㈠ 常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置
常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置
常用生化檢測項目有哪些你知道嗎?你對常用生化檢測項目了解嗎?下面是我為大家帶來的關於常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置的知識，歡迎閱讀。
一、常用生化檢測項目
1.終點法檢測常用的有總膽紅素(氧化法或重氮法)、結合膽紅素(氧化法或重氮法)、血清總蛋白(雙縮脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、總膽汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、總膽固醇(膽固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白膽固醇(直接測定法)、鈣(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、鎂(二甲苯胺藍法)等。以上項目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而採用一點終點法外，其它測定項目都可使用雙試劑故能選用兩點終點法，包括總蛋白、白蛋白測定均已有雙試劑可用。
2.固定時間法苦味酸法測定肌酐採用此法。
3.連續監測法對於酶活性測定一般應選用連續監測法，如丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、鹼性磷酸酶、γ谷氨氨醯基轉移酶、澱粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯法測定尿素等，也可用連續監測法。
4.透射比濁法透射比濁法可用於測定產生濁度反應的項目，多數屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗"O"、類風濕因子，以及血清中的其他蛋白質如前白蛋白、結合珠蛋白、轉鐵蛋白等均可用此法。
二、分析參數設置
分析儀的一些通用操作步驟如取樣、沖洗、吸光度檢測、數據處理等，其程序均已經固化在存儲器里，用戶不能修改。各種測定項目的分析參數(analysisparamete)大部分也已設計好，存於磁碟中，供用戶使用;目前大多數生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數。生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設定分析參數。因此必須理解各參數的確切意義。
一、分析參數介紹
(一)必選分析參數
這類參數是分析儀檢測的前提條件，沒有這些參數無法進行檢測。
1.試驗名稱 試驗名稱(test code)是指測定項目的標示符，常以項目的英文縮寫來表示。
2.方法類型(也稱反應模式) 方法類型(assay)有終點法、兩點法、連續監測法等，根據被檢物質的檢測方法原理選擇其中一種反應類型。
3.反應溫度 一般有30℃、37℃可供選擇，通常固定為37℃。
4.主波長 主波長(primary wavelength)是指定一個與被測物質反應產物的光吸收有關的波長。
5.次波長 次波長(secondary wavelength)是在使用雙波長時，要指定一個與主波長、干擾物質光吸收有關的波長。
6.反應方向 反應方向(response direction)有正向反應和負向反應兩種，吸光度增加為正向反應，吸光度下降為負向反應。
7.樣品量 樣品量(sampling volum)一般是2μl～35μl，以0.1μl步進，個別分析儀最少能達到1.6μl。可設置常量、減量和增量。
8. 第一試劑量 第一試劑量(first regengt volum)一般是20～300μl，以1μl步進。
9. 第二試劑量 第二試劑量(second regengt volum)一般也是20～300μl，以1μl步進。
10.總反應容量 總反應容量(total reacting volum)在不同的分析儀有一個不同的規定范圍，一般是180～350μl，個別儀器能減少至120μl。總反應容量太少無法進行吸光度測定。
11.孵育時間 孵育時間(incubate time)在終點法是樣品與試劑混勻開始至反應終點為止的時間，在兩點法是第一個吸光度選擇點開始至第二個吸光度選擇點為止的時間。
12.延遲時間 延遲時間(delay time)在連續監測法中樣品與反應試劑(第二試劑)混勻開始至連續監測期第一個吸光度選擇點之間的時間。
13.連續監測時間 連續監測時間(continuous monitoring time)在延遲時間之後即開始，一般為60～120s，不少於4個吸光度檢測點(3個吸光度變化值)。
14.校準液個數及濃度 校準曲線線性好並通過坐標零點的，可採用一個校準液(calibrator);線性好但不通過坐標零點，應使用兩個校準液;對於校準曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準液。每一個校準液都要有一個合適的濃度。
15.校準K值或理論K值 通過校準得到的K值為校準K值(calibrate coefficient)或由計算得出的K值為理論K值。
16.線性范圍 即方法的線性范圍(linearity range)，超過此范圍應增加樣品量或減少樣品量重測。與試劑/樣品比值有關。
17.小數點位數 檢測結果的小數點位數(decimal point digit)。
(二)備選分析參數
這類分析參數與檢測結果的准確性有關，一般來說不設置這類分析參數，分析儀也能檢測出結果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結果可能不準確。
1.樣品預稀釋 設置樣品量、稀釋劑量和稀釋後樣品量三個數值，便可在分析前自動對樣品進行高倍稀釋。
2.底物耗盡值 底物耗盡值(substrate exhaust limit)在負反應的酶活性測定中，可設置此參數，以規定一個吸光度下降限。若低於此限時底物已太少，不足以維持零級反應而導致檢測結果不準確。
3.前區檢查 免疫比濁法中應用，以判斷是否有抗原過剩。將終點法最後兩個吸光度值的差別(ΔA)設置一個限值，如果後一點的吸光度比前一點低，表示已有抗原過剩，應稀釋樣品後重測。
4.試劑空白吸光度范圍 超過此設定范圍表示試劑已變質，應更換合格試劑。
5.試劑空白速率 連續監測法中使用，是試劑本身在監測過程中沒有化學反應時的變化速率。
6.方法學補償系數 用於校準不同分析方法間測定結果的一致性，有斜率和截距兩個參數。
7.參考值范圍 對超過此范圍的測定結果，儀器會列印出提示。
(三)某些參數的特殊意義
1.最小樣品量 最小樣品量是指分析儀進樣針能在規定的誤差范圍內吸取的最小樣品量。一般分析儀的最小樣品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。在樣品含高濃度代謝產物或高活性酶濃度的情況下往往需採用分析儀的最小樣品量作為減量參數，從而使分析儀檢測范圍(與線性范圍不同)的上限得以擴大。
2.最大試劑量 方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法測定，以往手工法操作時樣品量10μl，試劑量4ml，這樣試劑量/樣品量比例(R/S)為200，線性上限則為60g/L。此法移植到分析儀上後，R/S卻很難達到200，致使線性上限變低。因此對這類檢測項目最大試劑量非常重要。
3.彈性速率 在酶活性測定中，當酶活性太高，在連續監測期中已不呈線性反應時，有些儀器具有彈性速率(flexrate)功能，能自動選擇反應曲線上連續監測期中仍呈線性的吸光度數據計算結果，使酶活性測定的線性范圍得以擴大。如AST可從1000U/L擴展至4000U/L，從而減少稀釋及重測次數、降低成本。
4.試劑空白速率 當樣品中存在膽紅素時，膽紅素對鹼性苦味酸速率法或兩點法測定肌酐有負干擾。因為膽紅素在肌酐檢測的波長505nm有較高光吸收，而且膽紅素在鹼性環境中可被氧化轉變，因而在肌酐反應過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。若在加入第一試劑後一段時間內設置試劑空白速率，因為此段中苦味酸尚未與肌酐反應，而膽紅素在第一試劑的鹼性環境中已同樣被氧化轉變，因而以第二試劑加入後的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負干擾，見圖7-8。
二、單波長和雙波長方式
(一)概念
採用一個波長檢測物質的光吸收強度的`方式稱為單波長(mono-wavelength)方式。當反應液中含有一種組分，或在混合反應液中待測組分的吸收峰與其它共存物質的吸收波長無重疊時，可以選用。在吸光度檢測中，使用一個主波長和一個次波長的稱雙波長方式。當反應液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結果的准確性時，採用雙波長方式更好。
(二)雙波長的作用
雙波長(di-wavelength)測定優點是①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源，到比色杯、單色器、檢測器的整個光路系統中，均存在著隨時間發生變化的不穩定的檢測信號，即噪音，而雙波長檢測是同時進行的，兩種波長檢測產生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干擾。當樣品中存在非化學反應的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時，會產生非特異性的光吸收，而干擾測定結果的准確性。採用雙波長方式測定可以部分消除這類干擾，提高檢測的准確性。
(三)次波長的確定方法
當被測物的主波長確定之後，再選擇次波長。如根據甘油三酯等干擾物吸收光譜特徵，選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應有較大的差異。一般來說，次波長應大於主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計算結果。
(四)雙波長的具體應用
對於某些反應速度快且無法設置為兩點終點法的分析項目，尤其是單試劑分析中，可以利用雙波長的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測定的項目應用雙波長的為血清總蛋白(雙縮脲法)主波長500nm，次波長576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波長分別為600和700nm;鈣(偶氮砷Ⅲ法)主、次波長分別為 660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波長為340、405nm，鎂(二甲苯胺藍法)主、次波長為505和 600nm。
三、單試劑和雙試劑方式
反應過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。目前的生化分析儀大多可用雙試劑方式分析，其優點是：①可提高試劑的穩定性，多數雙試劑混合成單一工作試劑時，其穩定時間縮短;②能設置兩點終點法，來消除來自樣品本身的光吸收干擾;③在某些項目檢測時能消除非特異性化學反應的干擾。如血清ALT測定，血清中的內源性丙酮酸及其它酮酸也可與試劑中的指示酶(乳酸脫氫酶)起反應，使結果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應之後再加入含有α-酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應消耗的NAD+能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應的影響。
四、測定過程的自動監測
各種自動生化分析儀或多或少都具有對測定過程進行各種監測的功能，以便在沒有人"監督"化學反應的情況下提高檢測的准確性。高檔分析儀的監測功能更強。
1.試劑空白監測 每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示著該試劑的變質：如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因酚被氧化為醌而變為紅色;鹼性磷酸酶、γ-谷氨醯轉移酶、澱粉酶等檢測試劑會因基質分解出硝基酚或硝基苯胺而變黃;有些試劑久置後變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反應檢測項目，其試劑在放置過程中空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降等。
試劑空白的測定方法有兩種：①每瓶試劑在使用前通過對試劑空白校準來確定試劑空白吸光度，這種方式適用於先取樣品後加試劑的分析儀。②每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度，適用於先加試劑後取樣品的分析儀。
2.試劑空白變化速率監測 一些酶試劑在反應溫度下不穩定，其空白吸光度可隨著時間逐漸發生變化，這種變化的主要原因與工具酶或輔酶的純度有關，且因試劑的組成和生產廠家的不同而不同。這種變化會影響測定結果的准確性，一般使結果偏高。如果設置此項監測，分析儀在結果計算時會自動減去試劑空白變化速率。在以監測NAD(P)H減少為指示反應的酶活性測定中，空白速率可監測並消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降;在色素原為底物的酶活性測定中，空白速率可監測並消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關空白速率監測在膽紅素對鹼性苦味酸速率法測定肌酐負干擾消除中的作用，已如前述。
3.樣品信息監測 由於樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定結果產生非化學反應的干擾。根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質和程度，一般是測定樣品在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然後在結果計算時自動減去這部分干擾，這將有利於提高分析結果的可靠性。
4.結果可靠性監測
(1)終點監測：終點法測定要判斷所選的測光點是否到達終點或平衡點。一些分析儀在所選終點後再選一個測光點，比較這兩點吸光度的差異來判斷反應是否到達終點。
(2)線性期監測：連續監測法選擇時間-吸光度反應曲線上的線性期來計算酶活性或被測物濃度，因此儀器要確定此連續監測期是否呈線性。其監測方法為①將連續監測到的各吸光度值進行線性回歸，計算出各點的方差，根據方差值的大小來判斷是否呈線性;②取連續監測期開始若干點的變化速率與連續監測期最後若干點的變化速率進行比較，來判斷是否為線性期。
5.底物消耗的監測 在連續監測法測定酶活性時，如果在監測期內吸光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監測期的吸光度將偏離線性，使測定結果不可靠。此時不列印結果或列印結果同時也列印出底物耗盡提示，該樣品應稀釋一定的倍數重新測定。此監測對於採用負反應分析酶活性的方法甚為重要。見圖7-9
6.方法線性范圍監測 每種待測物分析都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，分析儀將顯示測定結果超過線性范圍的提示，多數分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。
;㈡ 聚合氯化鋁檢測方法
1、檢測指標:
2、檢測方法:
聚合氯化鋁國標
4.2氧化鋁(AI2O3)含量的測定
4.2.1方法提要
在試樣中加酸使試樣解聚。加入過量的乙二胺四乙配二鈉溶液，使其與鋁及其他金屬離絡合。用氯化鋅標准滴定溶液滴定剩餘的乙二胺四乙酸二鈉。再用氟化鉀溶液解析出絡合鋁離子，用氯化鋅標准滴定溶液滴定解析出的乙二胺四乙酸二鈉。
4.2.2試劑和材料
4.2.2.1硝酸(GB/T626)：1+12溶液；
4.2.2.2乙二胺四乙酸二鈉(GB/T1401)：c(EDTA)約0.05mol/L溶液。
4.2.2.3乙酸鈉緩沖溶液：
稱取272g乙酸鈉(GB/T
693)溶於水，稀釋至1000mL，搖勻。
4.2.2.4氟化鉀(GB/T1271)：500g/L溶液，貯於塑料瓶中。
4.2.2.5硝酸銀(GB/T670)：1g/L溶液；
4.2.2.6氯化鋅：c(ZnCI2)=0.0200mol/L標准滴定溶液；
稱取1.3080g高純鋅(純度99.99%以上)，精確至0.0002g，置於100mL燒杯中。加入6～7mL鹽配(GB/T
622)及少量水，加熱溶解。在水浴上蒸發到接近乾涸。然後加水溶解，移入1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。
4.2.2.7二甲酚橙：5g/L溶液。
4.2.3分析步驟
稱取8.0～8.5g液體試樣或2.8～3.0g固體試樣，精確至0.0002g，加水溶解，全部移入500mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取20mL，置於250mL錐形瓶中，加2mL硝酸溶液(4.2.2.1)，煮沸1min。冷卻後加入20mL乙二胺四乙酸二鈉溶液(4.2.2.2)，再用乙酸鈉緩沖溶液(4.2.2.3)調節pH約為3(用精密pH試紙檢驗)，煮沸2min。冷卻後加入10mL乙酸鈉緩沖溶液(4.2.2.3)和2～4滴二甲酚橙指示液(4.2.2.7)，用氯化鋅標准滴定溶液(4.2.2.6)滴定至溶液由淡黃色變為微紅色即為終點。
加入10mL氟化鉀溶液(4.2.2.4)，加熱至微沸。冷卻，此時溶液應呈黃色。若溶液呈紅色，則滴加硝酸(4.2.2.1)至溶液呈黃色。再用氯化鋅標准滴定溶液(4.2.2.6)滴定，溶液顏色從淡黃色變為微紅色即為終點。記錄第二次滴定消耗的氯化鋅標准滴定溶液的體積(V)。
4.2.4分析結果的表述
以質量百分數表示的氧化鋁(AI2O3)含量(x1)按式(1)計算：
x1=Vc×0.05098/m×20/500
×
100=Vc×127.45/m(1)
式中：V——第二次滴定消耗的氯化鋅標准滴定溶液的體積mL；
C——氯化鋅標准滴定溶液的實際濃度，mol/L；
m——試料的質量，g；
0.050
98——與1.00mL氯化鋅標准滴定溶液[c(ZnCI2)=1.000mol/L]相當的以克表示的氧化鋁的質量。
4.2.5允許差
取平行測定結果的算術平均值為測定結果，平行測定結果的絕對差值，液體產品不大於0.1%，固體樣品不大於0.2%。
4.3鹽基度的測定
4.3.1方法提要
在試樣中加入定量鹽酸溶液，以氟化鉀掩蔽鋁離子，以氫氧化鈉標准滴定溶液滴定。
4.3.2試劑和材料
4.3.2.1鹽酸(GB/T622)：c(HCI)約0.5mol/L溶液；
4.3.2.2氫氧化鈉(GB/T629)：c(NaOH)約0.5mol/L標准滴定溶液；
4.3.2.3酚酞(GB/T10729)：10g/L乙醇溶液；
4.3.2.4氟化鉀(GB/T1271)：500g/L溶液。
稱取500g氟化鉀，以200mL不含二氧化碳的蒸餾水溶解後，稀釋至1000mL。加入2mL酚酞指示液(4.3.2.3)並用氫氧化鈉溶液(4.3.2.3)或鹽酸溶液(4.3.2.1)調節溶液呈微紅色，濾去不容物後貯於塑料瓶中。
4.3.3分析步驟
稱取約1.8g液體試樣或約0.6g固體試樣，精確到0.0002g。用20～30mL水移入250mL錐形瓶中。再用移液管加入25mL鹽酸溶液。蓋上表面皿，在沸水浴上加熱10min，冷卻至室溫。加入25mL氟化鉀溶液(4.3.2.4)，搖勻。加入5滴酚酞指示液(4.3.2.3)，立即用氫氧化鈉標准滴定溶液(4.3.2.2)滴定至溶液呈現微紅色即為終點。同時用不含二氧化碳的蒸餾水作空白試驗。
4.3.4分析結果的表述
以百分比表示的鹽基度(x2)按式(2)計算：
x2
=
(V0-V)c×0.01699/mx1/100×
100
=
(V0-V)c×169.9/mx1(2)
式中：V0——空白試驗消耗氫氧化鈉標准滴定溶液的體積，mL；
V——測定試樣消耗氫氧化鈉標准滴定溶液的體積，mL；
c——氫氧化鈉標准滴定溶液的實際濃度，mol/L；
m——試料的質量，g；
x1——4.2條測得的氧化鋁含量，％；
0.01699——1.00mL氫氧化鈉標准滴定溶液[c(NaOH)=1.000mol/L]相當的以克表示的氧化鋁(AI2O3)的質量。
4.3.5允許差
取平行測定結果的算術平均值作為測定結果，平行測定結果的絕對差值不大於2.0%。
4.4水不溶物含量的測定
4.4.1儀器、設備
電熱恆溫乾燥箱：10～200ºC。
4.4.2分析步驟
稱取約10g液體試樣或約3g固體試樣，精確至0.01g。置於1000mL燒杯中，加入500mL水，充分攪拌，使試樣最大限度溶解。然後，在布氏漏斗中，用恆重的中速定量濾紙抽濾。
將濾紙連同濾渣於100～105ºC乾燥至恆重。
4.4.3分析結果的表述
以質量百分數表示的水不溶物含量(x3)按式(3)計算：
x3=
m1-m2/m
×
100(3)
式中：m1——濾紙和濾渣的質量，g；
m2——濾紙的質量，g；
m——試料的質量，g；
4.4.4允許差
取平行測定結果的算術平均值作為測定結果。
平行測定結果的絕對差值，液體樣品不大於0.03%，固體樣品不大於0.1%。
4.5pH的測定
4.5.1試劑和材料
4.5.1.1pH=4.00的苯二甲酸氫鉀(GB
6857)pH值標准溶液；
4.5.1.2pH=9.18的四硼酸鈉(GB
6856)pH值標准溶液；
4.5.2儀器、設備
4.5.2.1酸度計：精度0.1pH；
4.5.2.2玻璃電極；
4.5.2.3甘汞電極。
4.5.3分析步驟
稱取1.0g試樣，精確至0.01g。用水溶解後，全部轉移到100mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。
用pH4.00及pH9.18的標准溶液進行酸度計定位。再將試樣溶液倒入燒杯，將甘汞電極和玻璃電極浸入被測溶液中，測其pH值(1min內pH值的變化不大於0.1)。
4.6硫酸根(SO42-)含量的測定(重量法)
4.6.1方法提要
在0.04～0.07mol/L的鹽酸介質中，硫酸鹽與氯化鋇反應生成硫酸鋇沉澱，將沉澱灰化灼燒後，稱重即可計算出硫酸根的含量。
4.6.2試劑和材料
4.6.2.1鹽酸(GB/T622)：1+23溶液；
4.6.2.2氯化鋇(GB/T652)：50g/L溶液；
4.6.2.3硝酸銀(GB/T670)：1g/L溶液；
4.6.3分析步驟
稱取約1.8g液體試樣或約0.6g固體試樣，精確至0.001g。置於是400mL燒杯中，加入200mL水和35mL鹽酸溶液(4.6.2.1)煮沸2min。趁熱緩慢滴加10mL氯化鋇溶液(4.6.2.2)，繼續加熱煮沸後冷卻放置8h
以上。用慢速定量濾紙過濾，用熱蒸餾水洗滌至濾液無CI-［用硝酸銀溶液(4.6.2.3)檢驗]。將濾紙與沉澱置於已在800ºC下恆重的坩堝內，在電爐上灰化後移至高溫爐內，於800±25ºC下灼燒至恆重。
4.6.4分析結果的表述
以質量百分數表示的硫酸根(SO42-)含量(x4)按式(4)計算：
x4=(m1-m2)×0.4116/m×
100=(m1-m2)×41.16
/
m(4)
式中：m1——硫酸鋇沉澱和坩堝的質量，g；
m2——坩堝的質量，g；
m——試料的質量，g；
0.4116——硫酸鋇換算成硫酸根的系數。
4.6.5允許差
取平行測定結果的算術平均值作為測定結果，平行測定結果的絕對差值不大於0.1%。
4.7氨態氮(N)含量的測定
4.7.1方法提要
在試樣中加入碳酸鈉溶液使試樣在pH小於7
的條件下均相沉澱，取其上層清液用鈉氏比色法測定氨態氮。
4.7.2試劑和材料
4.7.2.1硫酸(GB/T625)：1+35溶液；
4.7.2.2碳酸鈉(GB/T639)：30g/L溶液；
4.7.2.3酒石酸鉀鈉(GB/T1288)：50g/L溶液；
4.7.2.4無氨蒸餾水；
4.7.2.5氨態氮標准儲備溶液：1.00mL溶液中含0.1mgN；
4.7.2.6氨態氮標准溶液：1.00mL溶液含有0.010mgN；
用移液管移取10mL氨態氮標准儲備溶液(4.7.2.5),移入100mL容量瓶中，用無氨蒸餾水平線（4.7.2.4)稀釋至刻度，搖勻。此溶液用時現配。
4.7.2.7納氏試劑。
4.7.3儀器、設備
分光光度計。
4.7.4分析步驟
4.7.4.1工作曲線的繪制
a.在六隻50mL比色管中依次加入氨態氮標准溶液(4.2.7.6)0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL，加入無氨蒸餾水(4.7.2.4)至刻度。
b.加入1mL酒石酸鉀鈉溶液(4.7.2.3)，塞緊搖勻。然後再加入2mL
納氏試劑(4.7.2.7)
,塞緊搖勻。靜置顯色10～15min。
c.在波長10625px處，用25px吸收池，以試劑空白為參比，測定吸光度。
d.以氨態氮含量(µg)為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，繪制工作曲線。
4.7.4.2測定
稱取約10g液體試樣或約3.3.g固體試樣，精確至0.01g。用無氨蒸餾水(4.7.2.4)，溶解後移入100mL容量瓶中，用無氨蒸餾水(4.7.2.4)稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取5mL此溶液，置於100mL容量瓶中，加入1.5mL硫酸溶液(4.7.2.1)
和20mL無氨蒸餾水(4.7.2.4)
搖勻。加入5mL碳酸鈉溶液(4.7.2.2)
再搖勻。用無氨蒸餾水(4.7.2.4)稀釋至刻度，搖勻後倒入干凈乾燥的100mL量筒內靜置2h。
移取量筒內50mL上層清液置於50mL
比色管中，按工作曲線的繪制(4.7.4.1)中b、c步驟操作，測定吸光度。
4.7.5分析結果的表述
以質量百分數表示的氨態氮(N)含量(x5)按式(5)
計算：
x5=
mn×10-6/m
×
5/100
×
5/100
×
100
=
mn×0.004/m(5)
式中：mn——從工作曲線上查得的氨態氮含量，µg；
m——試料的質量，g；
4.7.6允許差
取平行測定結果的算術平均值作為測定結果；平行測定結果的絕對差值，液體樣品不大於0.001%，固體樣品不大於0.002%。
4.8砷含量的測定
4.8.1方法提要
在酸性介質中，將砷還原成砷化氫氣體，用二乙基二硫代氨基甲酸銀一三乙基胺三氯甲烷吸收液吸收砷化氫氣體，形成紫紅色物質，用光度法測定。
4.8.2試劑和材料
4.8.2.1
無砷鋅(GB/T2304)；
4.8.2.2三氯甲烷(GB/T682)；
4.8.2.3硫酸(GB/T625)：1+1溶液；
4.8.2.4碘化鉀(GB/T1272)：150g/L溶液；
4.8.2.5氯化亞錫鹽酸溶液：
將40g氯化亞錫(GB/T
638)溶於100mL鹽酸(GB/T
622)中。保存時可加入幾粒金屬錫，貯於棕色瓶中。
4.8.2.6二乙基二硫代氨基甲酸銀一三乙基胺三氯甲烷吸收液：
稱取1.0g二乙基二硫代氨基甲酸銀，研碎後，邊研磨邊加入100mL三氯甲烷(4.8.2.2)。然後加入18mL三乙基胺，再用三氯甲烷(4.8.2.2)稀釋至1000mL
，搖勻。靜置過夜。用脫脂棉過濾，保存於棕色瓶中，置冰箱中保存。
4.8.2.7砷標准儲備溶液1.00mL溶液中含0.1mgAs；
4.8.2.8砷標准溶液：1.00mL溶液中含0.0025mgAs；
移取5mL砷標准儲備溶液(4.8.2.7)，移入200mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此溶液用時現配。
4.8.2.9乙酸鉛脫脂棉。
4.8.3儀器、設備
4.8.3.1分光光度計；
4.8.3.2定砷器：符合GB/T6102中第5.3條之規定。
4.8.4
分析步驟
4.8.4.1
工作曲線的繪制
a.
在6個乾燥的定砷瓶中，依次加入0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL砷標准溶液(4.8.2.8)，再依次加入30、29、28、27、26、25mL水使溶液總體積為30mL。
b.在各定砷瓶中加入4mL硫酸溶液(4.8.2.3)，2mL碘化鉀溶液(4.8.2.4)和2mL氯化亞錫鹽酸溶液(4.8.2.5)，搖勻。靜置反應20min。再各加入5±0.1g無砷鋅(4.8.2.1)，立即將塞有乙酸鉛脫脂棉(4.8.2.9)並盛有5.0mL二乙基二硫代氨基甲酸銀一三乙基胺三氯甲烷吸收液(4.8.2.6)的吸收管裝在定砷瓶上，反應50min。取下吸收管(勿使液面倒吸)，用三氯甲烷(4.8.2.2)將吸收液補充至5.0mL，混勻。
c.在波長510mm處，用25px吸收池，以試劑空白為參比，測定吸光度。
d.以砷含量(µg)為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，繪制工作曲線。
4.8.4.2試樣溶液的制備
稱取約10g液體試樣或約3.3g固體試樣，精確至0.01g，置於100mL蒸發皿中。加入10mL硫酸(4.8.2.3），在沸水浴上蒸至近干。冷卻，以熱水溶解(如有不溶物應過濾除去)，再移入100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此保留液A用於錳、六價鉻、汞的測定。
移取10mL試樣溶液(4.8.4.2)於定砷瓶中，加入20mL水。然後按工作曲線的繪制(4.8.4.1)中的b、c步驟操作，測定吸光度。
4.8.5分析結果的表述
以質量百分數表示的砷含量(x6)按式(6)計算：
x6=
mn×10-6
/
m×10/100
×100
=
mn×0.001
/
m(6)
式中：mn——從工作曲線上查得的砷含量，µg；
m——試料的質量，g；
4.8.6允許差
取平行測定結果的算術平均值作為測定結果；
平行測定結果的絕對差值，液體樣品不大於0.0001%，固體樣品不大於0.0002%。
參考資料：http://wenku..com/link?url=-A-re3Jsqj4qnsAw4c2VtyamzCshX73n-_4nyyGC