裝是否符合要求,棉塞有無松動,試管有無破損,棉塞中有無雜菌和病蟲害侵染,菌絲色澤是否正常、有無老化等現象。購進或自製的原種,瓶內菌絲應粗壯整齊、分枝濃密、色濃白呈絨毛狀,說明生長旺盛。如瓶底出現黃水、菌絲萎縮與瓶壁脫離,或出現原基扭結,說明菌種老化應淘汰。(2)菌種純度檢查。
杏鮑菇菌絲是純白色的,白靈菇菌絲較杏鮑菇菌絲稍淺些。如在菌種管或菌種瓶中出現其他顏色的菌絲或孢子(綠色、黃色、黑色等),則說明菌種不純,被雜菌污染不能使用。如果在接菌時發現菌種有異味也說明菌種被雜菌污染,不能使用。(3)吃料能力鑒定。
將母種接入最佳配方的原種培養基中,或將原種接入栽培袋中觀察菌絲生長情況。經1周的培養,如果菌種塊能很快萌發並迅速向四周的培養料中生長伸展,說明菌種的吃料能力強。反之,菌種塊萌發後生長緩慢,遲遲不向四周和料層深處伸展,則表明菌種對培養料的適應能力差。(4)觀察菌絲長勢。
可先將供測的菌種接入其適宜的試管培養基上進行培養,如果菌絲生長整齊濃密、健壯有力,則表明為優良菌種。若菌絲生長緩慢或長速太快,稀疏無力,參差不齊,容易衰老,則表明菌種質劣。(5)栽培試驗觀察。
這是菌種質量鑒定最可靠的方法。通過一定的栽培試驗,凡具備優質高產、抗雜能力強和遺傳性穩定的菌株,才是優良和可推廣應用的品種。
4. 如何鑒別和培養優質食用菌菌種
保證食用菌菌種質量主要包括三個方面:一是正確鑒定菌種種類;二是保證菌種純度、長勢和菌齡;三是擴大培養優質菌種。
一、正確鑒定菌種種類
最可靠的方法是做出菇試驗,即小型栽培,根據子實體特徵鑒別種類。有些食用菌菌絲的形態和生理特徵比較特殊,靠專業人員經驗可以鑒定,如竹蓀、猴頭、銀耳和草菇能夠在實驗室目視准確判斷。
二、保證菌種純度、長勢和菌齡。
1、純度。菌種要求是純培養,不能混有雜菌和其他食用菌。可從菌落形態,特別是從菌落顏色上區別,如毛霉、根黴菌絲稀疏、生長快,青黴、麴黴、木霉聚集。許多雜菌區別於食用菌的白色呈特殊的顏色。
2、長勢。不同食用菌菌絲的生長速度、旺盛程度、濃密度有明顯的差別。在鑒別菌絲長勢時,要注意培養基及培養條件的因素,在條件適宜的前提下,選用菌絲生長旺盛、生長量多和生產快的菌種。
3、菌齡。老化菌種生活力弱,不宜在生產中使用。不同食用菌老化的表現不大一樣,就大多數食用菌來說,白色的菌種變黃或吐黃水,培養基收縮,形成了大的子實體,都是培養時間過多的菌種,不能使用。
三、擴大培養優質菌種
1、提供菌種所需要的營養物質。菌種生長需要的營養物質要齊全,掌握好碳氮比、無機鹽、水的濃度,配製培養基一般碳源百分之幾至十幾,氮源千分之幾至十幾,大量元素的化合物是千分之五以下至萬分之幾,微量元素是十萬分之幾至百萬分之幾。
2、保證適宜的環境條件。已大量栽培的食用菌需要的溫、濕、氣、光等環境條件都很清楚,力求用量適宜的條件培養菌種。剛接好的菌種應取最適生長溫度中的上限溫度,促其萌發,培養2-3天菌絲深入培養基後,使培養溫度稍低於最適生長溫度,菌絲才會茁壯生長。一般應避光和適當通氣。
3、防雜菌污染
⑴滅菌要徹底。滅菌不徹底,培養基中未殺死的雜菌在培養菌種時生長繁殖,菌種不能用。
⑵接種時嚴格無菌操作。雜菌進入培養基的機會有接種室(箱)滅菌不徹底、無菌操作不當、接種速度快等。
⑶環境消毒。對環境進行必要的葯物消毒,最好是不同葯物交替使用。不能隨便丟棄有雜菌的菌種袋、瓶和栽培袋,防止成為食用菌栽培的重要污染源。
⑷做好菌種培養基的管理。菌種培養2-3天要逐個瓶(袋)檢查,將生有雜菌的菌種拿到遠處深埋或燒掉。如果不及時撿出生有雜菌的菌種,很快被迅速生長的食用菌菌絲掩蓋,已無法識別,使用後損失更大。培養室消毒、避高濕,防大風直接吹進培養室,都是防菌種被污染的重要措施。
⑸輕拿輕放菌種。保證瓶、袋完好無損,包括裝料、滅菌、運輸、接種、培養管理等過程中防磨破、碰破、擠破、壓破、扎破菌種瓶或菌種袋。運輸時用潔凈布覆蓋,防落塵土和雜菌。
4、防菌種過期。過期的菌種老化變黃,培養基脫水,或形成子實體消耗了大量營養物質,菌種生活力降低。食用菌的種類和培養料不同,母種、原種和栽培種培養天數和使用期也不一樣,母種長滿試管應立即使用。平菇母種一般培養7天,有的平菇品種多培養一夜菌絲就變黃。木屑、棉籽殼為主料的原種、栽培種,外觀長滿菌絲後,中心部位還沒有長好,在室溫下有5天左右的"後熟期"內部也就長好了,這時應及時使用。(來源:《中國農村科技》2003.3期)