A. 怎樣做葯物敏感試驗
測定細菌對抗菌葯物敏感性的試驗稱為葯物敏感試驗或簡稱葯敏試驗。由於養雞業中抗菌葯物的廣泛使用，導致抗葯菌株越來越多，盲目用葯常常效果不佳。因此，進行葯物敏感試驗已成為正確使用抗菌葯物的必要手段。葯物敏感試驗的方法有多種，如紙片擴散法、試管法、挖洞法等。其中，紙片擴散法簡便易行，出結果快，是目前生產中最常見的方法，現將該種方法介紹如下：
（1）葯敏紙片的准備
常用抗菌葯敏紙片已有商品供應，一般可以買到，可直接利用。
（2）葯敏培養基的制備
①普通肉湯瓊脂：又稱營養瓊脂。蛋白腖10克、氯化鈉（NaCl）15克、磷酸氫二鉀（K2HPO4）1克、瓊脂20克、牛肉浸出液1000毫升（可用牛肉浸膏10克浸於1000毫升蒸餾水代替）。
牛肉浸出液的配製方法：取瘦牛肉去掉脂肪、腱膜等，絞碎或切碎，按500克牛肉加1000毫升蒸餾水混合，置4℃冰箱內過夜，取出後加熱到80～90℃，經1小時後，以數層紗布濾除肉渣並擠出肉水，再用脫脂棉過濾，量其體積並用蒸餾水補足1000毫升，分裝後20分鍾高壓蒸汽滅菌，即製成牛肉浸出液。
將以上其他成分加入到牛肉浸出液中，加熱溶解，冷卻後調pH至7.6，煮沸10分鍾，用濾紙過濾後分裝，再以10.4萬帕高壓蒸汽滅菌25分鍾，取出後冷卻至55℃左右，在90毫升直徑滅菌的平皿上傾注成4毫米厚的平板。做好的平板，密封包裝後可在冰箱中保存2～3周。使用前應將平皿置37℃溫箱中培養24小時，確認無菌後再用於試驗。
②鮮血瓊脂：將滅菌的營養瓊脂加熱融化，至45～50℃時加入無菌鮮血5%（每100毫升營養瓊脂中加入鮮血5～6毫升）傾注平皿。無菌鮮血，用無菌手術取健康動物（綿羊或家兔等）的血液，加入盛有無菌5%檸檬酸鈉溶液的容器中（血與5%檸檬酸鈉的比例為9∶1）混勻，置冰箱中保存備用。
（3）試驗方法
臨床上分離到的細菌進行純培養。用滅菌的接種環挑取被檢菌的純培養物劃線或塗布於平板上，並盡可能使其密而均勻。用滅菌鑷子將葯敏紙片平放於平板上並輕壓使其緊貼平板。直徑9.0厘米的平皿可貼7張紙片，紙片間距不少於24毫米，紙片與平皿邊緣距離不少於15毫米。貼好後將平板底部朝上置於37℃溫箱中培養24小時，取出觀察結果。
（4）結果判定
凡對被檢菌有抑制力的抗菌葯物，由於向周圍擴散，抑制細菌的生長，故在紙片周圍出現一個無細菌生長的圓圈，稱為抑菌圈。抑菌圈越大，說明該菌對此種葯物敏感度越高，反之越低。如果無抑菌圈，則說明該菌對此種葯物具有耐葯性。所以，判定結果時，以抑菌圈直徑的大小來作為細菌對該葯物敏感度高低的標准。
一般來說，抑菌圈直徑70毫米以上為極度敏感，15～20毫米為高度敏感，10～15毫米為中度敏感，10毫米以下為低敏感，無抑菌圈為不敏感。對多黏菌素的作用，抑菌圈在10毫米以上者為高度敏感，6～9毫米為低度敏感。
經葯敏試驗後，應該選擇極度敏感或高度敏感的葯物進行治療。
B. 葯物敏感試驗的葯物敏感試驗的方法
測定細菌對抗菌葯物敏感性的試驗稱為葯物敏感試驗或簡稱葯敏試驗。由於養雞業中抗菌葯物的廣泛使用，導致抗葯菌株越來越多，盲目用葯常常效果不佳。因此，進行葯物敏感試驗已成為正確使用抗菌葯物的必要手段。葯物敏感試驗的方法有多種，如紙片擴散法、試管法、挖洞法等。其中，紙片擴散法簡便易行，出結果快，是目前生產中最常見的方法，現將該種方法介紹如下：
（1）葯敏紙片的准備
常用抗菌葯敏紙片已有商品供應，一般可以買到，可直接利用。
（2）葯敏培養基的制備
①普通肉湯瓊脂：又稱營養瓊脂。蛋白腖10克、氯化鈉（NaCl）15克、磷酸氫二鉀（K2HPO4）1克、瓊脂20克、牛輪歲逗肉浸出液1000毫升（可用牛肉浸膏10克浸於1000毫升蒸餾水代替）。
牛肉浸出液的配製方法：取瘦牛肉去掉脂肪、腱膜等，絞碎或切碎，按500克牛肉加1000毫升蒸餾水混合，置4℃冰箱內過夜，取出後加熱到80～90℃，經1小時後，以數層紗布濾除肉渣並擠出肉水，再用脫脂棉過濾，量其體積並用蒸餾水補足1000毫升，分裝後20分鍾高壓蒸汽滅菌，即製成牛肉浸出液。
將以上其他成分加入到牛肉浸出液中，加熱溶解，冷卻後調pH至7.6，煮沸10分鍾，用濾紙過濾後分裝，再以10.4萬帕高壓蒸汽滅菌25分鍾，取出後冷卻至55℃左右，在90毫升直徑滅菌的平皿上傾注成4毫米厚的平板。做好的平雀乎板，密封包裝後可在冰箱中保存2～3周。使用前應將平皿置37℃溫箱中培養24小時，確認無菌後再用於試驗。
②鮮血瓊脂：將滅菌的營養瓊脂加熱融化，至45～50℃時加入無菌鮮血5%（每100毫升營養瓊脂中加入鮮血5～6毫升）傾注平皿。無菌鮮血，用無菌手術取健康動物（綿羊或家兔等）的血液，加入盛有無菌5%檸檬酸鈉溶液的容器中（血與5%檸檬酸鈉的比例為9∶1）混勻，置冰箱中保存備用。
（3）試驗方法
臨床上分離到的細菌進行純培養。用滅菌的接種環挑取被檢菌的純培養物劃線或塗布於平板上，並盡可能使其密而均勻。用滅菌鑷子將葯敏紙片平放於平板上並輕壓使其緊貼平板。直徑9.0厘米的平皿可貼7張紙片，紙片間距不少於24毫米，紙片與平皿邊緣距離不少於15毫米。貼好後將平板底部朝上置於37℃溫箱中培養24小時，取出觀察結果。
（4）結果判定
凡對被檢菌有抑制力的抗菌葯物，由於向周圍擴散，抑制細菌的生長，故在紙片周圍出現一個無細菌生長的圓圈，稱為抑菌圈。抑菌圈越大，說明該菌對此種葯物敏感度越高，反之越低。如果無抑菌圈，則說明該菌對此種葯物具有耐葯性。所以，判定結果時，以抑菌圈直徑的大小來作為細菌對該葯物敏感度高低的標准。
一般來說，抑菌圈直徑70毫米以上為極度敏感，15～20毫米為高度敏感，10～15毫米為中度敏感，10毫米以下為低敏感，無抑菌臘賣圈為不敏感。對多黏菌素的作用，抑菌圈在10毫米以上者為高度敏感，6～9毫米為低度敏感。
經葯敏試驗後，應該選擇極度敏感或高度敏感的葯物進行治療。
C. 葯敏試驗的具體操作方法
1葯敏實驗操作步驟:在超潔凈工作台內，先將滅菌好的培養基做好標記，無菌取病料（即：肝臟、心臟組織）一小塊，輕輕在滅菌的培養基上塗布幾下（不要突破培養基），然後用接種環再密集劃線。然後，將制備好的葯敏片分別按標記好的位置貼在培養基的表面。記錄好培養皿的標記及葯敏片的順序。最後，將培養皿放入37℃恆溫箱中培養8—12小時即可。
2葯敏實驗結果觀察:培養好後會發現細菌再培養基上均勻分布，同時會看到葯敏片周圍有不同程度的抑菌圈。抑菌圈越大，說明該雞群對這種葯物越敏感；抑菌圈小或沒有抑菌圈，說明該雞群對這種葯物不敏感或已經產生了耐葯性。若在培養皿中出現一團一團的細菌時說明培養皿中有雜菌感染。