血漿八因子和九因子檢測方法

⑴ 第八因子的測定法

根據中華人民共和國葯典三部 附錄X N 人凝血因子VIII測定法（一期法）
本法系用人凝血因子VIII缺乏血漿為基質血漿，採用一期法測定供試品人凝血因子VIII效價。
試劑
⑴3.8%枸櫞酸鈉9.5g，加水溶解並稀釋至250ml。
⑵咪唑緩沖液（pH7.3）取咪唑0.68g和氯化鈉1.17g，加水使溶解成100ml，加入0.1mol/L鹽酸溶液42.2ml，再加水稀釋至200ml，即得。
⑶稀釋液 取一體積的3.8%的枸櫞酸鈉加入5體積咪唑緩沖液混合，加適量20%人血白蛋白至終濃度為1%
⑷激活的部分凝血活酶（APTT）試劑
⑸人凝血因子VIII缺乏血漿 為人凝血因子VIII含量低於1%的人血漿或人工基質血漿
⑹0.05mol/L氯化鈣溶液 取氯化鈣（CaCl2·2H2O）147g，加水溶解並稀釋至1000ml，配製成1mol/L的氯化鈣貯存液，用前用水稀釋20倍，配製成0.05mol/L氯化鈣溶液。
標准液的制備
用人凝血因子VIII缺乏血漿將標准品稀釋成每1ml含1IU凝血因子VIII，再用稀釋液分別進行10倍、20倍、40倍和80倍稀釋，置冰浴待用。
供試品溶液的制備
用人凝血因子Ⅷ 缺乏血漿將標枝皮准品稀釋成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ，再用稀釋伍猛液進行10倍和20倍或40倍稀釋，置冰浴待用。 取激活的部分凝血活酶試劑0.1ml，置37℃水浴保溫一定時間（一般4min），加入凝血因子Ⅷ缺乏血漿0.1ml、供試品溶液0.1ml，混勻，置37℃水浴保溫一定時間（一般5min），加已預熱至37℃ 0.05mol/L氯化鈣溶液0.1ml，記錄凝固時間。
用不同稀釋度的人凝血因子Ⅷ標准猛橘差溶液0.1ml替代供試品溶液，同法操作。
將標准溶液人凝血因子Ⅷ效價（IU/ml）的對數對其相應的凝固時間（秒）的對數進行直線回歸處理，求出直線回歸方程。計算供試品溶液人凝血因子Ⅷ效價，再乘以稀釋倍數，即為供試品人凝血因子Ⅷ效價（IU/ml）。

⑵ 常用的細胞因子檢測方法有哪些

（1）生物學檢測法：又稱生物活性檢測，是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。生物活性檢測法又可分為： 1、細胞增殖法； 2、靶細胞殺傷法； 3、細胞因子誘導的產物分析法； 4、細胞病變抑製法。
（2）免疫學檢測法：細胞因子均為蛋白或多肽，具有較強的抗原性，可利用抗原抗體特異性反應的特性，用免疫學技術定量檢測細胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印跡法
（3）分子生物學方法：目前公認的細胞因子的基因均已克隆化，較容易地得到某一細胞因子cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。常使用斑點雜交、Northernblot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。具有靈敏、快速等優點，甚至從l～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA